《姬松茸多糖对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《姬松茸多糖对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡的影响（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、28Suzuki t, Ikeda K, Koyama N,et al.Inhibition of human parainfluenza virus type 1 sialidase by analogs of Neu5Ac2en. Glycoconj J, 2001, 18(4):331-337. 29Hayakawa T, Satta Y, Gagneux P, et alAlu-mediated inactivation of the human CMP - Nacetylneuraminic acid hydroxylase gene. Proc Natl Acad Sc, i 20
2、01, SA 98: 11399-11404. 30Konoshin Onodera. Sialic acid and related substances. AgrBiolChem, 1966, 30(11):1170-1172. 31HartG J, BethellR C. 2,3-Didehydro-2, 4-dideoxy-4- guanidino-N-acetyl-Dneuraminic acid (4-guanidino- Neu5Ac-2en) is a slow-binding inhibitorof sialidase from influenzaA and influenz
3、a B virus. Biochemistry and Molecular BiologyInternationa, 1995, 36:695-703. Research Progress of Biological Activity of Sialic Acid and Its Application WEI Dong-xu1,2，JIANG Lian-zhou1，WANG Chen1，WANG Zhong-jiang1 (1 College of Food science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China; 2
4、 Heilongjiang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Harbin 150001, China) Abstract: The source of sialic acid and its purification methods, testing methods, biological activity and application in food, medicine and other aspects were reviewed and its future development was discussed. Keywords
5、: sialic acid；biological activity；testing method；application progress 糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy， DR)是糖 尿病的主要慢性并发症之一，也是常见的视网膜血管 病，其发病机制尚不十分明了。细胞凋亡在DR发生发 展中的作用已逐渐受到大家的重视。姬松茸（Agaricus blazei Murill） ，为蘑菇科蘑菇属真菌，其蛋白质和糖类 含量非常丰富，姬松茸多糖作为其主要有效成分，具有 增强机体免疫力、抗肿瘤、抗病毒、降血糖等作用1-2。 本实验对姬松茸多糖对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作 用及其
6、机制进行了初步研究，为临床应用姬松茸多糖治 疗糖尿病视网膜病变提供理论及实验依据。 基金项目：黑龙江省教育厅科学技术研究项目（编号：11511427）。 作者简介：杨旭东（1974 ），男，河北省秦皇岛人，硕士，研究方向为药物的药理与毒理。 姬松茸多糖对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡的影响 杨旭东，张 杰，崔荣军 （牡丹江医学院，黑龙江牡丹江 157011） 摘 要：目的：探讨姬松茸多糖对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用及其作用机制。方法：将Wistar大鼠随 机分为5组，A：正常对照组；B：模型组；C：8姬松茸多糖组；D：4姬松茸多糖组；E：2姬松茸多糖组。8 周后，琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡，RT
7、-PCR观察Bax基因、Survivin基因的表达。结果：与模型组比较，姬松茸 多糖组视网膜细胞凋亡明显减少，Survivin表达上调，Bax表达降低。结论：姬松茸多糖对糖尿病大鼠视网膜组织保 护作用的机制可能与抑制视网膜组织细胞凋亡及上调Survivin基因，降低Bax基因表达有关。 关键词：姬松茸多糖；细胞凋亡；Bax基因；Survivin基因；糖尿病视网膜病变 中国食物与营养 2011,17(7):68-70 Food and Nutrition in China 1 实验材料 1.1 实验动物 健康Wistar大鼠雌雄各半，体重200-220g。 1.2 主要试剂 Trizol、 DE
8、PC（美国Gibco公司） ， RT-PCR试剂盒（大 连宝生物有限公司） ，链脲佐菌素（美国 Sigma 公司） 。 2 实验方法 2.1 大鼠模型的制备、分组 随机选取大鼠50只，其中40只，给与高热量饮 食8周后，尾静脉一次性注射STZ注射剂15mg/kg。剩 余10只，给与基础饲料8周后，注射相同体积的柠檬 酸钠-柠檬酸缓冲液。注射2d后，内眦静脉丛采血，以 11.1mmol/LFBG33.3mmol/L且伴有糖耐量减退者为 大鼠模型成功标准。将造模成功的大鼠随机分为4组： B组：模型对照组、C组：8姬松茸多糖组、D组：4 姬松茸多糖组、E组：2姬松茸多糖组。继续高脂高 糖饮食12周。
9、A组：正常对照组（喂饲基础饲料的10 只） 。 2.2 给药方法 皮下注射姬松茸多糖灭菌溶液0.15mL/只。 2.3 检测方法 2.3.1 DNA ladder检测视网膜组织细胞凋亡 取冻存视网膜组织磨成粉末，加50L细胞裂解 液， 37水浴过夜后，室温下以12 000 r/min离心5min， 取上清移。用等体积的酚氯仿异戊醇混合液（体 积比25241）和氯仿各抽提1次。在上清液中加入 1/10体积3mol/L的醋酸钠和2倍体积的冷乙醇， -20沉 淀过夜， 4 12 000r/min离心10min，弃上清。晾干，加 20LTE缓冲液，1LRNA酶，37下放置1h，加4L样 品缓冲液， 1
10、.8的琼脂糖凝胶，电压2V/cm，电泳1 2 h。 2.3.2 RT-PCR测定视网膜组织Survivin、Bax mRNA表达 Survivin引物，上游：5-TTGGCAGGTGCCTGTTGA AT-3 ；下游：5 -AGCCAGTCCCC CACAGCAT-3，扩增片段329bp。Bax引物，上 游：5 -GTTTCATCCAGGATCGAGC-3 ； 下 游： 5 -GGAAGTCCAATGTCCAGC-3，扩增片段345bp。 -actin上游引物：5 -TTGCCTCTC AGACAATGCCTG-3；下游引物：5 -TCGCTCCTGG AAGATGGTGAT-3，扩增片段28
11、0bp。反应条件为： 95预变性2min，94 45s，55退火1min，72延伸 1min， 35个循环， 72 复性5min。经凝胶成像系统分析， 得出Survivin、Bax mRNA的相对表达量。 附图 各组DNA ladder情况 2.4 统计学分析 计量数据以均数标准差（Xs）表示，数据用 SPSS 11.0软件包处理，多组间数据比较采用方差分析。 3 结果与分析 3.1 各组大鼠的一般情况及症状比较 正常对照组大鼠精神状态良好，体重逐渐增加，饮 食、饮水量正常。模型组大鼠一般状况较差，体毛无光 泽，脱毛，反应迟钝，精神萎靡。造模3d即出现多饮、 多食、多尿。姬松茸多糖各组大鼠精神
12、状况、体重增长 介于正常对照组和模型组之间，亦表现 “三多一少”症 状，后期经药物治疗症状明显缓解。 3.2 各组视网膜组织细胞凋亡情况 细胞发生凋亡后，电泳出现“梯状”图谱（ladder） ， 与 Marker相比， ladder中条带的bp数为180-200bp的整 倍数。正常对照组：DNA电泳后只出现一条距加样孔 很近的大分子条带，电泳无ladder出现，所以发生凋亡 的细胞数非常少。糖尿病模型组：DNA电泳后ladder颜 色较深，发生凋亡细胞数明显增多。姬松茸多糖高、中 剂量组：只出现一条距加样孔很近的大分子条带，电泳 无ladder出现，发生凋亡的细胞数减少。姬松茸多糖低剂 量组：
13、出现较短的ladder，发生凋亡细胞数增多（附图） 。 Marker A组 B组 C组 D组 E组 3.3 各组大鼠视网膜组织Bax、Survivin表达 与模型组比较，姬松茸多糖各组大鼠视网膜组织 Bax基因mRNA表达降低，Survivin基因mRNA表达增 加（P0.01） （附表） 。 附表 各组大鼠视网膜组织Bax，Survivin mRNA 表达的情况（xs） 组别nBax /-ActinSurvivin /-Actin A100.120.010.560.05 B100.580.04*0.280.02* C100.240.02*#0.420.04*# D100.390.03*#0.
14、350.03*# E100.460.03*#0.310.02*# 注：*与正常对照组比较，P0.01；#与模型组比较，P0.01 69第7期杨旭东等：姬松茸多糖对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡的影响 4 讨论 糖尿病视网膜病变是糖尿病最主要的并发症之一， 已有研究表明，细胞凋亡与糖尿病视网膜病变密切相 关。细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细 胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞 凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一 系列基因的激活、表达以及调控等的作用。Bcl基因家 族是重要的凋亡调控基因，包括抑凋亡基因Bcl-2、 Bcl- xl和促凋亡基因如Bax、Bak、Bcl
15、-xs等3。Bax在多种 细胞凋亡调控中发挥重要作用。Bax的促凋亡作用是通 过与自身形成Bax/Bax同源二聚体的形式发挥的，Bax 促进细胞凋亡的机制可能是与增高Caspase-3活性有关， Bax是Caspase-3活化的重要调节因子4。 Survivin基因作 为凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein， IAP）家 族的成员5，对细胞凋亡和细胞周期的基因调控具有重 要的作用， Survivin与效应细胞死亡蛋白酶Caspase-3和 Caspase-7结合，抑制它们的活性和细胞凋亡，是迄今发 现最强的凋亡抑制因子6。 实验结果表明：姬松茸多糖具有抑制
16、糖尿病大 鼠视网膜组织细胞凋亡的作用。姬松茸多糖能上调 Survivin基因表达，并下调Bax基因表达。综上所述， 姬松茸多糖延缓和阻止糖尿病视网膜组织的损害，其作 Effect of Agaricus blazei murill Polysaccharide on Apoptosis in Retina Cell of Diabetic Rats YANG Xu-dong, ZHANG Jie, CUI Rong-jun (Mudanjiang Medical College, Mudanjiang 157011, China) Abstract: 【Objective】 To investigate the effect and mechanism of Agaricus blazei Murill（ABM） polysaccharide on retina tissue of di
