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1、性传播疾病实验室相关检查,目的,加强沟通,一、概述 二、重点介绍艾滋病、梅毒、淋病、非淋菌性尿道炎、生殖器疱疹、软下疳的临床检测方法的选择及临床意义；,概述,历史上：（传统） 把通过性活动传染的疾病称为性病 （Venereal diseases, VD） 主要指: 梅毒(syphilis) 淋病(gonorrhea) 性病肉芽肿 软性下疳四种 又称经典性病,概念更新,上世纪年代以来发现 许多病原体也可以通过性生活传播 概念有了大幅度的更新 迄今为止大约已发现余种性病 同时： 四种性病大都有了明确诊断手段及治疗方法，明显地得到了抑制,性病的发病“顺位谱”，有了变化，鲜为人知的性病提前，而久为人知
2、的性病占到了后位 1970年，世界卫生组织把旧名称“性病”改为“性传播疾病”。 （Sexually transmitted diseases, STD）,性病（VD）： 是指通过性交传染的、具有明显生殖器损 害症状的全身性疾病。4种 性传播疾病（STD）： 是指通过性接触可以传染的一组传染病,在 我国,人们简称为性病 。包容20余种,病毒,生殖器疱疹 单纯疱疹病毒(HSV) (主要由HSV-2引起) 生殖器CMV感染 巨细胞病毒(CMV) 乙型肝炎 乙型肝炎病毒(HBV) 甲型肝炎 甲型肝炎病毒(HAV) 尖锐湿疣 人乳头瘤病毒(HPV) 生殖器传染性软疣 传染性软疣病毒 获得性免疫缺陷综合征
3、(AIDS)人类免疫缺陷病毒(HIV),非细菌性微生物,性病性淋巴肉芽肿 (CTL型引起) 非淋菌性尿道(宫颈) 炎 沙眼衣原体(CTDK型引起) 解脲支原体（UU） 人型支原体(MH) 生殖道支原体(GU) 梅毒 梅毒(苍白)螺旋体(TP),细菌,淋病 奈瑟淋病双球菌(NG) 腹股沟肉芽肿 肉芽肿荚膜杆菌(DG,CBG) 软下疳 杜克雷嗜血杆菌（HD) 细菌性阴道炎 加特纳嗜血杆菌(GV) 志贺氏菌属 痢疾志贺氏菌感染 弯曲杆菌病 弯曲杆菌 B群链球菌 阴部感染及阴道病 细菌性阴道病 某些阴道厌氧菌,真菌,由白色念珠菌/拟酵母菌： 念珠菌性阴道炎 念珠菌性龟头包皮炎 外阴阴道真菌感染 表浅部
4、真菌： 股癣,原虫 ： 滴虫性阴道炎 尿道炎（阴道毛滴虫） 阿米巴病（溶组织阿米巴原虫） 蓝氏贾第鞭毛虫感染 体表寄生虫： 阴虱病（阴虱） 阴部疥（疥螨）,让患者能接受 社会性很强的疾病,我国重点防治的性病,艾滋病(AIDS) 梅毒(syphilis) 尖锐湿疣(condyloma acuminatum) 淋病(Gonorrhea) 生殖器疱疹(genital herpes) 非淋菌性尿道炎(NGU) 软下疳(chancroid) 性病性淋巴肉芽肿(lymphogranuloma Venereum),STD的诊断： 病史接触史 临床表现 实验室检查 STD监测和疗效判断的重要依据 实验室检查,
5、性病实验室检查特点,诊断技术种类较多（形态学、微生物学、免疫学、分 子生物学等许多检测方法） 临床检验工作中不确定性（需借助图谱病原体形态 典型和不典型，可借助书籍资料篇幅有限 疾病的社会性（健康、精神、经济、家庭和声誉）,性病实验室诊断原则,慎重：不能盲目滥用各种非标准检测方法、注重社会效益 和客观条件， 新技术：对待新技术一定要科学比对，慎重使用,一、艾滋病的实验室诊断,理论依据大量血清学流行病学资料: V几周IgM抗体出现很快IgG抗体出现并一直存在（无免疫源性） 实验目的：检测抗HIV抗体（ IgG 主） 用于诊断实验： HIV血清学初筛试验 HIV血清学确证试验,HIV血清学初筛试验
6、,试验要求： HIV-1+2或 HIV1/2 初筛试验要求： 敏感性高要求，理论上要达100% 特异性要求允许少量假阳性 假阳性可通过重复试验和确证实验排除 具备至少两种初筛方法,初筛实验方法,颗粒凝集试验（PA） 酶联免疫吸附试验-ELISA 第三代（双抗原夹心法） 金标法： 乳胶快速 敏感性100%，特异性99.8% 标本要求：新鲜全血2 ml ，无抗凝,确证实验方法,蛋白印迹试验（Westem blot） 试验要求：准确性 特异性强 有资质的实验室进行检测,临床意义,临床诊断 初筛试验： 阴性结果: 基本可排除HIV感染，必要 时2-3月复查 阳性结果: 其它初筛方法重复试验， 阳性报告
7、HIV抗体待查， 进一步做确证试验 确诊试验： 结果阳性的标本可报告HIV抗体阳性,其它相关试验,用于预后及抗病毒治疗疗效观察实验室指标的检测 ： 1CD4+细胞和CD8+细胞计数 CD4+淋巴细胞正常值为500-1600个/ul,CD4+/CD8+的正常比值为（1.5-1.7）：1 2病毒载量测定(viral load, VL) 实际上，体内复制的病毒的数量是不能直接测量的，一般用血浆中HIV RNA的拷贝数代表HIV的病毒载量。HIV病毒载量与疾病进展速率和预后有强相关关系，,其它相关试验,P3实验室： 病毒分离培养 相关抗原检测 小结：,二、梅毒的临床分期,后天梅毒 ： 一期梅毒 二期梅
8、毒 三期梅毒(晚期梅毒) 先天梅毒,梅毒一期皮损-硬下疳,梅毒二期皮损,梅毒晚期损害,二、梅毒的实验室诊断,检查病原体的试验 测抗体血清学检查,检查病原体的试验,暗视野显微镜检查法（WHO推荐） Fontana-Tribondean镀银染色法（难、敏感性差） 浓盐酸蒸汽显示法（操作中烧伤） 单克隆免疫银光法（DFI）-PCR,暗视野显微镜检查临床意义,1.可确证梅毒-直接检查到梅毒螺旋体 2.对早期现症梅毒检测最好的方法（一期、二期梅毒皮损或淋巴节结、孕妇羊膜穿刺）,选择试验注意事项,1.清洁皮损表面但不能用消毒液 2.取材-渗出液、尽量避免出血（降低阳性率） 3.口腔溃疡要谨慎 4.阴性结果
9、不能排除梅毒可能性-取材不当、皮损致数量不足、近期使用抗生素、损害接近自然消退等,试验选择 合适 国情,梅毒血清学检查,两组试验： 1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验（初筛） 2.梅毒螺旋体抗原血清学试验 （确证） 两组试验的目的都是检测抗体 非梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗-脂质抗体-非特异性） 梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗-梅毒螺旋体抗体-特异性） 无免疫源性,非特异性梅毒的血清学初筛试验,方法： 1.性病研究实验室试验VDRL 2.不加热血清反应素试验USR 3.快速血浆反应素环状卡片试验RPR 4.甲苯胺红试验TRUST,四种初试验筛方法的比较,四种初筛方法,原理：相同 目的：相同 临床意义
10、：相同 不同：方法学上改良,四种初筛方法,原理： 当人体感染梅毒螺旋体4周10周左右后，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体(主要是IgM和IgG) 目的： 抗-脂质抗体,四种初筛方法,方法： 定性法-意义局限 定量抗体的效价滴度（倍比稀释） 通过看化验单可判别定量或定性 阳性 原倍、1：2/1：4/1：8/1:64,梅毒初筛试验定性定量,阴性 原倍 1：2 1：4,梅毒血清学初筛实验临床意义,1.辅助诊断梅毒 初筛实验有较高的敏感性和特异性 2.观察滴度变化可用于疗效观察 3.鉴别早期或晚期梅毒（前滴度快后慢） 4.鉴别先天性梅毒（被动出生3-4月转阴，不降反升） 5.发现
11、复发或再感染病人复发或再感染时 血清阳转或滴度上升，定量试验2次结果，滴度上升2个稀释度以上（ 1:21:8以上 ）才可判断为上升，要排除技术性因素，相同的实验方法才能进行滴度比较 6.梅毒的筛查试验,注意事项,假阳性 ： 1生理性 孕妇0.4% 2胶原性或自身免疫性病 麻风、系统红斑狼疮 3某些急性发热病 后 风疹、疟疾、水痘、肺炎 4免疫接种 鉴别方法： 抗体效价 特异性试验证实,特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验,目的: 检测特异性抗梅毒螺旋体抗体-特异性强 原理： (FTA-ABS) 完整的梅毒螺旋体作抗原 TPHA/TPPA 超声裂解梅毒螺旋体提取抗原族致敏载体 致敏的载体抗梅毒抗体/免
12、疫血清适宜条件 下肉眼可见凝集,特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验,方法： 1.梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA） 2.梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA） 快速、简便、准确而青睐 3.荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS) WHO推荐金标准,特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验,4. 梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验 TP-ELISA： TP-Ab是一种通过基因工程经利用梅毒螺旋体多肽抗原（KD47、 KD42/KD15）包被于反应板的试验。它用双抗原夹心法，同时检测IgM/IgG抗体，故可用于早期诊断，并避免了单片段抗原混合干扰 5.PCR方法（略）,用于诊断梅毒试验方法选择,要求准确率（特异性）
13、 TPHA在各期梅毒的特异性为98%99%，敏感性 治疗前一期：69% 90%；二期100%；潜伏期97%100%；晚期94% 1.梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA） 2.梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA） 敏感性强，特异度高，现为梅毒诊断的金标准,梅毒特异性试验的临床意义,1.诊断梅毒 敏感性高、特异性强是梅毒较好的确证实验 2.早期诊断梅毒（19S IgM ） 一期梅毒特异性试验比非特异性试验早一周出现，梅毒感染后第二周就可从血清中测出抗体IgM，而IgG要在感染后4周方可测出,梅毒特异性试验的注意事项,1.定性试验 一般定性试验阳性即可确诊，定性抗体效价1：80 2.不能作疗效观察指标、
14、 由于记忆细胞抗体复制能力强，特异性敏感性高，即使经 抗梅治疗也终生阳性（阳性现症或既往） 3.1%生物学假阳性存在 麻风、传单（嗜异性抗体）TPPA假阳性，红斑狼疮 FA-ABS呈假阳性 不主张叫确证试验,梅毒血清学试验选择,一、用于筛查： 首选-TP 其次-初筛试验 二、由于诊断梅毒（首次）：必须 1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验/梅毒初筛试验 有效价 2.梅毒螺旋体抗原血清学试验/TPPA/TPHA,梅毒血清学试验选择,三、用于疗效观察、治疗后随访： 非梅毒螺旋体抗原血清学试验/梅毒初筛试验 有效价 一张完善的检验单报告部分： 结果： 梅毒血清学初筛试验TRUST 1:16阳性 （梅毒螺旋
15、体抗原血清学试验）TPPA 阳性 签名 XXX 日期XXXXX,其他实验,免疫印迹法： 是一种诊断梅毒感染的特异性实验， 胶体金免疫结合技术（TPAb）： 是在酶免结合技术基础上发展起来的, 具有简单、快速、不需任何仪器的特点。 PCR试验： 多聚酶链反应检测梅毒螺旋体DNA,？,1.临床疑似梅毒患者就诊你怎样下医嘱？ 2.抗梅治疗中患者观测病情是选择什么样的检查？,三、淋病(gonorrhea)的实验室诊断,淋病：是我国目前检测八种主要性病中发病人数最 多的一种 病因：淋病奈瑟菌 亲和性：人类是唯一宿主，嗜人类泌尿生殖道的柱 状上皮细胞 特点：局部化脓性感染 细菌和毒素粘膜坏死、脱落、神 经末梢暴露、炎性浸润、组织液渗出,所致疾病,主要是泌尿生殖道局部化脓性感染-淋病 不及时治疗可入侵泌尿生殖道其他部位附睾、 前列腺炎、输卵管炎及盆腔炎 甚至经血液传播全身其他部位淋菌性关节炎、心 内膜炎及脑膜炎等,淋菌性尿道炎,诊断淋病的实验室检查,男性患者： 急性期典型病例-尿频、尿急、尿痛，局部流脓 首选： 试验方法-分泌物涂片革兰染色 试验目的-找革兰阴性双球菌 女性可拒绝用此法,分泌物涂片革兰染色,原理：1急性患者尿道有大量脓性分泌物 2淋球菌呈革兰阴性反应，具特殊形态 3有些脓细胞内可有许多淋球菌 临床意义： 1.镜检结果阳性可初步诊断淋病 2.用于新生儿、婴儿脓漏眼诊断
