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1、09:57:00,第三章液相色谱分析法,一、影响分离的因素factors influenced separation二、分离类型的选择choice of separation types三、液相色谱的应用application of HPLC四、液相制备色谱preparative liquid chromatography,第四节影响分离的因素与操作条件的选择,high performance liquid chromatograph,factors influenced separation and choice of operation condition,09:57:00,一、影响分离的
2、因素 factors influenced separation,1. 影响分离的因素与提高柱效的途径 在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一,则速率方程中的分子扩散项B/U较小,可以忽略不计,即: H = A + C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同,如图所示。,09:57:00,液体的黏度比气体大一百倍,密度为气体的一千倍,故降低传质阻力是提高柱效主要途径。 由速率方程,降低固定相粒度可提高柱效。,液相色谱中,不可能通过增加柱温来改善传质。恒温 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。,09:57:00,2.流速,流速大于0.5 cm/s时, Hu曲线是一段
3、斜率不大的直线。降低流速,柱效提高不是很大。但在实际操作中,流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。,3.固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱,其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中,分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作,一般很少自行制备。,09:57:00,二、分离类型选择 choice of separation types,09:57:00,三、 HPLC的应用 application of HPLC,1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相:薄壳型硅胶(37 50m) 流动相:正己烷 流 速:1.5 mL/min 色谱柱:50cm2.5mm(内径
4、) 检测器:差示折光检测器,可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。,09:57:00,2. 稠环芳烃的分析,稠环芳烃多为致癌物质。,固定相:十八烷基硅烷化键合相 流动相:20%甲醇-水 100%甲醇 线性梯度淋洗,2%/min 流 速:1mL/min 柱 温:50 C 柱 压:70 104 Pa 检测器:紫外检测器,09:57:00,四、制备型液相色谱 preparative liquid chromatography,获得高纯物质(色谱纯)的有效方法。 半制备柱(内径8mm,长度15 30cm),一次制备量.1mg;,1.色谱柱的柱容量(柱负荷) 对分析柱:不影响柱效时的最大进样量; 对制备柱:不影响收集物纯度时的最大进样量; 超载:进样量超过柱容量。柱效迅速下降,峰变宽。 超载可提高制备效率,以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。,09:57:00,2. 液相制备色谱的方法,收集组分时,通常有以下情况: (1)可获得良好分离,主峰 使用制备柱,超载提高效率; (2)两主成分之间的小组分; 超载,分离切分使待分离组分成为主成分(富集)后,再次分离制备。,09:57:00,3. 制备型液相色谱,制备型液相色谱:结构与分析型一样,但泵流量大、进样量大、采用制备柱;柱后馏分收集器。 制备柱:内径2050mm,柱长50cm。,