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1、在学生就要走出校门的时候，班级工作仍要坚持德育先行，继续重视对学生进行爱国主义教育、集体主义教育、行为规范等的教育，认真落实学校、学工处的各项工作要求血红蛋白的提取和分离导学案课题课题3 血红蛋白的提取和分离课型新授课时1教师复备栏（学生笔记）【学习目标】站得高明确学习目标（一）知识与技能1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理（二）过程与方法体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤（三）情感、态度与价值观 初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神 【学习重点和难点】重点：凝胶色谱法的原理和方法 难点：样品的预处理；色
2、谱柱填料的处理和色谱柱的装填【学法指导】启发式教学，拓展视野，感受科学技术的重要价值。【知识链接】复习旧知，以旧带新1、DNA的复制方向是从 到 端。2、DNA析出时，最适宜的盐浓度是 。3、固定化技术包括 法、 法和 法。4、PCR一般要经历30多次循环，每次循环可以分为 、 和 。5、粗提取的DNA，在 的条件下，用 检验，被染成 。【学习内容】一、 自主学习：起步稳夯实基础促发展 学生阅读教材P6470,完成下列学案（一）、基础知识 蛋白质的各种特性的差异，如分子的 和大小、所带 和多少、 、 和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同的种类的 。一、凝胶色谱法：1、凝胶色谱法也称做
3、法，是根据相对 的大小分离蛋白质的有效方法。所用的凝胶实际上是一些微小的 ，大多是由多糖类化合物构成的，如 或 。在小球内部有许多贯穿的 ，当相对分子质量不同的 通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入 的通道，路程较长，移动速度 ；而相对分子质量 的蛋白质无法 凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度 。这样，相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。二、缓冲溶液： 1、缓冲溶液的缓冲作用体现在：在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的 或 对溶液PH值的影响，维持PH基本不变。缓冲溶液通常由1-2种 溶于水中配制而成。调节缓冲剂的 就可以制得在不同PH范围内使用的 。2、生物
4、体内进行的各种生物化学反应都是在一定的PH下进行的，为了能够在 下，准确模拟生物体内的过程 ，就必须保持体外溶液的 与 环境中的PH基本一致。因此，缓冲溶液的正确 和PH的 ，在生物 化学的研究工作中有着极其重要的意义。 三、电泳电泳是指带电粒子在 的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物大分子，如 、 等都具有可解离的 ，在一定的PH下，这些基团会带上 或 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分子 的差异以及分子本身的大小、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。（二）实验操作：1、蛋白质的提取和分离一般分为四步： 、
5、 、 和 。2、血红蛋白分离的步骤：红细胞的 ：其目的是去除 ，以利于后续步骤的 血红蛋白的 ：加 和40%的 ，使 破裂，释放出血红蛋白。 溶液：放入 管中，用离心机离心，于分液漏斗中分出下层的红色透明液体，即 溶液。 ：装入 中， 12h.3、凝胶色谱操作：凝胶色谱柱的制作 凝胶色谱柱的 样品的加入和 二、合作探究:走得欢探索中收获，收获中提升 【整理学案】：构建网络，内化知识血红蛋白的取和分离凝胶色谱法原理分离过程凝胶电泳法缓冲溶液组成作用蛋白质的提取分离样品处理粗分离纯化纯度鉴定血红蛋白的提取和离蛋白质分子的差异性蛋白质分子的凝胶色谱法原理分离过程凝胶电泳法凝胶色谱法原理凝胶电泳法缓冲
6、溶液组成作用缓冲溶液组成作用蛋白质的提取分离样品处理粗分离纯化纯度鉴定蛋白质的提取分离样品处理粗分离纯化纯度鉴定【达标测评】步步高巩固成果，对答如流1. 凝胶色谱法分离蛋白质的依据是（ ） A. 对其他分子的亲和力 B. 溶解度 C. 所带电荷多少 D. 相对分子质量的大小2. 凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是（ ） A. 糖类化合物 B. 脂质 C. 蛋白质 D. 核酸3. 选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好处（ ） A. 血红蛋白是有色蛋白 B. 红细胞无细胞核 C. 红细胞蛋白质含量高 D. 红细胞DNA含量高4. 将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第二层是（ ） A
7、. 甲苯 B. 血红蛋白水溶液 C. 脂溶性物质的沉淀层 D. 其他杂质的沉淀5. 血红蛋白因含有（ ）而呈红色 A. O2 B. CO C. CO2 D.血红素6. 下列操作正确的是（ ） A. 分离红细胞时采用低速长时间离心 B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可 C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D. 透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h7. 样品的加入和洗脱的叙述正确的是（ ） A. 先加入1ml透析后的样品 B. 加样前要使缓冲液缓慢下降全部流出 C. 如果红色带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功 D. 洗脱时可以用缓冲液也可以用清水8. 下列有关提取和分
8、离血红蛋白的程度叙述错误的是（ ） A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D. 可通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度9. 凝胶色谱法操作正确的是（ ） A. 将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴 B. 将橡皮塞下部切出凹穴 C. 插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面 D. 将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片10. 样品的加入和洗脱的操作不正确的是（ ）A.加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面
9、 B. 加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内C. 等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D. 用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面【学后反思】答案：1. D 2.A 3.A 4.D 5.D 6.D 7.C 8.B 9.A 10.D课后习题 基础达标1下列关于凝胶色谱法的原理及操作不正确的是()A是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法B在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而最先流出，而小分子可以进入凝胶内部而流速缓慢，以致最后流出来源:C凝胶内部有很微细的多孔网状结构，其孔隙大小与被分离的物质分子的大小无相应关系D一般情况下，凝胶对要分离的物质没有吸附作用
10、，因此所有要分离的物质都应该被洗脱出来解析：选C。凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法，凝胶是由多糖类化合物构成的，其内部有很微细的多孔网状结构，小分子蛋白质可以进入凝胶内部，路程较长，移动速度慢，而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部，路程较短，移动速度快，因此在洗脱过程中分离。选用不同种凝胶，其网状结构不同，孔隙大小不同，可分离的分子大小不同，二者是相关的，故C项不正确。2关于电泳的说法不正确的是()A电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动C蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少D用SDS聚丙烯酰胺凝胶电
11、泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小解析：选C。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素，SDS能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。3下列操作正确的是()A分离红细胞时采用低速长时间离心B红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D透析时要用20 m mol/L的磷酸缓冲液，透析12 h解析：选D。分离红细胞时，采用低速短时间离心，如500 r/min离心2 min；分离血红蛋白溶液时，离心时间较
12、长，如2000 r/min离心10 min。释放血红蛋白时，加入蒸馏水和40%体积的甲苯；透析时用物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液，以除去相对分子质量较小的杂质。4有关缓冲溶液的说法不正确的是()A缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变B缓冲溶液通常由12种缓冲剂溶解于水中配制而成C调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液D生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行解析：选A。缓冲溶液通常由12种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变，超过一定范围，缓冲溶液就起不到这样的作用了。5.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，分子大小、电荷的性质和数量情况如图所示，下列有关蛋白质分离的叙述正确的是()A若将样品以2000 r/min的速度离心10 min，分子戊在沉淀中，则丙也一定在沉淀中B若用凝胶色谱法分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快C将样品装入透析袋中透析12 h，若分子丙保留在袋内，则乙也一定保留在袋内
