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1、,AFP（甲胎蛋白）临床应用及检测,黄崇庭 2016.6.15于柳州,甲胎蛋白（AFP）,甲胎蛋白： 又称甲种胎儿球蛋白，甲型胎儿蛋白，是一种糖蛋白，属于白蛋白家族，正常情况下，来自胚胎的肝细胞和卵黄囊，胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液中消失，正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20微克升。 发现AFP： 由Bergstrand和Czar于1956年在胎儿血清中发现，而前苏联的Abelev则于1963年发现AFP的来源主要为卵黄囊和胎盘； Tatarinov于1964年在原发性肝癌患者中发现了高浓度的甲胎蛋白，之后的大量研究证明甲胎蛋白是原发性肝癌（PHC）重要的血清学标志物，并作为PHC诊断、评价
2、疗效给予后的敏感指标应用于临床。,AFP理化性质和生理作用,理化性质 甲胎蛋白( Alpha-Fetal Protein，AFP) 是一种糖蛋白，分子是单一多肽链，属于白蛋白家族，其主要在胎儿时期的卵黄囊和肝脏细胞中合成，分子量约为6 800 D。AFP 中蛋白质占96%，碳水化合物占4%。 生理作用 一、胚胎性白蛋白 二、生长调节因子 三、配体结合及运输 四、免疫抑制、T淋巴细胞诱导凋亡,AFP在临床中的应用小结,1、在产检及儿科疾病中的应用； 2、原发性肝癌敏感的血清学标志物； 3、AFP在肿瘤治疗中的应用 4、作为急性肝功能衰竭患者预后的标志 5、在其他肿瘤中的应用；,1、AFP在产检及
3、儿科疾病中的应用,AFP在胚胎发育期由胎儿卵黄囊和肝脏大量合成, 至妊娠12 wk左右, 卵黄囊退化, 胎儿肝脏成为合成的主要场所.胎儿时, 其血清浓度很高(1-10 g/L), 出生后12-18 W，AFP浓度逐渐降至10 g/L以下. AFP可用作筛查神经管缺陷、非整倍体的实验室标志物。在神经管缺损、脊柱裂、无脑儿等病理情况下, AFP可由开放的神经管进入羊水, 导致其在羊水中含量显著升高。先兆子痫、妇婴输血、宫内发育迟缓、胎儿死亡, AFP均有所升高。如果新生儿AFP明显升高, 提示新生儿肝炎、先天性胆道闭锁或有能分泌AFP的胚胎性恶性肿瘤等. 神经管畸形 脊柱裂,先兆子痫,胎儿死亡,新
4、生儿肝炎 先天性胆道闭锁 恶性葡萄胎,AFP水平下降表明存在染色体异常(非整倍体), 如三体, 以及Turners综合征、脑 积水、胎儿生长受限等。,唐氏综合症 脑积水,2、AFP作为原发性肝癌血清标记物,肝癌（liver cancer）是指发生于肝脏的恶性肿瘤，死亡率较高，由肝脏内的细胞所引发的癌病，称之为“原发性肝癌”，由身体其他器官的癌症转移到肝脏而形成的肝脏恶性肿瘤，称为继发性肝癌，也称“转移性肝癌”。 原发性肝癌根据组织学分类可以分为“肝细胞型”、“胆管细胞型”和“混合型”。初期症状并不明显，晚期主要表现为肝痛、乏力、消瘦、黄疸、腹水等症状。中国是乙肝大国，我国的肝癌多在乙肝肝硬化的
5、基础上发展而来，丙肝病人也在逐渐增加，乙肝后也会发展为肝癌。,肝癌按肿瘤形态基本分型,1、块状型： 2、结节型 3、弥漫型 4、小肝癌,肝癌诊断一般过程,动态观察AFP含量的变化,AFP含量大于400g/L,影像学检查 （B超、CT及磁共振成像等）,肝癌,持续一个月以上,怀疑,确诊,肝癌肿瘤标记物,肝癌肿瘤血清学标记物包括： AFP：是目前使用最广，最经典的原发性肝癌特异性标记物。 GP73： 是一种跨膜糖蛋白，在研究成人巨细胞性肝炎病原体时首次发现。在正常肝 脏组织，GP73 主要表达于胆管上皮细胞，而在肝细胞则无表达或表达很少，但在HBV 及腺病毒感染的肝组织中，肝细胞高表达GP73，但胆
6、管细胞表达不明显示。早期肝癌GP73在敏感度和特异度优于AFP，有望成为新的更有效的标记物。 SF ：是人体含铁最丰富的一种棕色蛋白复合物，存在网状内皮系统如肝、脾、骨髓等处。当肝癌挤压肝细胞使之坏死或肝癌伴有肝硬化时，储存于肝脏中的SF 大量流入血循环中，引起血清SF 升高。铁蛋白有H 和L 两种亚基形式，H 亚基和铁的亲和力小，L 亚基和铁亲和力大，正常人肝脏的铁蛋白是以L 亚基为主，而肝癌患者肝脏的铁蛋白是以H 亚基为主。H 亚基铁蛋白亦被称作酸性铁蛋白( AIF) ，被视为一种肝细胞癌的标志物。 AFU ：是一种溶酶体酸性水解酶，广泛分布于人体各种组织及体液中，其中以肝、肾等组织活性较
7、高，细胞内的AFU 主要位于溶酶体内。AFU对小细胞肝癌及AFP 阴性的肝癌诊断价值较大，其血清水平与肿瘤大小无关，升高幅度与AFP 无相关性。国内有研究者对24 例肝细胞癌患者进行血清AFU和AFP 相关研究，发现AFU 诊断敏感性为87%，特异性为78%，而AFP 则分别为68% 和89%，提示AFP 诊断的敏感性高但特异较AFP 低，联合检测可提高肝癌的早期诊断率。,根据AFP肝癌的诊断标准是：,AFP定量400ng/ml持续一个月以上. 凡SGPT正常，AFP200ng/ml持续8周。并能排除妊娠、活动性肝炎、生殖腺胚胎性肿瘤，即可诊断肝癌。 但不是所有肝癌患者AFP水平者都是增高的，
8、约 70% 左右肝癌病人 AFP 阳性。所以AFP不高，亦不能否定肝癌。,大量临床研究表明，慢性肝炎和肝硬化患者，AFP常呈低浓度增高（200ng/ml）并持续阳性（低持阳）。低持阳1年内肝癌出现率为44%49%，表明早期表达AFP 的肝细胞是癌前病变的征象之一，AFP可成为肝癌化学预防的依据。,早期肝癌与非癌肝病的鉴别诊断,在非恶性肝病中约有15%51%慢性肝病及33%急性肝炎AFP含量超过正常水平，两者鉴别如下: SGPT 数倍于正常者多为活动性肝病，如SGPT200单位以上者，以肝炎可能性为大，而SGPT400ng/ml者多为肝癌。 肝癌AFP定量呈上升曲线，肝病则随病情稳定AFP降至正
9、常。,AFP在肿瘤细胞中高效特异性表达, 因此将外源治疗基因或细胞因子置于AFP特异性启动子或增强子的下游, 原发性肝癌中特异性的反式作用因子作用于该启动子, 激活转录, 实现目的基因的选择性表达,可克服原发性肝癌基因治疗有效性低、不良反应大的弊端。 AFP可以作为抗癌药物结合物的载体. 依据肿瘤细胞表面AFP受体过表达, 将AFP与细胞毒性药物偶联, AFP通过受体介导的胞吞途径结合并选择性地进入肿瘤细胞,从而将结合的药物特异性地送到靶细胞发挥作用, 且对于由于膜受体和/或转运体的高表达而引起耐药的人类肿瘤细胞具有较高的疗效。,3、AFP在肿瘤治疗中的应用,4、作为急性肝功能衰竭患者预后的标
10、志,重型肝炎患者在发生肝细胞炎症坏死后能否有效的再生，与其预后有关，AFP增高者，预后较好。 原因在于 （1）AFP能促进肝细胞生长因子受体表达, 从而促进肝细胞增殖、 分化、再生； （2）AFP出现于有丝分裂旺盛的肝细胞和(或)幼稚肝细胞，在急性 病毒性肝炎、活动性慢性乙型肝炎和肝硬化时, AFP升高标志肝 细胞再生活跃； （3）AFP具有促进细胞增殖的作用。,（1）各种源于内胚层的胃肠道肿瘤； （2）内胚窦瘤(卵黄囊瘤)； （3）生殖细胞癌等；,5、AFP在其他肿瘤中的应用,总结血清甲胎蛋白阳性增高的原因,肝癌 （阳性率80-90%）,随着病情恶化它在血清中的含量会急剧增加,急性肝炎 慢性
11、肝炎 肝硬化,孕妇; 其他肿瘤的肝转移,一过性升高 随着病情的恢复，血清甲胎蛋白值会下降,生殖细胞肿瘤 阳性率50%,AFP阳性,AFP应用注意事项,1、部分肝硬化病人会长期出现AFP达到上千，但多年都没有肝癌的迹象。 2、同时发现约20%的晚期肝癌病人，直至病故前，AFP仍不超过10。 3、AFP与肿瘤大小有一定的相关性，即肿瘤越小，阳性率越低。 4、AFP也与病理类型相关，癌细胞分化I级和II级，AFP相对较低，级时相对较高。,AFP目前的检测方法,1、化学发光免疫分析( CLIA) 是采用现代全自动仪器操作控制，单克隆抗体标记发光物质吖啶酯或碱性磷酸酶促化学发光最新的微磁粒子标记反应的技
12、术，是光的高灵敏性、单克隆抗体高特异性结合的自动化、智能化程序的现代免疫定量技术。目前以电化学发光免疫分析为代表，实现了免疫测定的自动化，具有测定结果稳定、线性范围宽、测定速度快、试剂保存期长等优点，但检测成本高。 2、时间分辨荧光免疫分析法( TRFIA) TRFIA 的基本原理是以具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合物为标记物，用时间分辨荧光免疫分析检测仪测定最后产物中的荧光强度，根据产物荧光强度和相对荧光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分析的目的。TRFIA同样需要昂贵的检测仪器，检测的成本也高，不适合用于筛查大范围人群血清AFP。 3、放射免疫分析( IA) 具有较高
13、的灵敏度和检测的准确度，可以满足临床检测要求，且检测成本较适中，但该法采用放射性元素标记抗体，试剂中存在放射性物质环境污染的潜在危险性及标记物半衰期短，保存时间短，批间差异大的缺点。,4、酶法检测( ELISA) 多采用双抗体夹心法的反应原理检测待测样本中AFP 含量，包括定性试验和定量检测，操作简单，具有较高的灵敏度，不需要特殊的仪器，检测费用低，适合自然人群早期肝癌的普查，是发现早期肝癌的重要手段之一。不足之处是检测过程中影响因素较多，重复性不高，检测范围较窄，定性试验结果的判断受主观人为因素的影响，每次定量检测必须做标准曲线。 5、金标快速检测 以胶体金作为指示标记，交联-AFP 单克隆
14、抗体，与血清中AFP 结合，形成双抗体夹心一步法，是当前国际上最简便理想的AFP 检测方法。金标法是一种定性的检测方法，具有简单、方便、快速的特点，不需要使用仪器进行辅助，仅凭肉眼就可以对检测结果进行观察，十分有利于健康体检筛查中应用。其优点是在检测AFP 上具有较高的特异性、准确性、检测成本低、检测时间短、操作人员无需特殊的培训即可完成检测，不足之处是敏感性不高，无法定量检测。 6、透射比浊法 将AFP抗体吸附于乳胶颗粒上，通过抗原抗体形成免疫复合物，造成吸光度变化，实现了生化仪测定的自动化，具有测定结果稳定、线性范围宽、测定速度快、试剂保存期长等优点，而且检测成本高，与发光相关性好。,Thank you!,祝愿每个人都有一个健康的肝脏,
