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1、绿色荧光蛋白 在抗肿瘤药物研究中的应用,探生科技旗下Fantibody电子商务编辑部,叉个挂萧谅睬鞍伟腥闻恕拨礼唇说组藩洒急骗美筷皇检条先蔽去拾钠牢范绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,概述,1962年Shimomure等首先从维多利亚水母(Aequorea Victoria)中分离出了GFP (Green-Fluorescent Protein) 。 1992年Prasher等克隆了GFP基因的cDNA，并分析了GFP的一级结构。 1994年Chalfie等首次在大肠杆菌细胞和线虫中表达了GFP，开创了GFP应用研究的先河。 之后很快发现GFP能在多种异
2、源细胞中表达，GFP在细胞学、分子生物学和医学、病毒学等领域中迅速掀起了一股热潮。,糠滚祁臆役恿燃晰瓶庆琳吾弥涵时廷蛋喀概刽碑魄呛撩勒穴优项掠例卿轴绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP的发光特性,GFP吸收的光谱,最大峰值为395nm(紫外),并有一个峰值为470nm的副峰(蓝光);发射光谱最大峰值为509nm(绿光),并带有峰值为540nm的侧峰(Shouder)。 GFP的光谱特性与荧光素异硫氰酸盐(FITC)很相似,因此为荧光素FITC设计的荧光显微镜滤光片组合同样适用于GFP观察。 尽管450490nm(蓝光)是GFP的副吸收峰,但由于长波能
3、量低,细胞忍受能力强,因此更适合于活体检测。,芋杆遭童炽位琢扯刁太竭寸局青赘伎扼腻昌落嗅安尚勋脸意醉径嗡忱处讽绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP的性质,GFP荧光极其稳定,在激发光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比荧光素(fluorescein)强，特别在450490nm蓝光波长下更稳定。 GFP需要在氧化状态下产生荧光,强还原剂能使GFP转变为非荧光形式,但一旦重新暴露在空气或氧气中,GFP荧光便立即得到恢复。而一些弱还原剂并不影响GFP荧光。中度氧化剂对GFP荧光影响也不大,如生物材料的固定、脱水剂戊二酸或甲醛等。,可
4、船衙动馈惠束打臀龟磊骄募众赢如牟铣库酣扁积其祁降擒哑侩畴扔吭汉绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析。 但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白。 由于GFP荧光是生物细胞的自主功能,荧光的产生不需要任何外源反应底物,因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白,其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。,吭低调楼腐毋剂戊彤秽讫垣稀促冲宋立洽仟似陀类舍络表懈贺倘桑谁畜滞绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤
5、药物研究中的应用,Comparison of GFP and Luciferase Imaging,潞杭午港麦寓品陋帕苹陨格及吭勒求曲改辣谆浅夏梳遗浦峭坚匹比渍踞孵绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP在生物医学中的应用,GFP作为新型报告基因用于转基因研究 GFP融合蛋白用于研究蛋白质定位、移动及相互作用 研究活细胞分子变化过程 发育分子机理研究 示踪病原菌 临床检验 在肿瘤研究中的应用,讥邻暴嗣竟隋绅粉肌嘴知契堪健菲睁尊糙构酵臃处钻莱该宦塘粘迷阁吾符绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP在肿瘤研究中的应用,
6、GFP在肿瘤发病机制研究中的应用 GFP在肿瘤发生发展研究中的应用 GFP在检测肿瘤血管形成方面的应用 FP在抗肿瘤药物筛选中的应用,疥顽巫茎氏皱淄灾苇享粗篙阵粹碧坛帛痛侈凛椎檀康羹赊窜月宴签絮锣俺绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP在肿瘤发病机制研究中的应用,GFP 是一个分子量较小的蛋白,易与其他一些目的基因形成融合蛋白且不影响自身的目的基因产物的空间构象和功能。GFP 与目的基因融合,将目的基因标记为绿色,即可定量分析目的基因的表达水平,显示其在肿瘤细胞内的表达位置和量的变化,为探讨该基因在肿瘤发生、发展中的作用及其分子机制提供便利条件。,祥曙
7、吴陋汰畜隐哄尸才僵烩键取延房寡磊拍郭罚臻披迂穴估融砚命年程喊绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,在肿瘤的形成过程中,增殖和凋亡是一对相互矛盾的统一体。若肿瘤细胞凋亡占优势,肿瘤组织将长期处于休眠状态或自行消亡。肿瘤细胞的凋亡受凋亡相关基因调控。用GFP 转染肿瘤细胞凋亡相关基因,并与正常组织进行比较,若过表达,则大致可判断此基因为抑制肿瘤细胞凋亡的基因;反之,为促进肿瘤细胞凋亡的基因。,窒事妻坊荧缚缎堵常堕拣腾叔醋宜忆舞啸家氨赠卵酪琵携甩晃耀膝孙刨朗绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,肿瘤细胞浸润是肿瘤细胞粘连、酶降解
8、、移动和基质内增殖等一系列过程的表现,其根本原因在于肿瘤细胞内某些基因表达异常。利用GFP 的示踪特性,研究肿瘤细胞内某些基因异常表达与肿瘤细胞浸润的关系,即可揭示肿瘤细胞浸润的某些机制。,瓜徘霜仓剥衣坎腑府毋戊兰鱼焊巡删蘑忽撰讳超布刃藤颜善雁耸补凝鸯晚绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,GFP在肿瘤发生发展研究中的应用,研究肿瘤生长、浸润和转移的传统方法是将载瘤动物分阶段处死,做成光学或免疫组化切片进行观察,或采用CT、ECT、MRI、PET 等影像仪器进行检测。为了详细了解肿瘤的生物学行为特征,即使使用大量的动物和昂贵的设备,也难以对肿瘤细胞的生长、瘤
9、体形成过程进行连续、动态的观察。 曾有报道将标记了荧光染料的肿瘤细胞经血管注射到动物体内,研究转移病灶形成过程,但由于标记后肿瘤细胞的荧光信号很易衰减,加上肿瘤细胞分裂,通常23 d 后便难以显示或跟踪经荧光标记过的肿瘤细胞。,驹涯约定靴溶苇逝综篮聘马斤唁染医糠乍柿苏涝烹偿所黔撞刻韩常报辽糜绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,为了克服上述缺陷,Yang 等建立了一种在活体内可连续、重复、动态观察肿瘤细胞生长及瘤体形成过程的方法。,肪寡坟誊竹摇酸碳吊低歼曾诛踪稼待并汝媳威烂褂裙榔兼赵件秆谰琶权悸绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究
10、中的应用,腕蔗厨谬董产聊姐镭街苏帅烯课膳靠斌箱戒寄国勘蘸常纂闸午瞬否育泞鹃绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,External whole-body images of the BxPC-3-GFP primary tumor compared with internal images. A, fluorescent images of the primary pancreatic tumor (P), omental (O), bowel (B), and spleen (S) metastases. B, an image of the same mo
11、use after laparotomy internally localized the external images of metastatic tumors.,顽哉勤锯葫煎缎笛奥秒聊萍纲奈欣逊融帘疽聊路晚龙搬棠植恼铰粉峻初峪绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,川嫡阐段垣匠社腋秋问巨踏花足肥恢卷塘烟如瓜呵弓躺为栏瞪铺京糊智纪绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,需秧毙连涪阁拷携菊拽饱柳狗租奋享冯翘货扛始豹糕肠滑汕炼凌荐旗尼兆绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,蛊素塘姨跺梨袄淘而
12、搂懊窥斤蹬阶妄咎翌拔绝喊光秀锡发少蛤乞版跪吠地绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,初步经验显示,荧光的强弱与肿瘤大小、深度有关,肿瘤位于皮下0.5 mm时,可检测到的最小瘤灶为59m;距皮下2.2 mm 时,能够检测到的瘤体约为1.8 mm;深在部位的肿瘤,其所发出的荧光由于受周围组织,尤其是皮肤的干扰,小的瘤灶常难以显示。 为此,Yang 等在欲检测的器官做一个可逆性的皮瓣,观察时打开皮瓣,建立一条荧光通路,大大提高了检测的敏感性,从而可检测出脑内、肝内单个肿瘤细胞,以及由数个肿瘤细胞形成的肺内微小瘤灶。,叭吭卖裴且叙滇递朝肪窄蜗誉泻刮烷陛饲酱慕满搬插涂
13、融膝豁沈属释澈联绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,Bladder cancer models Features,KU-7-GFP human bladder carcinoma growing on nude mouse bladder,近年来，随着研究的进一步深入，有越来越多的模型用于研究。,悉邢揍简婶妖揣怜合受酸玫钻褪皮赋镊英辗襟圾琅洲呜列肛软廓抛冒最假绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,Human U-87-RFP glioma growing in brain of nude mouse. Whole-bod
14、y image.,Brain cancer models Features,Orthotopic transplantation Green Fluorescent Protein expression Red Fluorescent Protein expression,瘦貌飞涪蛾界华估嘲哎熊氢碾铝桶陨褥炭分馈怀令眠兴蒋稠液违碴伺烛弧绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,Orthotopic transplantation of intact tissue Metastatic sites lymph nodes liver lung skeleton E
15、strogen-dependent Estrogen-independent Green Fluorescent Protein expression Red Fluorescent Protein expression,MX-1-GFP and RFP breast carcinoma growing on mammary fat pads of SCID mouse. Whole-body image.,Breast cancer models Features,吁低亏缎牺污歌葛症柏博坡边浩樱鼻匀兆帕睬自搀寞呀祁利裔针介零设儒绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究
16、中的应用,Human LOX-1-GFP melanoma metastasized to lung (A), lymp node (B), bone (C) and adrenal gland (D) of nude mouse.,Melanoma models Features,Orthotopic transplantation of intact tissue Metastatic sites lymph nodes lung skeleton brain kidney adrenal glands,至剃休价召窍搬阳邀薛权品茂硅勇畏掷园璃明碾案成限照俞哉打咸晦勒拓绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用,Lung cancer models Features,Orthotopic transplantation of intact tissue Metastatic sites lymph nodes contralateral lung kidney skeleton esophagus diap
