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1、如何选择HPLC溶剂,斯百全化学（上海）有限公司 400-856-0488 +86-21-64220086,高效液相色谱法（HPLC）,20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术 目前已成为生物化学、医学研究、药物临床、化学化工、食品卫生、环保检测等领域最常用的化学分离分析手段 1、定性分析 2、定量分析（用于化合物含量及纯度分析） 简单来讲，使用HPLC分析的主要目的在于分离一个混合物中各个组分，并定量出各组分在混合物中所占的比重。 工作过程： 通过高压泵， 连续的将流动相按照一定流速流过柱子；通过进样器，注入样品混合物。由于混合物中各组分性质不同，因而它们在柱內移动速度不同
2、而逐渐分离。通过检测器检测，得到组分的电信号并进行放大；记录仪将放大的电信号以图形形式记录下来，由此得到液相色谱图。,高效液相色谱法（HPLC）,分离原理： 溶于流动相（mobile phase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationary phase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滯留时间不同，从而先后从固定相中流出,在色谱分析中，如何选择最佳的 色谱条件以实现最理想分离， 是色谱工作者的重要工作， 也是用计算机实现HPLC 分析方法建立和优化的任务之一,高效液相色谱法（HPLC）,HPLC分离指标 分离度：无论是定性鉴别还是定量分析，
3、均要求待测峰与其它峰、內标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。不一定是两种待测物的分离度，而有可能是它们与其最接近的干扰物的分离度。应当尽量保证1.5，2.0比较理想，再大也可以，但沒太大意义。 峰型：窄而对称的峰最为赏心悦目，这也是保证良好分离度的因素，同时有利于定量的准确和良好的重现。（拖尾引子：通过计算5%峰高处峰宽与峰顶点至前沿的距离比来评价峰形的参数。） 塔板数：和半峰宽相关。半峰宽越小，塔板数越大，峰就越窄，分离越好。究竟要多大，应以良好的分离为准。 保留时间：要求的是重现性，是色谱定性的依据，同时也決定了分析时间 RSD(标准偏差）2 正确选择流动相直接影响检测结果和仪器的损
4、耗！,高效液相色谱法（HPLC）,液相色谱系统的很多问题都能在谱图上反映出來，其中一些问题可以通过改变 设备参数得到解決，而其它的问题必须通过修改操作程序来解決。,对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键！,HPLC溶剂的要求,（1）高纯度，溶剂与固定相不互溶，并能保持色谱柱的稳定性 由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度要求也高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”）。 （2）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性，即足够的溶解能力 溶剂的极性要与待测样品相匹配，如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响纯化分离，且会使柱子恶化。,(3）溶剂要与检测器匹配 对于U
5、V-Vis，所用流动相在检测波长下应沒有吸收或吸收很小 （4）化学稳定性好 不能选与样品发生反应或聚合的溶剂 (5）低粘度，沸点适中 减小溶质的传质阻力，降低柱压，利于提高柱效。 常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙腈等；粘度过低的溶剂也不宜采用，如戊烷、乙醚等，易在色谱柱或检测器內形成气泡，影响分离,HPLC溶剂的要求,HPLC溶剂关键性能,UV吸收性 HPLC级试剂是用特殊方法生产的含有最少的颗粒和最低的紫外吸收物质，除去具有吸收UV的杂质，在规定的波长上吸光度限制在规定值以內。 梯度洗脱性能 在一个分析周期內程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异
6、较大的复杂样品。 采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度 溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能作为梯度洗脱的流动相。 当有机溶剂和缓冲液混合时，可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特別小心 纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。 防止压力过大。 混合溶剂的粘度常隨组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。 例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多。,SpectrumHPLC溶剂特点,超越ACS标
7、准 低紫外吸收背景 低水分，低蒸发残渣 提供良好的梯度性能 不同批次产品的质量稳定 随货附全套检测报告,HPLC溶剂的选择,反相液相色谱 （柱效高、分离能力强、保留机理清楚，是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种。适用于非极性-中等极性组分） 固定相：极性小的烷基键合相 C8柱，C18柱 流动相：流动相极性 固定相极性 极性大的甲醇-水或乙腈-水,HPLC溶剂的选择,反相液相的流动相一般用水或缓冲液，常加入有机改善剂，如：甲醇、乙醇、四氢呋喃、二氧六环、异丙醇等与水互溶的有机溶剂以调整保留时间，也常加入离子对试剂使被測組分与反离子形成中性离子对以改善分离。 分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少
8、量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。 能够作为液相色谱流动相使用的溶剂有100多种，但实用的溶剂只有少数几种。 一般情況下，甲醇-水系统可以满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小，价格低，是反相色谱最常用的流动相。乙腈性能优于甲醇。 在实验室中有了甲醇、乙腈、水、四氢呋喃、正己烷、异丙醇、二氯甲烷，就能够解決9O以上的色谱分离问题。,SpectrumHPLC溶剂,SpectrumHPLC溶剂,Spectrum HPLC缓冲试剂 Spectrum HPLC Buffers,Spec
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11、ological buffers, culture media, molecular weight markers, nucleic acid derivatives, serum products, stains and tracking dyes.,General Catalog,Include 15,000 fine chemicals and 120,000 equipments & supplies,A comprehensive offering of Reagents, chemical ingredients, laboratory supplies, and equipment available for Scientific Research,USP/NF, FCC catalog,Includes Controlled Substances Schedules II-V,Cosmetic catalog,Bulk catalog,Product function is available,Largest selection of prepackaged production sizes available from stock.,Thank You !,斯百全化学（上海）有限公司 400-856-0488 +86-21-64220086 ,
