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1、实验四 放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别,主 讲:徐尔尼 生命科学学院生物技术系,一、目的与要求 学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。 初步了解放线菌的形态特征。 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习鉴别酵母菌死活细胞的方法。 掌握酵母菌的形态特征及其与细菌的区别。,二、基本原理 1、放线菌形态 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段向空中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。 插片法是将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表
2、面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检，这种方法可观察到放线菌自然生长状态下特征，而且便于观察不同生长期的形态。,二、基本原理 2、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖、少数以裂殖进 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代 谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无 色的，而死细胞或代谢作用
3、微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和淡 蓝色。,三、实验器材 1、菌种：链霉菌、酿酒酵母、裂殖酵母、假丝酵母 2、染色剂： 0.05%吕氏碱性美蓝染色液 3、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、接种环、盖玻片、显微镜、擦镜纸、滤纸等,四、操作步骤 1、放线菌形态 用镊子小心拔出盖玻片 擦去背面培养物将有菌的一面盖玻片朝上 置于干净的载玻片上 镜检 操作要点： 宜用略暗光线观察。 先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。,四、操作步骤 1、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别 1）在载玻片上滴加0.05%吕氏碱性美蓝染色液 挑取少许酵母菌，与染液混匀，盖上盖玻片 立刻镜检 放置3min后镜检 放置10mi
4、n后再次镜检，观察颜色变化 操作要点： 染液不宜过多或过少，否则影响观察。 盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。 先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。,五、实验数据及处理结果 1、绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征。 2、绘图说明你所观察到的酿酒酵母菌、假丝酵母的形态特征，及出芽方式。 3、绘图说明你所观察到的裂殖酵母菌的形态特征，及无性和有性繁殖方式。,六、思考与讨论 1、镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝。 2、在显微镜下，酵母菌与细菌有何异同？ 下次实验项目：霉菌的形态观察 注意：带上镊子和解剖针,链霉菌,基内菌丝,孢子丝,气生菌丝,酿酒酵母,假丝酵母,子囊,子囊孢子,芽细胞,裂殖,
