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1、,专题整合提升,专题5 DNA和蛋白质技术,知识系统构建,热点考题集训,规律方法整合,内容索引,知识系统构建,提取,鉴定,实验材料,粗提取,纯化,PCR,反应过程,DNA含量,电泳,样品,凝胶色谱,1.DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，可利用酒精将DNA和蛋白质分开。 2.DNA在0.14 mol/L NaCl溶液中溶解度最低。 3.PCR原理：DNA热变性原理。 PCR每次循环都包括变性、复性和延伸三步。 4.DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3端延伸DNA链。DNA的合成方向总是从子链的5端向3端延伸。,5.利用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量大的先洗脱出来，相
2、对分子质量小的后洗脱出来。 6.在电泳中，待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状都会影响分子的迁移速度。 7.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移率完全取决于分子的大小。 8.蛋白质提取和分离的一般步骤是：样品处理与粗分离、纯化和纯度鉴定。 9.在对蛋白质进行纯度鉴定时，使用最多的方法是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。,规律方法整合,整合一 DNA的粗提取与鉴定中的“234”,例1 将粗提取的DNA丝状物分别加入0.14 mol/L NaCl溶液、2 mol/L NaCl溶液、体积分数为95%的酒精溶液中，然后用放有纱布的漏斗过滤，分别得到滤液P、Q、R以及存留在纱布上的黏稠物p、q、
3、r，其中由于含DNA少可以丢弃的是 A.P、Q、R B.p、q、r C.P、q、R D.p、Q、r,解析 DNA在0.14 mol/L NaCl溶液中溶解度最小，过滤后DNA在黏稠物p中，可以丢弃P；DNA在2 mol/L NaCl溶液中溶解过滤后，DNA在滤液中，可以丢弃q；DNA不溶于体积分数为95%的酒精溶液，所以过滤后DNA在黏稠物r中，可以丢弃R。,答案,解析,整合二 去除DNA滤液中杂质的三种方案,例2 如图表示以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定的操作程序，请分析回答问题。,(1)步骤一中，向鸡血细胞液中加入 并搅拌，可使鸡血细胞破裂。,解析 第一步加入蒸馏水的目的是使红细胞
4、涨破，释放出核物质。,蒸馏水,(2)步骤二：过滤后收集含有DNA的 。,解析 第二步收集含有核物质的滤液。,滤液,答案,解析,(3)步骤三、四的操作原理是_ 。步骤四通过向溶液中加入 调节NaCl溶液物质的量浓度至 mol/L，DNA将会析出，过滤去除溶液中的杂质。,解析 由于DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，所以通过控制NaCl溶液的浓度可以分别溶解DNA和析出DNA，并且对 DNA进行提纯；第四步加入蒸馏水的目的是逐渐稀释NaCl溶液，使其物质的量浓度为0.14 mol/L，这时DNA在NaCl溶液中溶解度最低，可以析出DNA。,DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，通过
5、,控制NaCl溶液的浓度去除杂质,答案,解析,蒸馏水,0.14,(4)步骤七：向步骤六过滤后的 中，加入等体积的冷却的_ ，静置23 min，溶液中会出现 色丝状物，这就是粗提取的DNA。,解析 DNA不溶于冷酒精，某些蛋白质可以溶于冷酒精，这样可以进一步提纯 DNA。,滤液,体积分数为,答案,解析,95%的酒精,白,(5)步骤八：DNA遇 试剂，沸水浴5 min，冷却后，溶液呈 色。,解析 鉴定DNA的方法是用二苯胺试剂，在沸水浴加热条件下，如果变蓝色，证明存在DNA。,二苯胺,蓝,答案,解析,整合三 DNA的粗提取、PCR技术、蛋白质分离之间的比较,例3 PCR是一种DNA体外扩增技术。1
6、988年，PCR仪问世，并被广泛应用于基因扩增和DNA序列测定。如图是 PCR技术示意图，请回答下列问题。 (1)将双链DNA ，使之变性，从而导致 。 引物延伸需提供 作为原料。,答案,解析,解析 引物的延伸需要提供4种脱氧核苷酸为原料。每次循环都包括变性、复性和延伸三步。变性是指在高温90 以上DNA双链解聚为单链的过程。,加热到95 ,双链 DNA分离成两条单链,四种脱氧核苷酸,(2)红细胞含有大量血红蛋白，我们可以选择猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。请回答下列有关问题。 样品处理，它包括
7、红细胞的洗涤、 、分离血红蛋白溶液。 收集的血红蛋白溶液在透析袋中经过透析，这就是样品的粗分离。透析的目的是 。透析的原理是_ 。,答案,解析,解析 该实验中样品的处理可分为三步：红细胞的洗涤；血红蛋白的释放；分离血红蛋白溶液。透析所依据的原理是小分子可以自由进出透析袋，而大分子则保留在透析袋内，目的是除去相对分子质量较小的杂质。,血红蛋白的释放,去除相对分子质量较小的杂质,透析袋能使小分子,物质自由进出，而大分子物质则保留在透析袋内,整合四 DNA体内复制与体外复制(PCR)的比较 PCR技术是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，与细胞内DNA复制的过程相比既有相同点又有不同点，通过列表比较的
8、方法准确掌握两者的异同，是防止此类问题出错的重要措施。细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR)的比较：,例4 PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是 PCR过程需要的引物一般是人工合成的单链DNA PCR过程不需要DNA聚合酶 PCR过程中 DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的 PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链 DNA为模板进行复制 A. B. C. D.,解析 PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比较，主要有两点不同：(1)PCR过程需要的引物一般是人工合成的单链DNA，长度通常为2030个核苷酸。(2)PCR过程中，DNA解旋不依赖
9、解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的。,答案,解析,整合五 DNA粗提取和血红蛋白提取和分离的比较 大分子物质的提取与分离，一般是根据其固有的理化性质，用不同的物理或化学方法，达到不同成分分离的目的。对于DNA与血红蛋白的提取和分离的相关知识，可通过下表来辨析掌握。,例5 下列关于DNA和血红蛋白的提取与分离(鉴定)实验的分析，正确的是 A.DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl溶液浓度的降低而减小 B.分离蛋白质装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管先打开后关闭 C.在蛋白质提取和分离过程中进行透析可去除溶液中的DNA D.利用一定范围内的高温使蛋白质变性而对DNA没有影响的特性可将 DNA与
10、蛋白质分离,答案,解析,解析 A错误，DNA在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最小，超过或低于0.14 mol/L时，溶解度都增大； B错误，分离蛋白质装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管应始终打开； C错误，透析可用于去除小分子物质，不能去除大分子的DNA； D正确，一定范围内的高温能使蛋白质变性，对DNA没有影响，利用此原理能将DNA与蛋白质分离。,热点考题集训,1.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验操作的说法中，正确的是 A.该实验中有两次加入蒸馏水，均是为了析出DNA B.该实验中多次要求用玻璃棒单向搅拌，目的是搅拌均匀 C.该实验中有3次过滤，过滤时使用尼龙布层数与DNA的存在
11、状态有关 D.实验中3次加入NaCl溶液，第二次的目的是析出DNA,2,3,4,1,5,7,8,9,6,10,答案,2.下列关于“DNA的粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是 A.洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度 B.将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝 C.调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质 D.加入冷却的酒精后用玻璃棒快速搅拌滤液会导致DNA获得量增多,2,3,4,1,5,7,8,9,6,10,答案,解析,2,3,4,1,5,7,8,9,6,10,解析 洗涤剂能瓦解细胞膜，但是并不能增加DNA在NaCl溶液中的溶解度，A项不正确。 鉴定D
12、NA时，须先将DNA丝状物溶于2 mol/L的NaCl溶液中，再加入二苯胺试剂并沸水浴加热，冷却后变蓝，B项不正确。 DNA和蛋白质在NaCl溶液中的溶解度不同，且对酶的耐受性也不同，因而调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质，C项正确。 加入冷却的酒精后应用玻璃棒缓慢地并沿一个方向搅拌滤液，否则会导致DNA丝状物断裂进而使获得量减少，D项不正确。,2,3,4,1,5,7,8,9,6,10,3.有关PCR技术的说法，不正确的是 A.PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术 B.PCR技术的原理是DNA双链复制 C.利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知
13、目的基因的核苷酸 序列 D.PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA,答案,4.下图a、b、c均为PCR扩增的DNA片段，下列有关说法正确的是 A.片段a、b、c的长度均相同 B.片段a、b只是第一次循环的产物 C.片段c最早出现在第二次循环的产物中 D.经过30次循环后，片段c的数量为230,答案,解析,2,3,4,1,5,7,8,9,6,10,2,3,4,1,5,7,8,9,6,10,解析 图中片段a、b只有一种引物， 是由原始DNA链为模板复制而来，其长度比片段c长，A项不正确。 由于原始模板在每次循环中均可作为模板，则每次循环都能产生图中片段a、b，B项不正确。 由于第一次循环的产物
14、只有一种引物，而图中片段c有两种引物，则最早出现在第二次循环，C项正确。 经过30次循环后，得到的DNA片段总数为230，这包括图中的片段a、b，故D项不正确。,5.下列关于DNA聚合酶催化合成DNA子链的说法中，正确的是 A.以DNA为模板，使DNA子链从5端延伸到3端的一种酶 B.Taq DNA聚合酶必须在每次高温变性处理后再添加 C.DNA聚合酶能特异性地复制整个DNA的全部序列 D.Taq DNA聚合酶是从深海中的某种菌体内发现的,答案,2,3,4,1,5,7,8,9,6,10,解析,2,3,4,1,5,7,8,9,6,10,解析 DNA聚合酶不能从头开始催化合成DNA，引物的5端与母
15、链发生碱基互补配对，然后从引物的3端延伸子链，所以，整条子链的合成是从5端延伸到3端； Taq DNA聚合酶能耐高温，所以在反应体系中可反复利用，无需另外再添加； PCR扩增的是引物之间的固定长度的DNA序列； Taq DNA聚合酶是1966年从美国黄石公园的一个热泉内的某种菌体内发现的。,6.下列有关“血红蛋白提取和分离”的相关叙述中，正确的是 A.用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除细胞表面的杂蛋白 B.将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较大的杂质 C.血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂 D.整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构,答案,解析,2,3,4,1,5,7,8,9,6,10,2,3,4,1,5,7,8,9,6,10,解析 红细胞的洗涤应用生理盐水，其目的是去除血浆蛋白等杂质，有利于后续步骤的分离纯化，而不是洗去细胞表面的杂蛋白，A项不正确。 将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较小的杂质，B项不正确。 血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放，而不是溶解血红蛋白，C项不正确。 整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构，D项
