酵母菌的分离及鉴定

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1、 56 西 北 师 范 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 )Journal of N o rthw est N o rm al U niversity (N atural Science) 第 33卷 1997年 第 2期V o l133 1997 N o12 3 甘 肃 省 自 然 科 学 基 金 资 助 课 题收 稿 日 期 : 1996- 12- 16酵 母 菌 的 分 离 及 鉴 定 3冯 克 宽 王 明 谊 曾 家 豫(西 北 师 范 大 学 生 物 系 兰 州 730070)第 一 作 者 简 介 冯 克 宽 , 男 , 58岁 . 1959年 毕 业 于 西 北 师 范 大

2、学 生 物 系 , 现 为 该 系 副 教 授 . 主 要 研 究 方 向为 纤 维 素 酶 及 乳 酸 菌 .中 图 法 分 类 号 Q 939摘 要 从 新 疆 吐 鲁 番 所 采 的 土 样 中 分 离 出 的 3株 编 号 为 Sy 952001、 Sy 942002、 Sy 942003的 酵 母 菌 株 ,通 过 形 态 和 生 理 生 化 试 验 , 初 步 鉴 定 为 : 克 洛 克 酵 母 属 (K loeckea sp. )、 假 丝 酵 母 属 (Cand id a) 的 热 带 假丝 酵 母 (T rop icaeis)、 类 酵 母 属 (S accharom y c

3、od es)的 中 国 类 酵 母 (sinensis).关 键 词 酵 母 菌 分 离 鉴 定 热 带 假 丝 酵 母酵 母 菌 (yeasts) 广 泛 分 布 于 自 然 界 , 与 人 类 有 着 密 切 关 系 . 人 们 在 日 常 生 活 中 早 就 将 酵 母菌 应 用 于 制 造 酒 类 饮 料 , 以 及 用 来 生 产 乙 醇 、 甘 露 醇 、 有 机 酸 和 甘 油 等 1 , 近 年 来 由 于 生 产 和 科学 技 术 的 迅 速 发 展 , 酵 母 菌 的 应 用 愈 来 愈 显 得 广 泛 .随 着 世 界 人 口 的 增 加 , 解 决 人 类 的 食 物

4、和 能 量 问 题 已 成 为 关 键 性 问 题 , 酵 母 因 蛋 白 质 含 量高 可 以 用 来 制 造 食 用 酵 母 和 饲 料 酵 母 , 因 而 其 资 源 开 发 潜 力 很 大 , 国 外 十 分 重 视 这 一 方 面 的 开发 和 利 用 , 如 前 苏 联 利 用 各 类 不 同 废 物 发 酵 生 产 单 细 胞 蛋 白 (SCP) , 年 产 可 达 120万 t, 而 我 国需 要 量 虽 大 , 但 生 产 量 远 远 赶 不 上 生 产 实 际 的 需 要 , 因 此 不 断 筛 选 SCP 产 生 菌 也 就 成 为 生 产中 的 关 键 问 题 1 .笔

5、 者 对 吐 鲁 番 土 样 中 所 筛 选 的 3株 酵 母 菌 , 通 过 形 态 、 生 理 生 化 特 征 鉴 定 , 确 定 到 种 , 以 进一 步 研 究 其 应 用 价 值 .1 材 料 与 方 法 21. 1 材 料新 疆 吐 鲁 番 和 火 焰 山 附 近 土 样 .1. 2 培 养 基( 1) 麦 芽 汁 培 养 基 ; (2) 葡 萄 糖 酵 母 膏 蛋 白 胨 培 养 基 ; (3)M cclary 培 养 基 ; (4) 玉 米 粉 培 养基 ; (5)糖 发 酵 基 础 培 养 基 ; (6)同 化 碳 源 基 础 培 养 基 ; (7)同 化 乙 醇 基 础 培

6、 养 基 ; (8)同 化 氮 源 基础 培 养 基 ; (9) 杨 梅 苷 培 养 基 ; (10) 产 类 淀 粉 培 养 基 ; (11) 产 酯 培 养 基 ; (12) 无 维 生 素 基 础 培 养基 ; (13)尿 素 分 解 培 养 基 ; (14)需 维 生 素 培 养 基 ; (15)高 渗 培 养 基 ; (16)明 胶 培 养 基 ; (17) 石 蕊牛 奶 培 养 基 .1. 3 步 骤分 离 纯 化 试 验 , 根 据 生 态 条 件 采 集 土 样 , 富 集 培 养 . 纯 化 采 用 稀 释 分 离 和 平 板 划 线 , 性 能 测定 采 用 形 态 学 特

7、 征 和 生 理 生 化 实 验 相 结 合 的 方 法 .2 结 果 与 讨 论2. 1 形 态 学 特 征1) 细 胞 形 态 学 观 察 . 将 分 离 菌 种 接 种 于 麦 芽 汁 液 体 培 养 基 , 25 28 培 养 3d 观 察 (见 表1).2) 特 征 的 培 养 观 察 . 将 分 离 菌 种 分 别 接 种 于 麦 芽 汁 液 体 培 养 基 、 固 体 培 养 基 , 28 培 养3 d 观 察 (见 表 1).3) 子 囊 孢 子 的 形 成 . 将 鉴 定 菌 株 接 种 于 M cclary 培 养 基 上 , 25 28 培 养 3 5 d, 涂 片 在显

8、 微 镜 下 观 察 (见 表 1).4) 假 菌 丝 形 成 . 新 培 养 物 划 线 接 种 于 玉 米 粉 琼 脂 培 养 基 上 , 25 28 培 养 3 5d 观 察(见 表 1).5) 大 小 测 定 . 用 测 微 尺 在 显 微 镜 下 测 定 (见 表 1).2. 2 生 理 生 化 特 征进 行 下 列 各 项 试 验 :1) 糖 发 酵 试 验 . 在 D u rhau is tabe 分 装 12. 5% 豆 芽 汁 为 糖 发 酵 基 础 培 养 基 , 灭 菌 加 10% 糖液 使 糖 浓 度 达 2% , 棉 子 糖 4% , 接 种 , 25 28 培 养

9、2 10 d.2) 碳 源 同 化 . 生 长 谱 法 测 碳 源 同 化 , 28 培 养 1 2 d, 液 体 培 养 基 测 醇 的 同 化 , 28 培 养 3 7 d.3)氮 源 同 化 . 基 础 培 养 基 分 别 加 入 0. 78% KNO 3 (N H 4) 2SO 4, 接 种 , 28 培 养 2 3 d.4) 分 解 杨 梅 苷 试 验 . 将 菌 种 接 入 杨 梅 苷 培 养 基 , 28 培 养 5 7 d.5) 产 类 淀 粉 化 合 物 测 定 . 采 用 固 体 法 , 28 培 养 7 d.6) 产 酯 测 定 . 用 5% 葡 萄 糖 培 养 基 ,

10、28 培 养 3 5 d.7) 牛 奶 冻 化 . 脱 脂 牛 奶 培 养 基 接 种 , 28 培 养 7 14 d.8) 无 维 生 素 培 养 基 中 生 长 试 验 . 将 菌 种 接 入 无 维 生 素 培 养 基 , 28 培 养 1 2 d.9) 需 维 生 素 测 定 . 生 长 谱 法 28 培 养 1 2 d.10) 耐 渗 透 压 . 制 50%、 60% 葡 萄 糖 、 1% 酵 母 膏 琼 脂 培 养 基 划 线 接 种 , 25 28 培 养 714 d.11) 尿 素 分 解 试 验 . 制 备 尿 素 分 解 培 养 基 , 接 种 , 25 28 培 养 3

11、5 d.12) 明 胶 液 化 试 验 . 制 备 明 胶 培 养 基 , 穿 刺 接 种 , 25 以 下 培 养 7 d.13) 37 培 养 试 验 . 最 高 、 最 适 、 最 低 温 度 常 为 某 些 菌 种 的 鉴 定 特 征 之 一 , 一 般 常 以 37 作为 测 定 酵 母 生 长 的 温 度 . 将 菌 种 接 种 于 固 体 培 养 基 , 37 培 养 1 2 d.上 述 试 验 结 果 见 表 1和 表 2.由 表 1 和 表 2 所 示 的 各 项 试 验 结 果 来 看 , 可 知 Sy 952001菌 株 细 胞 卵 圆 形 , 为 两 端 芽 殖 , 无

12、子 囊 孢 子 ; 它 发 酵 葡 萄 糖 , 不 发 酵 乳 糖 、 半 乳 糖 、 麦 芽 糖 、 蜜 二 糖 、 蔗 糖 和 棉 子 糖 ; 碳 源 同 化 葡751997年 第 2期1997 N o12 冯 克 宽 等 : 酵 母 菌 的 分 离 及 鉴 定T he iso lation and identification of yeast表 1 酵 母 菌 种 的 鉴 定 结 果菌 株 (号 )形 态 特 征 生 理 特 征糖 发 酵 糖 同 化菌落醭膜细胞形态细胞大小无性繁殖方式假菌丝子囊孢子葡萄糖乳糖半乳糖麦芽糖蜜二糖蔗糖棉子糖葡萄糖乳糖半乳糖麦芽糖蔗糖纤维二糖蜜二糖海藻糖鼠李

13、糖D阿拉伯糖L阿拉伯糖菊糖棉子糖D-木糖可溶性淀粉山梨糖Sy 952001乳白具环卵圆8 14 5芽殖两有 无 + - - - - - - + - - + V + - - - - - - V - + -Sy 942002奶油色具环具醭卵圆形75芽殖两有 无 + - + + - + - + - + + + V - + - - - - - + + VSy 942003白色具环椭圆1714芽殖两无 有 + - + - - - +( ) + - + - - - - - - - - - - - - -表 2 酵 母 菌 种 鉴 定 结 果菌 株 (号 )生 理 特 征氮 源 同 化 醇 类 同 化KNO

14、3NH42SO4乙醇甘油山梨醇卫矛醇赤藓醇甘露醇阿东醇肌醇核醇培养基上生长在无维生素其 它 维 生 素 需 要牛奶反应油脂分解硝酸盐还原尿素分解明胶液化于37生长杨梅苷生类淀粉耐高渗透压生物素维生素B1维生素B2维生素B6维生素B12叶酸泛酸钙对氨基苯甲酸Sy 952001 + + + - - - - - + - - - + - - - + + + + + - + + + +Sy 942002 - + + + + - - + + - V V + + - - + + V + V - - - - -Sy 942003 + + + + - + - - - - - - + - - - + + - +

15、- - - - - - + + +萄 糖 、 麦 芽 糖 , 不 同 化 乳 糖 、 半 乳 糖 、 蜜 二 糖 、 海 藻 糖 、 鼠 李 糖 、 阿 拉 伯 糖 和 山 梨 糖 ; 氮 源 同 化KNO 3和 (N H 4) 2SO 4; 醇 类 同 化 乙 醇 和 阿 东 醇 ; 37 生 长 ; 牛 奶 和 杨 梅 苷 反 应 阳 性 ; 在 需 维 生 素B 1、 B 2、 B 6、 B 12上 生 长 ; 耐 渗 透 压 . 根 据 以 上 特 点 鉴 定 为 真 菌 门 半 知 菌 亚 门 D eu te2om yco tina, 芽孢 菌 纲 B lastom ycetes 隐

16、 球 酵 母 目 Cyp tococcates, 隐 球 酵 母 科 Cyp tococcaceae 克 洛 克 酵 母 属K loeckera sp. 3Sy 942002菌 株 细 胞 卵 圆 形 , 两 端 芽 殖 , 液 具 环 , 有 醭 , 无 子 囊 孢 子 ; 玉 米 粉 培 养 基 载 片 培 养时 , 可 见 大 量 的 假 菌 丝 ; 发 酵 葡 萄 糖 、 蔗 糖 、 麦 芽 糖 、 半 乳 糖 , 不 发 酵 乳 糖 、 蜜 二 糖 、 棉 子 糖 ; 碳 源同 化 葡 萄 糖 、 蔗 糖 、 麦 芽 糖 、 半 乳 糖 、 海 藻 糖 、 D 2木 糖 , 不 同 化 乳 糖