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1、温 州 医 学 院本科毕业论文 题 目：不同厂家卡马西平片溶出度考察导师姓名：崔 虓导师单位：温州医学院附属第二医院药剂科学生姓名：曾大利学院（部）： 温州医学院药学院专业班级：药学三班完成时间：2008年6月22日目 录第1章 外文文献翻译及原稿（2） 1.1 外文文献翻译（2） 1.2 外文文献原稿（11）第2章 专业文献综述（17） 2.1 中外文摘要及关键词（18） 2.2 正文（18） 2.3 参考文献（24）第3章 温州医学院毕业论文（设计）任务书（27）第4章 温州医学院本科毕业论文（设计）开题报告（34）第5章 温州医学院本科毕业论文（设计）工作进度表（39）第6章 温州医学院
2、毕业论文（设计）工作指导、检查登记表（41）第7章 温州医学院本科毕业论文（设计）评审表（42）第8章 温州医学院本科毕业论文（设计）（45） 8.1目录（46）8.1中外文摘要及关键词 （47）8.2 正文 （47）8.3致谢 （49）8.4参考文献 （49）第9章 温州医学院优秀毕业论文申请表（51）第10章 本科毕业论文（设计）实验记录（54）温州医学院药学院毕业论文外文文献翻译及原稿一个简单的方法监测癫痫病人中奥卡西平，卡马西平，及它们的主要代谢物拉莫三嗪的血药浓度Loretta Franceschi, Mario Furlanut摘 要 ：一种快速的，有选择性的，灵敏度高的反向高效液
3、相色谱法同时测定血浆样品中奥卡西平，其主要代谢产物（单羟基和双羟基卡马西平），拉莫三嗪，卡马西平和卡马西平-环氧丙烷的方法已实现。 在固相色谱柱（SPE）上提取得到被分析组分，在Zorbax SB-CN 柱上实现色谱分离。在紫外吸收波长为214nm下，该色谱峰面积比用于定量分析。这高效液相色谱法已成功的用于对我们研究所中癫痫患者得血药浓度监测的日常评价，以及用于关于病人由于药物诱导或抑制OXC代谢产生治疗效果的药代动力学研究。关键词：奥卡西平；代谢物；HPLC；监测1. 前言奥卡西平（OXC），10酮基卡马西平（CBZ）衍生物，是一个比较新的抗癫痫药物，其作用机制与适应症与卡马西平相似。口服给
4、药后，OXC被胃肠道完全吸收，迅速且几乎完全（96%-98%）得降解为药理活性代谢物单羟基衍生物（MHD）。MHD主要通过与葡萄醛酸结合而代谢，另外一小部分MHD被氧化成二羟基衍生物（DHD）1。DHD是一个无药理活性得代谢物，同时也参与了卡马西平的代谢途径。（图1.）OXC可以作为单一疗法以及与其他AEDs（抗癫痫药物）联合的多疗法，如拉莫三嗪（LTG），丙戊酸（VAL），托吡酯（TPM）的和非班酯（FBM）。我们研究所的癫痫患者通常用CBZ或OXC与LTG等其他抗癫痫药物联用进行治疗。虽然目前没有数据显示，OXC血药浓度监测对癫痫患者的药物治疗有用，药物诱导或抑制的相互作用清楚得表明，对照
5、LTG2,3可被视为一个理由，对可能会由于OCX相互作用而进行仔细的监测。另一个原因是实施一分析程序的同时测定LTG,CBZ,CBZ 10,11-环氧化物（CBZ- epox），OXC和其主要代谢物而不受其他目前相关的药物（如苯妥英，乙琥胺，非班酯 ， 苯巴比妥和丙戊酸）干扰，可以不需要改变分析程序时，药物在不同的样本中测试会改变。这样可以节省双方的时间和金钱。HPLC-UV方法目前用于OXC治疗药物监测（TDM）的做法也只是分析这种药物和它的代谢产物4,5；有些是反向选择6,7，并要求昂贵的手性柱和长度的分析倍。由于OXC与CBZ有一个化学结构和性质很相似，Lensmeyer8提出的操作程序
6、是目前HPLC法发展的出发点。不过，我们决定要修改方法，因为lensmeyer的分析程序不允许量化LTG和DHD ，因为这两个组分是一起洗脱出的。2. 材料与方法2.1 标准 OXC,MHD和DHD由Novartis Pharma (Basel, Switzerland)友好提供；LTG由GlaxoSmithKline(Verona, Italy)提供；CBZ, CBZ-epox, and cyeptamide (CYE)购自Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany). CYE,CBZ储存溶液（1gl-1）,在-80下储存，CBZ-epox and LTG 制成甲醇溶
7、液，MHD和DHD溶于去离子水中，OXC溶于丙酮中，丙酮醇流动相包含CBZ, CBZ-epox, OXC, MHD, DHD 和LTG，内标物溶液（100ngg-1）, 水/乙腈(3/1)制成。2.2 试剂与萃取剂 所有溶剂为HPLC等级：乙腈和醋酸购自Merck (Darmstadt,Germany); 甲醇来自Carlo Erba(Milano,Italy); 醋酸铵和三乙胺来自Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany).固相萃取柱（SPE）Isolute C8柱（EC）含有200毫克的稳定相，并以3ml容积规格购自StepBio(Bologna, Italia)
8、.在Milli-Q Plus 的试剂级别的给水系统中的水是去离子的，过滤且净化的，来自Millipore (St. Quentin, France).2.3 色谱条件HPLC系统包括一个126溶剂传递装置模型(Beckman Instruments, Berkerley, CA)，一个LC 295 UV-VIS 模型(Perkin Elmer, USA),设在214nm，与一个406接口单元模型(Beckman Instruments, Berkerley,CA)连接，用于一个GOLD色谱工作仪(version 6) (Beckman Instruments).色谱分离分别采用一个Zorbax
9、 SB-CN柱Hewlett Packard (USA), 250mm4.6mm i.d.,粒子大小5m，一个保护柱LichroCART 4-4 RP-8, 5 m (Merck, Darmstadt, Germany)被连接到保护分析柱上。柱子和前置柱分别被设在50的恒温箱中（Jones Chromatographic,USA）。流动相由水/乙腈/甲醇/乙酸/三乙胺（体积比为725/150/125/1/0.6）混合，超声脱气Branson (USA)。流动相PH用乙酸调整为4.20以获得LTG与DHD峰的完全分离（图2）。流速设为12mlmin-1。2.4 制备标准品和对照品标准品和对照品包
10、括CBZ,CBZepox,OXC, MHD, DHD, 和LTG添加已知含量的分析物于空白血浆中。他们包括每批患者的样本。2.5 样品制备我们结合含30l CYE(I.S.)（100ngl-1）的500l 血清和500l饱和的醋酸铵溶液。混合后，样品被转移至含3ml甲醇的萃取柱，然后3ml水洗。在用3ml水洗萃取柱后，样品将在3ml甲醇中被洗脱出来。然后在40的氮气流通下蒸发有机相，残留物用200l水/乙腈（3/1）溶解，然后取50l注入到HPLC系统中。3. 结果3.1 选择性 用上述的色谱条件我们可靠地将六个组分与内标物分离。色谱性能良好，使所有物质峰形与合适的保留时间有效。在一个干扰研究
11、中，提取空白血浆与抗癫痫药物或内标物共同洗脱得到了一个游离的峰。（图.3.）在对病人的多药疗法中，非班酯，加巴喷丁，托吡酯，乙拉西坦和乙琥胺在这过程中不被提取，因为它们不断地离解。丙戊酸酸和苯妥英分别提取，而不是共同与有趣的组分被洗脱出来。苯巴比妥（ Pb ）和MHD是共同洗脱出来的。因此，在有PB和OXC9（和MHD）存在时，样品用盐酸（1N）和乙醚预处理。在SPE程序允许PB通过并进入有机相并在此后从水相中柱提取其他组分前进行样品酸化。3.2 线性 我们的线性方法检查是通过三份标准品分析的，在范围为0.3-60gml-1的CBZ，0.3-50gml-1的CBZ-epox，0.1-50gml
12、-1的OXC，0.5-150gml-1的MHD，0.5-50gml-1DHD和0.3-80gml-1的LTG是优良的。（图.4.）3.3 回收率提取回收率（在五种不同浓度下评价以及在相同浓度下对血浆样本提取物和未提取标准物的峰面积比较评价）很好。OXC为90.35-101.4%，MHD为93.73-104.21%，DHD为95.58-103.46.CBZ为95.78-102.84，CBZ-epox为97.54-101.87，LTG为95.78-102.54。3.4 限量在信噪比3：1下，限量为OXC（0.1gml-1）,MHD(0.4gml-1),DHD、LTG、CBZ和CBZ-epox（0.
13、2gml-1）。3.5 日内和日间精密度与准确度在三个不同浓度下，范围为OXC（0.1-1gml-1），MHD和CBZ（1-20gml-1），DHD,CBZ-epox和LTG（1-10gml-1），制备五组质量控制样品。相同的提取样本跑了三次后计算日内准确度，在连续四天分析后计算日间准确度。（表 1）对于所有组分，由变异系数（CV）确定的日内和日间精密度低于6%。4. 讨论 这项研究的目的是如何用HPLC-UV法同时测量联合用CBZ或OXC与LTG和其他抗癫痫药物进行治疗的癫痫患者的血浆中CBZ,OXC和它们的主药代谢产物及LTG。该法适用于用这些药进行单一或多疗法的病人。我们选择SPE样品前
14、处理，因为这种技术比起液液萃取能获得回收率高且更洁净的样本。 该法非常灵敏且其重现性非常好，用高效液相色谱技术，再加上紫外检测允许同时测定人血浆中三种抗癫痫药物（OXC,CBZ和LTG）和它们的主药代谢物（MHD,DHD和CBZ-epox）。在我国实验室经过数月的例行评价这种方法，我们结论是，它对这些药物的TDM有用处。通过使用这一程序，提取不需要超过30分钟，色谱分离只需时17分钟，且色谱系统呈现长期的稳定性；在进行1200次分析后，色谱分离才变差（宽峰和低分辨率）。图1.奥卡西平、卡马西平、及其主要代谢产物的化学结构。（图.2.）提取物的色谱图没有（A）和有(B)进行PH调节OXC: 奥卡西平, CBZ: 卡马西平, MHD: 单羟基卡马西平衍生物,DHD: 双羟基卡马西平衍生物, CBZ-epox: 卡马西平 10,11-环氧化物, LTG: 拉莫三嗪 和 CYE: 内标物 (cyeptamide).(图.3.)
