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1、第四章 培养基的制作,第一节 母种培养基制作,第二节 原种、栽培种培养基制作,第三节 液体菌种制作技术,教学目的：熟练掌握各级培养基 的制作方法 。,教学重点：培养基的制作方法 。,第一节 母种培养基的制作 一、菌种培养基 (一)按营养物质种类分类 l.天然培养基 常用的生物材料有马铃薯、胡萝卜、蚕蛹粉、豆芽汁、花生饼粉、玉米粉、酵母等。适合于各类微生物的生长 2.合成培养基 是指用已知成分和数量的化合物配制而成的培养基。适用研究 3.半合成培养基 利用天然物质作为碳、氮源及维生素的来源另加一些无机盐类配制而成,(二)按培养基的物理状态分类 1.液体培养基 不加琼脂，多用于生理生化方面研究,培
2、养 液体菌种等。 2.固体培养基 凝固剂的量,琼脂冬季为1.5%-2.0%,夏 季2.2%-2.3%。 3.半固体培养基 含有较少量琼脂(0.2%-0.5%)的培养基, 使培养基未达到固态而呈粘稠状态。,二、母种培养基配方：,1.土豆200g、糖20g、琼脂18g、水1000ml 2.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18-20g、水1000ml、PH值自然，另外添加：麸皮20g、玉米面5g、黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，VB11片（10mg）。此配方适用于大多数菌种，金针菇、黑木耳、灵芝生长尤其茁壮。可作黑木耳复壮培养基。 3.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18-20g
3、、水1000ml、PH值自然，另外添加：麸皮20g、玉米面5g、黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，VB11片（10mL），平菇子实体100g。此配方适用于大多数菌种生长。做平菇的复壮培养基效果显著。 4.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18-20g、水1000ml、PH值自然，另外添加：麸皮20g、玉米面5g、黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，VB11片（10mg）1片，香菇子实体100g。此配方适用于大多数菌种生长，可做香菇的复壮培养基，效果显著。,（一）营养液制作 1. 准备工作,三、制作方法,2. 称量、材料预处理 按配方准确称量各营养物质。将马铃薯去皮、挖掉芽眼后称量
4、200g，切成1cm见方的小块。琼脂剪碎后用水浸泡。,3. 熬煮 将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中，煮至酥而不烂。,4. 过滤、加可溶药物 用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中加 入糖,5. 熬琼脂、定容 在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为止，定容至1000ml。,（二）营养液分装 1. 用注射器分装 2. 分装标准:分装量为试管长度的1/41/5。注意培养基不能沾污试管口。,3.塞棉塞 棉塞松紧适度，1/3在管外，2/3在管内。 4.扎捆 7-10支试管捆在一起，棉塞上包好防水纸，直立放入高压灭菌锅中。,(四) 摆斜面 灭菌结束后锅盖开1/5的小缝，用余热烘干报纸和 棉塞，然后摆
5、斜面。斜面长是试管总长的1/2,（三）灭菌处理 在1.01.5 kg/cm2压力下维持20-30min。,(四) 摆斜面 灭菌结束后锅盖开1/5的小缝，用余热烘干报纸和 棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/2,第二节 原种、栽培种培养基制作,一、常见原种配方,木屑培养基配方 细木屑80%，麸皮12%，玉米面1%，黄豆粉2%，过磷酸钙1.5%，红糖0.5%，尿素0.4%，硫酸镁0.1%，石灰1%，石膏2%，料：水=1：1.0-1.2。此配方适合香菇、黑木耳、平菇原种生长，菌丝粗壮洁白。 玉米芯培养基配方 玉米芯80%，麸皮14%，糖0.5%，过磷酸钙1%，石灰2%，尿素0.5%，玉米面2%，
6、料：水=1：1.4-1.5。此配方适合于培养平菇原种，菌丝生长速度快，且菌丝粗状。,玉米芯、木屑混合培养基配方 玉米芯42%，木屑20%，豆秸20%，麸皮10%，过磷酸钙1.5%，石灰2%，石膏1%，糖0.5%，玉米面3%，料：水1=1：1.4-1.5。此配方适合于培养平菇原种。生长健壮，也可培养金针菇，滑子蘑原种。 软质木屑配方 椴木屑75%（木线厂下脚料，颗粒较大），麸皮15%，玉米面5%，石膏1.5%，石灰1%，糖0.5%，过磷酸钙1.5%，尿素0.5%，料，水=1：1.2左右。适用于金针菇，滑子蘑等分解基质能力较弱的品种使用。,麦粒、木屑培养基配方 新鲜、优质小麦80%，阔叶树木屑20
7、%，木屑：水=1：1左右，拌木屑用煮小麦水，或在此基础上，加入总量0.5%的过磷酸钙，0.5%的蔗糖,1%的石灰，在麦粒煮好后连同木屑拌入。 玉米粒培养基配方 优质新鲜玉米100%，或后期加入0.5%过磷酸钙，0.5%的糖,1%的石灰。 玉米粒培养基制作的原种，具备麦粒原种的优点，后劲更足，接种扩繁量更大。,二、原种培养基的制作方法 一、谷粒培养基制作 1.按配方称量各营养物质 配方一：优质新鲜小麦65%，木屑15%，棉籽壳15%，麸皮5%，石膏1%，过磷酸钙0.5%，糖0.5%，尿素0.5% 2.谷粒浸泡吸水 冬季浸泡24-48小时，夏季加1%石灰（以防变酸）浸泡24小时，隔夜换水。,3.
8、煮沸、沥干捞出 泡好后，漂洗干净（去杂），煮至饱胀 无白心，切忌煮开花，沥干水分后捞出。 4. 拌料 用煮小麦水拌木屑、棉籽壳、麸皮，最 后再一起与麦粒拌匀。,5.装瓶 (1)装料量应为1/3或1/2罐头瓶，便于培养 时摇动基料促进丝均匀生长。 (2)擦净并封瓶口 封口塑料袋采用规格为13cm13cm0.004cm 高压聚丙稀袋，二层，里层在中央剪一3cm宽 菱形口。至少二个皮套。,6.装锅灭菌 高压灭菌于126左右维持2小时；常 压灭菌于100维持10-12小时，夏季时间 可酌情延长。 7.出锅 、冷却 冷却至30以下待接种。,二、.木屑、玉米芯料培养基制作方法 1.按配方称料。 2.拌料：
9、干混（将石膏和不溶于水的主料和 辅料混匀）；湿混（将石灰和溶于水的辅料 制成母液，加入所需水量稀释后拌料）。,装瓶：闷1-2个小时（夏季时间不宜过长） 待料充分吸足水后装瓶，装料至瓶肩，上紧下松 压平料面，擦净瓶口，打1.5cm粗接种孔至瓶底 封口。 灭菌：同谷料培养基制作 出锅、冷却：同谷粒培养基制作,三、栽培种制作 制作方法基本同于原种制作。需要注意 的是栽培种培养基制作一般选用加富的培养 料，而且含水量要较原种加大，更利于菌种 快速吃料。容器可以用500ml罐头瓶，也可 以用（17-18）X（30-35）X（0.04-0.05）cm 低压聚乙烯袋。,第三节 液体菌种制作技术 一、液体菌种
10、制作的原理 食用菌液体菌种制作是在发酵罐中，采用液 体培养基通入无菌空气并加以搅拌，增加培 养基中溶氧含量，提供食用菌菌体呼吸代谢 所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，获 得大量的菌丝体或代谢产物。,二、液体菌种制作的特点 1.原料来源广泛 2.菌丝体生长快速 3.生产周期短 食用菌深层发酵一般仅需2-7d就可获得大量的菌丝体， 而固体培养则需30-60d。 4.工厂化生产、无季节性 食用菌深层发酵是在发酵罐内、控制最佳条件来培养菌 体的，不受季节性限制。,三、液体菌种制作的用途 1.生产液体菌种 食用菌经深层发酵2-7d的幼嫩菌丝体，可以用来作为食用菌栽培用的原种和栽培种。,2.制备药物或提
11、取生化制品 许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药物成分或生化制品的材料。,3.制作食品或畜禽饲料,四、液体菌种制作的主要设备 1.摇床 往复式播床：振荡方式为来回振荡 旋转式摇床：振荡方式为旋转,四、液体菌种制作的主要设备,2.种子罐和发酵罐 许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药物成分或生化制品的材料。,四、液体菌种制作的主要设备,3.空气净化设备 4.培养基连续灭菌设备 包括配料罐、连消塔、维持塔、喷淋冷却器等。 5供气设备 主要是蒸气锅炉及附属设备,五、液体菌种制作的主要工艺 1.种子制备 种子制备的目的是大量繁殖足够数量的、健壮的、高纯度的种子,斜面菌种制备
12、。,摇瓶种子制备 一级、二级种子制备 一级种子罐通常为50-100L，二级种子罐为500-1000L。,六、液体菌种制作的主要参数 1.菌龄 菌龄与种子的活力密切相关。通常，摇瓶种子菌龄控制在4-10d，一级种子和二级种子菌龄为48-96H。 2.接种量 一般地，食用菌深层发酵时的接种量为10-20%。 3.温度 通常在22-30生长最快，得率最高。,4.通气量 食用菌深层发酵的通气量以0.2-1.5通气体积/培养液体积/min为宜。 5.搅拌速度 食用菌深层发酵的搅拌速度一般是180-500r/min。 6.酸碱度 不同种类的食用菌都有一个最适酸碱度，例如，黑木耳的最适pH为6.0-6.5、金针菇为6.3、香菇为4.5-6.5。,7.罐压 在发酵过程中罐压通常为0.2-0.7Kg/cm。 8.泡沫控制 在发酵过程中泡沫过多不利于发酵，目前大多数是加入0.006%的泡敌做消泡剂消除泡沫。 9.发酵特点 发酵终点是否准确，应参考产物浓度、过滤浓度、氨基酸含量、残糖量、菌丝形态、pH、发酵液的外观和粘度等因素才能决定。,
