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1、8.3食品中常规项目的微生物检验E一一E二E一E二E二8.3.1食品中菌落总数的测定k菌落总数的定义k菌落总数:是指食品检样经过处理,在一定条件下培莽后,所得1g或1mL或1cm2表面积检样中所含细菌艾溶的总数。E一E二E二E一E二测定原理:不菌落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培养基成分,培养温度和时间,PH,需氧性质等),所得Imnl(g)检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果,只包括一群在培养琼脂上生长的啄中温性需氧的菌落总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。E一
2、E二E一E一E二实验二食品中细菌总数的测定一、实验目的1、学习或均技术的技术方法;2、掌握食品细菌总数的测定报告方式。二、实验材料1、电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、托盘天平、电炉、吸管、广口瓶,三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、试管架、酒精灯、均质器或乳钵、灭菌刀或剪刀、灭菌镊子、75%酒精棉球、玻璃蜡笔、登记蕹2、培养基和试剂:75%乙醇、生理盐水、15%氧氧化钠溶液、营养琼脂培养基E一一E二ESE一E二三、实验方法1、检验程序菌落总数检验程序:检样一做成几个适当借数的稀释液一选择2-3个适宜卷释度各以iml之量分别入灭菌平皿内一每皿内加入460C适量营养琼脂一菌落数一报告-一一-一一-一一-
3、一一-一一2、检样稀释及培养(1)以无菌操作,将检样25g(或25m1l)剪碎以后,放于含有225m1灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠或灭菌乳钛内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后,最好置灭菌均质器中以8000r/min“100000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。(2)用Iml顶萨服管吸取1,10稀租液tml,沿管壁徐徐注入含有9ml1灭菌生理盐水或其他稀释的试管内注意吸管尖端不要触及管内稀释液,下同),振摇试管混合均匀,做成1:100的稀释液。(3)另取1ml1的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀
4、释液,如此每递增稀释一次,即换用1支Iml1灭菌呆管。E二E二E一E一E二(4)根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择2一3个适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移Im1稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。(5)稀释液移入平皿后,应及时将凉至460C营养琼脂培养基可放置在(46土1)0C)水浴锅内保温注入平皿15m1一20mL,共转动平皿俭混合均匀,同时将营养琴康垮芸基倾入加有Im1l勃释液不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。(6等琼脂凝固后,翻转平板,置(36土1)0恒温箱内培养(48土2)h取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1g8(1mL)样品
5、所含菌落总数。E二E二E一E一E二3、菌落计算方法(1)菌落计数方法做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漪。在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。(2)菌落计数的报告Q平板菌落数的选择选取菌落数在30一300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菩落生长时,则不直采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余的一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落数;
6、如果有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。E一E一E一E一E二)稀释度的选择应选择平均菌落数在30一300之间的稀释度,乘以稀释借数报告之。若有两上稀释度,其生长的菌落数均在30一300之间,则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2,应报告其平均数;若大于2则报告其中较小的数字。若所有焯释度平沧菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释借数报告之。若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。E一刀EE一ESE一E二若所有稀释度的平均菌落数均不在30一300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的手均菌落数乘以稀释倍数报告Z节落数的报告菌落数在100以内时,按其实有数报告,大于100时,采用二位有教数守,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示。
