《启动子作业》由会员分享，可在线阅读，更多相关《启动子作业（25页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、http:/ （promoter）,http:/ 录,启动子的概念 启动子的作用特点 启动子边界及关键序列的实验确定 原核生物启动子 真核生物启动子 原核和真核基因转录起始位点上游区的结构 比较,http:/ 位于转录起始点附近，且为转录起始所必需的序列元件。能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性。 因为基因的特异性转录取决于酶与启动子能否有效地形成二元复合物，故RNA聚合酶如何有效地找到启动子并与之相结合是转录起始过程中首先要解决的问题。启动子的结构影响了它与RNA聚合酶的亲和力，从而影响了基因表达的水平。,启动子的概念,http:/ （2）启动子位置不定，一
2、般在转录起始点上游。 （3）可与增强子共同控制转录起始和强度。 （4）发挥功能时除需RNA聚合酶外，还需转录调控 因子与启动子区各种调控元件相互作用。,http:/ 从一段特定的含有启动子的DNA片段入手，从DNA的两侧不断缩短长度直至短到停止产生活性的某一位置。,http:/ boundaries can be determined by making deletions that progressively remove more material from one side. When one deletion fails to prevent RNA synthesis but the
3、 next stops transcription, the boundary of the promoter must lie between them.,Promoter boundaries are defined by deletions,http:/ A: 对已知启动子序列，可通过缺失或突变确定哪些碱基为必需； B: 还可通过比较不同的启动子间的同源性，确定哪些序列为保守序列。,http:/ bp处（T85T83G81A61C69A52）的TTGACA区。这两个区域是RNA聚合酶与启动子的结合位点，能与因子相互识别而具有很高的亲和力。,http:/ synthesized RNA,+
4、1,Bacterial promoters share two consensus sequences centered at -10 and -35.,http:/ -10区和-35区的结构特征,-10区：TATA区（又称Pribnow box) T89A89T50A65A65T100 -35区：TTGACA区 T82T84G78A65C54A45 这两个区域是RNA聚合酶与启动子的结合位点，能与因子相互识别。,http:/ TTTACA-TATGTT- TTGACA TATAAT (-35 ) (-10),Lac启动子的-10区和-35区,http:/ -10区和-35区间的间距与转录起始
5、,应用： 1）正确认识已有启动子，分析其活性； 2）据研究目的人工构建启动子。 最佳间距： 原核生物中，-10区与-35区之间距离约是1618bp (90%) ，少数1520bp。17bp最佳。,http:/ 下降突变（down mutation）:如果把pribnow从TATAAT变成AATAAT就会大大降低其结构基因的转录水平。 上升突变（up mutation）:即增加Pribnow区共同序列的同一性，就会增加基因转录水平，引起上升突变。如在乳糖操纵子得启动子中，将其pribnow区从TATGTT转变为TATATT，就会提高启动子效率，从而提高乳糖操纵子基因的转录水平。,http:/ R
6、NA聚合酶与启动子区的识别,一般认为，RNA聚合酶并不直接识别碱基对本身，而是通过氢键互补的方式加以识别。因此启动子功能既受DNA序列影响，又受其构象影响。 应用：同一表达盒在基因组不同位置可能有不同的转录强度。,http:/ bP处的共同序列似TAAA，也称为TATA区。另外，在起始位点上游-70-78 bp处还有另一段共同序列CCAAT，这是与原核生物中-35区相对应的序列称为CAAT区(CAAT hox)。,http:/ box) -70-80区含CCAAT序列(CAAT box) 在-80-110区含有GCCACCC或GGGCGGG序列（GC box) 在其它位置可能还有增强子区,5.
7、1 RNA聚合酶启动子的结构特征,http:/ 真核生物启动子与转录起始,（1）TATA区的主要作用是使转录精确的起始。 （2）CAAT区和GC区主要控制转录起始频率，基本不参与起始位点的确定。 尽管这三种保守序列都有着重要功能，但不是每个基因的启动子区都包含着三种序列。研究发现，真核细胞中存在着大量特异性或组成型表达的、能够与不同基因启动子区UPE相结合的转录调控因子（表1）。 基因的转录实际上是RNA聚合酶、转录调控因子和启动子区各种调控元件相互作用的结果。,http:/ 真核细胞中部分转录调控因子,http:/ （2）真核基因的调控区较大，TATAATA区位于-30-20，而-110-40区为上游激活区。 （3）除Pribnow区之外，原核基因启动子上游只有TTGACA区作为RNA聚合酶的主要结合位点，参与转录调控；而真核基因除了含有可与之相对应的CAAT区之外，大多数基因还拥有GC区和增强子区。,http:/ you!,where there is a will,there is a way!,
