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1、维生素类药物的分析,2018/12/10,2,本章要求,掌握不同维生素的结构特点和主要性质 掌握维生素A、B、C、E的主要分析方法 了解维生素类药物分析方法的操作要点,VitA、D2、D3、 E、K1 等,脂溶性,水溶性,VitB族 (B1、B2、B6、B12、泛酸、叶酸) VitC、烟酸、烟酰胺,维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质 人体不能合成维生素,-H 维生素A醇 -COCH3 维生素A醋酸酯 -COC15H31 维生素A棕榈酸酯,R :, 维生素A,（维生素A1、视黄醇）,环己烯,共轭多 烯侧链,UV 多异构体 易被氧化,结构分析,维生素A 325.5 100% 新维
2、生素Aa 328 75% 新维生素Ab 320.5 24% 新维生素Ac 310.5 15% 异维生素Aa 323 21% 异维生素Ab 324 24%,相对生物效价,环氧化物,VitA醛,VitA酸,三氯化锑反应 UV TLC, 鉴别试验,1. 三氯化锑反应,条件 无水（使得三氯化锑水解） 无醇（使得碳正离子电荷消失）,不稳定碳正离子,5个共轭双键 max为326nm 一个吸收峰,2. UV法,6个共轭双键 max为350390nm 三个吸收峰,溶剂：无水乙醇-盐酸（100:1）,紫外分光光度法 三氯化锑比色法 HPLC法, 含量测定,“三点校正法”由来, UV法（三点校正法）,测定依据：分
3、子结构中共轭多烯体系，具有紫外吸 收特性，在325-328nm呈现选择性吸收,但是混有多种杂质（异构体、氧化产物等杂质）在310340nm波长范围内有吸收干扰紫外测定 故采用“三点校正法”消除干扰, 1、杂质的吸收在310340nm范围内呈一条直线 随波长的增大而吸收度变小, 2、物质对光的吸收具有加和性 即样品各波长的吸收度是维生素A与杂质 吸收度的代数和,测定原理,选择在三个波长处测定吸光度， 结合校正公式计算A校正，再计算含量,波长（三点）选择 （1） 1 VitA的max（328nm） （2） 2 3 分别在1的两侧各选一点 第一法 第二法,测定对象: VitA醋酸酯, 第一法 等波长
4、差法,1 = 328nm 2 = 316nm 3 = 340nm,测定波长 300、316、328、340、360,等波长差法 校正公式,测定对象: VitA醇, 第二法 等吸收度法(皂化法),1 = 325nm 2 = 310nm 3 = 334nm,等吸收度法（6/7吸收度法）校正公式,测定波长 300、310、325、334,第一法无法消除杂质干扰时用此法,维生素A含量是用生物效价表示 单位 IU/g（国际单位）,换算因数,计算要求,1g维生素A醋酸酯相当的国际单位数为,1g维生素A醇相当的国际单位数为,(VitA酯),(VitA醇),换算因数,第一法测定维生素A醋酸酯时，换算因素为19
5、00,第二法测定维生素A醇时，换算因素为1830,换算因数由纯品计算而得,应用：维生素A胶丸的测定，求标示量,A328或A 328校正, 维生素E,生育酚,R1、R2均为CH3 R1、R2为H和CH3 R1、R2均为H,生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10,（天然品）,（合成品）,乙酰化（生育酚醋酸酯）,结构：dl生育酚醋酸酯,游离生育酚,水解,维生素E, 硝酸反应, 鉴别试验,邻醌结构,7515, 三氯化铁联吡啶反应,弱氧化剂,原理,利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈, 杂质检查,铈量法检查游离生育酚,1 : 2,反应摩尔比,硫酸铈滴定液（0.01mol/L）,二苯胺
6、（亮黄灰紫）,药典规定,取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，用（0.01mol/L）硫酸铈液滴定，消耗硫酸铈液1.0ml，限量2.15, 含量测定, GC法,特 点,选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制,ChP 维生素E原料及其制剂,气相色谱法 ChP 内标法加校正因子 内标物 正三十二烷 固定相 硅酮（OV17） 检测器 氢火焰离子化检测器,供试液（样品+内标）,对照液（对照+内标）,内标法加校正因子,校正因子：,含量计算：,BP GC 内标 正三十二烷 R1.4,USP GC 内标 十六酸十六醇酯 R1.0,JP HPLC 外标 d
7、l生育酚 R1.4,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),HCl,Cl-, 维生素B1,盐酸硫胺,还原性,与生物碱 非水碱量法,ChP, 鉴别试验, 硫色素反应,碱性,VitB1,H+,H+,H+,H+, 沉淀反应,非水溶液滴定法 UV法 硫色素荧光法, 含量测定, 非水溶液滴定法,滴定前需加入过量醋酸汞溶液(为什么？) 噻唑环上的季铵和嘧啶环上氨基，反应摩尔比1：2,ChP 原料药, UV法,共轭双键结构，UV特征 紫外吸收峰随pH变化而变化,溶剂 pH max 水 7 232-3 345 盐酸 2 246 421,ChP 片剂、注射剂,含量计算,（每片）相当于标示量的%=,（每ml）相当于标示
8、量的%=,UV,己糖结构 -内酯, 维生素C,L抗坏血酸,烯二醇 强还原性,酸性, 鉴别试验,与氧化剂的反应 糖类的反应 UV, 与氧化剂的反应,与2,6 - 二氯靛酚反应,ChP（2010）,与碱性酒石酸铜反应,与KMnO4反应,与AgNO3反应,ChP（2010）, UV,BP,0.01mol/L HCl,碘量法 2,6 - 二氯靛酚滴定法 HPLC, 含量测定,淀粉指示液，终点至蓝色不消失,原理, 碘量法,具有较强还原性，可被氧化,H+,反应摩尔比11,（原料、片剂、注射液）,方法,Vc +新沸放冷H2O + 稀HAc 溶解 立即用标准I2滴定至Blue,淀粉指示液,讨论,焦亚硫酸钠,计
9、算,V注射剂,原料药、片剂、注射剂 ？,1,例：维生素C注射液（规格2ml：0.1g）的含量测定：精密量取本品2ml，加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.1003mol/L）滴定，至溶液显兰色并持续30秒钟不褪，消耗10.56ml。每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。计算维生素C注射液的标示量%。, 2,6 - 二氯靛酚滴定法,USP,JP,原理,方法,快速滴定 2min内,酸性环境 HPO3-HAc,稳定VitC,防止其他还原性物质干扰 并非维生素C的专一反应,讨论,例,多种维生素片中VitA、 V
10、itB1、VitB2 、VitB6 、烟酰胺、VitC、VitE的含量测定,色谱柱 ODS 流动相 A、水 -甲醇（4 ：1） B、甲醇 检测波长 272nm 280nm, HPLC法,对象 制剂、生物样品、果汁,梯度洗脱,一、维生素A（共轭多烯侧链）的三氯化锑鉴别反应和三点校正法测定含量的原理、波长选择方法、生物效价,二、维生素E（水解还原性）的鉴别试验，游离生育酚的检查，GC的应用,三、维生素B1（杂环、碱性、还原性）的硫色素鉴别反应，非水滴定、紫外法测定含量的应用,四、维生素C（烯二醇、还原性、酸性）的2,6 - 二氯靛酚、硝酸银鉴别反应, 碘量法的原理与注意事项、与二氯靛酚法的比较, 知识点回顾,
