医学]抗核抗体谱医学生用的免疫学资料

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1、抗核抗体谱,吉林医药学院 07检本 刘海云,一、抗核抗体概念,传统：是以真核细胞的核成分为靶抗原的器官非特异性自身抗体的总称，属自身抗体中的一组抗体。 新概念：是指抗核酸和核蛋白抗体的总和。靶抗原包括细胞核、细胞质、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。,二、抗核抗体分类,1, 抗DNA抗体：ds-DNA、ss-DNA 2,抗组蛋白抗体：抗组蛋白亚单位H1、H2A、H2B、H3、H4及其复合物抗体。 3,抗DNA组蛋白复合物抗体：狼疮细胞、抗DNP抗体、抗核小体抗体 抗ENA抗体：Sm、SSA、SSB 4,抗非组蛋白抗体 抗染色体抗体：抗着丝点,二、抗核抗体分类,5,抗核仁抗体：抗RNA多聚酶/、原纤

2、维蛋白、NOR-90和Th/To等抗体。 6,抗其他细胞成分抗体：板层素、线粒体、高尔基体、溶酶体、肌动蛋白、波形纤维蛋白、原肌球蛋白、细胞角蛋白、纺缍体、中间体等。,三、抗核抗体检测方法,首选：间接免疫荧光法（IIF） 抗原底物片选择： 1、HEp-2细胞（人喉癌上皮细胞) 2、HeLa细胞（人子宫颈癌细胞） 3、Ehrlich（小鼠腹水癌细胞） 4、动物器官组织切片,HEp-2细胞优点：人源培养细胞，核抗原丰富、特异性强、含量高；核大、细胞结构清晰、易于荧光染色核型分析。 两种不同底物检测ANA的阳性率比较 疾 病 ANA检测阳性率（%） HEp-2细胞片 组织切片 系统性红斑狼疮（SLE

3、） 99 95 干燥综合症 85 70 系统性硬化 85 40 类风湿性关节炎 55 25 幼年性风湿关节炎 40 20,四、荧光模型,1，均质型：分裂间期细胞核质染色均匀一 致，分裂期细胞染色质阳性。 相关抗体：抗DNP、抗dsDNA、抗核小体 抗体 、抗组蛋白抗体。 2，斑点型：分裂间期细胞核质染色呈斑点状， 斑块状，核仁阴性， 分裂期细胞染色质阴性。 相关抗体：与抗溶性核抗原相关。,四、荧光模型,3，核仁型：分裂间期细胞核仁着染荧光，分 裂期细胞染色质阴性。 核仁颗粒型：与抗RNA多聚酶相关 核仁均质型：与PM-SCL相关 核仁点型（1-2点）：与抗NOR抗体相关 4，核膜型：分裂间期细

4、胞荧光染色在核膜周围，分裂 期细胞染色质阴性。 相关抗体：抗板层素抗体、gp-210抗体,四、荧光模型,5，着丝点型：分裂间期细胞核内均匀散布大 小较一致荧光颗粒（40-60）， 分裂期细胞染色质着丝点密集排列。 相关抗体：抗着丝点型抗体 6，胞质型：分裂间期胞质荧光阳性。 a,粗颗粒型（线粒体型）、 b,细颗粒型（核糖体） c,核质颗粒型（JO-1型）,四、荧光模型,7，混合型：两种或两种以上荧光染色模型。 解决方法：用不同稀释度血清检测。 8，少见模型：a,肌动蛋白型、 b,波形纤白蛋白型、 c,纺锤体型等。,五、ANA在各疾病中阳性率,疾 病 阳性率（%） 系统性红斑狼疮（SLE） 活动

5、期 95-100 非活动期 80-100 药物性狼疮（DLE） 95-100 混合性结缔组织病 （MCTD） 95-100 系统性硬化（SSc） 70-90 干燥综合症 （SS） 60-80,五、ANA在各疾病中阳性率,疾 病 阳性率（%） 多发性肌炎/皮肤炎（PM/DM） 40-60 类风湿关节炎（RA） 30-50 幼年类风湿关节炎（JRA） 20-40 慢性活动性肝炎（CAH） 10-20 重症肌无力（MG） 10-20 慢性淋巴性甲状腺炎 10-20 正常人 5-10,六、各型ANA临床意义及检测方法,抗DNA抗体 1、抗ds-DNA 临床意义 SLE诊断标准之一 活动期SLE阳性率8

6、0%-90% 未治疗SLE病人特异性90%，敏感性70% 抗体高水平伴补体低水平，提示狼疮性肾炎危险性大,SLE活动指标之一，用于监视SLE病情变化，活动期判断、药物治疗效果观察 检测方法 间接免疫荧光法（IIF）：短膜虫法、马疫锥虫法 放射免疫法（RIA） 酶联免疫吸附法（ELISA） 免疫印迹法（IB） 斑点金免疫渗滤法（DIGFA） 间接血凝法（PHA）,2、抗ss-DNA 临床意义 对疾病诊断缺乏特异性，SLE阳性率70%以上，DIL：60%-80%，MCTD：20%-50%，PM/DM：40-50%，SSc：14%，SS：13%，RA：8%。 非风湿疾病（慢活肝、细菌、病毒感染等）、

7、正常老年人也存在抗ss-DNA 一般不用于常规检测,抗组蛋白抗体（AHA） AHA的靶抗原是细胞核染色质中的组蛋白，为一组与DNA结合的含大量阳性电荷的小分子蛋白质，无种属及器官特异性，是染色质基本结构核小体的重要组织部分。 组蛋白可分5种：H1、H2A、H2B、H3、H4。 临床意义 AHA可以在多种结缔组织病中出现，不具有诊断特异性。,仅有AHA抗体而不伴有其他ANA（抗ssDNA除外），强烈支持DIL诊断，IgG型AHA更有利于DIL诊断。 检测方法 ELISA法检测总的AHA IB法检测组蛋白亚单位多肽抗体,抗DNA组蛋白复和物抗体 1、狼疮细胞 临床意义 LE细胞在活动性SLE中阳性

8、率50%-80%，在缓解期和治疗后性率低。 在SS、MCTD、慢活肝、结核、肾炎、白血病中亦可见到LE细胞。 检测方法 显微镜镜检，1994年美国临床病理协会明确提出LE检查是一项过时（废弃）的试验,抗DNA组蛋白复和物抗体 2、抗DNP抗体 临床意义 阳性主要见于SLE，活动期阳性率80%-90%，非活动期20%左右。 其它结缔组织病阳性率低于10%，且部分合并SLE 检测方法 胶乳凝集法，阴性不能排除SLE,抗DNA组蛋白复和物抗体 1、抗核小体抗体 核小体含4种核心组蛋白，形成组蛋白八聚 体，占据核小体顶部，通过联结DNA与相邻 核小体连接。 临床意义 该自身抗体产生早先于其它抗体，与肾

9、小球肾炎有关。多见于活动性狼疮。 在SLE中诊断敏感性58%-71%，特异性高达7%-99%。,检测方法 主要应用ELISA法,抗可提取性核抗原抗体 1、抗Sm抗体 临床意义 抗Sm抗体是公认的SLE标记抗体，在SLE中阳性率20%-40%，对早期、不典型的SLE或经治疗缓解后SLE回顾性诊断有意义 检测方法 常用IB法、条带（斑点）印迹法。国外常用ELISA法。IB法显色区带为28000、29000、13500上。IF法常显示强斑点型荧光。,2、抗U1RNP 临床意义 混合性结缔组织病阳性率95%,SLE30%-40%，SS14%，SSc12%,PM/DM15%。抗体阳性患者常与肌炎、食道蠕

10、动功能低下、雷诺现象、关节痛、指硬化、间质性肺炎相关。肾炎发病率低。 检测方法 常用IB法、条带（斑点）印迹法。国外常用ELISA法。IB法显色区带为70000、32000、17500上。IF法常显示强斑点型荧光。,3、抗SS-A抗体 临床意义 原发性SS中阳性率40%-95%,SLE20%-60%，SSc24%,PBC20%。抗体阳性可引起亚急性皮肤型狼疮（SCLE）；IgG类抗体通过胎盘可引起新生儿狼疮综合症（NLE），造成先天性心脏传导阻滞。 检测方法 常用IB法。国外常用ELISA法。IB法显色区带为52000（多见于SS）、60000（多见于SCLE）。IF法常显示阴性或弱斑点型荧光

11、。,4、抗SS-B抗体 临床意义 是SS的血清特异性抗体，原发性SS中阳性率65%-85%,SLE10%-15%，且大多为SLE合并SS。亦可引起新生儿狼疮综合症（NLE），造成先天性心脏传导阻滞。 检测方法 常用IB法。国外常用ELISA法。IB法显色区带为45000、47000、48000（更有特异性）IF法常显示阴性或弱斑点型荧光。,5、抗核糖体抗体（抗-rRNP抗体） 临床意义 是SLE的血清特异性抗体，阳性率10%-40%。具有脑炎和精神病症状的SLE患者， 抗-rRNP抗体的敏感性56%-90%。 检测方法 常用IB法。国外常用ELISA法。IB法显色区带为38000、16500、

12、15000。IF法细胞分裂间期HEp-2细胞胞质呈非常致密、均匀细颗粒样荧光，核仁呈细颗粒或均质型荧光。,6、抗ScL-70抗体 临床意义 是系统性硬化（SSc) 的血清特异性抗体，诊断SSc的特异性为100%，敏感性40%。 检测方法 常用IB法。国外常用ELISA法。IB法显色区带为86000、70000。IF法细胞分裂间期HEp-2细胞胞质呈弱的细颗粒样到均质型荧光，核仁呈细颗粒或均质型荧光。,7、抗Jo-1抗体 临床意义 是多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM） 的血清标记性抗体，在PM/DM中阳性率20%-30%，在合并肺间质病变病人中阳性率高达60%。抗Jo-1对肌炎的诊断特异性95%，

13、抗体效价与疾病活动性、CK水平有关。 检测方法 常用IB法。国外常用ELISA法。IB法显色区带为55000。IF法细胞分裂间期HEp-2细胞胞质呈细颗粒样到均质型荧光。,8、抗增殖性细胞核抗原（PCAN）抗体 临床意义 是SLE 的血清标记性抗体，但敏感性较低，仅3%-6%，与SLE活动性及弥漫增殖性肾小球肾炎相关。 检测方法 常用免疫扩散法（ID）及IIF法。IIF中HEp-2细胞分裂间期细胞核部分（约半数）呈现明亮的细颗粒样荧光，另一部分呈现阴性或较弱的细颗粒样荧光。,9、抗Mi-2抗体 临床意义 是肌炎高度特异性抗体（97%），成人DM（15%-25%）幼年型DM（10%-15%）PM

14、/DM（5%-10%）。抗体阳性患者95%有皮肤病变，多表现为V型及“围巾”型皮疹与表皮增生，对治疗的反应及预后较好。 检测方法 IIF中HEp-2细胞分裂间期呈细胞核强细颗粒荧光，核仁弱阳性，胞质完全阴性。,10、抗类风湿关节炎核抗原（RANA）抗体 临床意义 靶抗原是一种与EB病毒感染有关的酸性可溶性蛋白质，存在于EB病毒感染的B淋巴细胞内，在RA中的阳性率40%-60%，抗体滴度高。 检测方法 IIF以含有EBV基因组的人淋巴细胞作为抗原底物检测，阳性时表现为大多数细胞核及胞质内分布均匀密集的细小颗粒型特异性荧光。ELISA法是以人工合成的P62多肽作为靶抗原进行检测。,11、抗P80螺

15、旋蛋白抗体 临床意义 靶抗原是核质中螺旋小体相关联的80000核蛋白和小核糖核蛋成分，又称抗核少点抗体。抗P80螺旋蛋白抗体可见于干燥综合症（4%）、原发性胆汁性肝硬化和慢性活动性肝炎。 检测方法 IIF法多表现为分裂间期细胞的细胞核核质1-6个分散的圆点状荧光染色，有丝分裂期细胞浓缩的染色体区为阴性。,12、抗SP100抗体 临床意义 靶抗原为分子量100000的可溶性酸性磷酸化核蛋白。抗SP100抗体对原发性胆汁性肝硬化有较高的敏感性和特异性，在PBC患者中阳性率10%-30%，其它肝病均阴性。在AMA阴性患者中阳性率（60%）显著高于AMA阳性者（20%）。 检测方法 IIF法多表现为分裂间期细胞的细胞核核质6个以上大小不等分散的圆点状荧光染色，有丝分裂期细胞浓缩的染色体区为阴性。,抗染色体DNA蛋白抗体-抗着丝点抗体 简介 ACA靶抗原为着丝点蛋白，位于在细胞分裂时与纺缍体相互作用的动原体的内板与外板上。通常分4种：着丝点蛋白A（CENT-A，17000）、着丝点蛋白B（CENT-B，80000）、着丝点蛋白C（CENT-C，140000）、着丝点蛋白D（CENT-D）。主要靶抗原