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1、 硕士学位论文日粮中不同水平的维生素C对团头鲂幼鱼生长及免疫的影响指导教师 研究员 专业名称 水产养殖 研究方向 水产动物营养与饲料 答辩日期 年 月 目录目录摘要VABSTRACTVII第一章 文献综述11 维生素C的概述111 维生素C基本结构和性质112 鱼类对维生素C的合成能力113 维生素C源的种类及其稳定性22 维生素C在水产饲料中应用的研究进展321 维生素C对水产动物生理功能的研究322 维生素C在水产动物中的应用42.3 维生素C缺乏症724 水产动物对维生素C需要量的研究83 研究目的、意义及展望9第二章 日粮维生素C对团头鲂幼鱼生长、血液学及肌肉理化指标的影响111 材料
2、与方法111.1 试验鱼种、添加剂及日粮111.2 饲养管理131.3 采样与处理131.4 测定指标与方法131.5 数据统计与分析152 结果与分析152.1 维生素C对团头鲂幼鱼生长的影响152.2 维生素C对团头鲂幼鱼血液常规参数的影响172.3 维生素C对团头鲂幼鱼血液生化指标的影响172.4 维生素C对团头鲂幼鱼肌肉相关指标的影响173 讨论183.1 维生素C对团头鲂幼鱼幼鱼生长性能的影响183.2 维生素C对团头鲂幼鱼血液相关参数的影响193.3 维生素C对团头鲂幼鱼肌肉理化指标的影响20第三章 日粮维生素C对团头鲂幼鱼非特异性免疫及肝脏三种HSPs mRNA表达的影响211
3、材料与方法211.1 试验鱼种、添加剂及日粮211.2 饲养管理211.3 采样与处理211.4 测定指标与方法211.5 数据统计与分析232 结果与分析232.1 维生素C对团头鲂幼鱼血清免疫相关指标的影响232.2 维生素C对团头鲂幼鱼肝脏抗氧化指标的影响232.3 维生素C对团头鲂幼鱼肝脏三种HSPs mRNA 表达水平的影响243 讨论253.1 维生素C对团头鲂幼鱼血清免疫指标的影响253.2 维生素C对团头鲂幼鱼肝脏抗氧化指标的影响263.3 维生素C对团头鲂幼鱼肝脏三种HSPs mRNA 表达水平的影响27第四章 日粮维生素C对团头鲂幼鱼抗pH应激的影响291材料与方法291.
4、1 试验鱼种、添加剂及日粮291.2 饲养管理291.3 pH应激试验291.4 采样与处理291.5 测定指标与方法301.6 数据统计与分析302 结果与分析302.1 维生素C对团头鲂幼鱼血清谷丙转氨酶、碱性磷酸酶和总蛋白的影响302.2 维生素C对团头鲂幼鱼血清补体3、补体4和皮质醇的影响322.3 维生素C对团头鲂幼鱼肝脏抗氧化指标的影响332.4 维生素C对团头鲂幼鱼肝脏三种热休克蛋白 mRNA 表达水平的影响353 讨论363.1 pH应激下维生素C对团头鲂幼鱼血液生化指标的影响373.2 pH应激下维生素C对团头鲂幼鱼肝脏抗氧化指标的影响383.3 pH应激下维生素C对团头鲂幼
5、鱼肝脏三种HSPs mRNA 表达水平的影响38第五章 pH应激下日粮维生素C对团头鲂幼鱼抗嗜水气单胞菌感染的影响411 材料与方法411.1 试验鱼种、添加剂及日粮411.2 饲养管理411.3 攻毒试验411.4 采样与处理421.5 测定指标与方法421.6 数据统计与分析422 结果与分析422.1 维生素C对团头鲂幼鱼感染嗜水气单胞菌后死亡率的影响422.2 维生素C对团头鲂幼鱼血液常规参数的影响432.3 维生素C对团头鲂幼鱼血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性的影响452.4 维生素C对团头鲂幼鱼肝脏抗氧化指标的影响452.5 维生素C对团头鲂幼鱼血清总蛋白、皮质醇和葡萄糖水平的影响4
6、72.6 维生素C对团头鲂幼鱼肝脏三种HSPs mRNA 表达水平的影响483 讨论503.1 维生素C对团头鲂幼鱼感染嗜水气单胞菌后死亡率的影响503.2 维生素C对团头鲂幼鱼血液常规参数的影响503.3 维生素C对团头鲂幼鱼血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性的影响513.4 维生素C对团头鲂幼鱼肝脏抗氧化指标的影响513.5 维生素C对团头鲂幼鱼血清总蛋白、皮质醇和葡萄糖水平的影响523.6 维生素C对团头鲂幼鱼肝脏三种HSPs mRNA 表达水平的影响53全文总结55参考文献57致 谢71攻读学位期间参与学术会议及发表的学术论文73III摘要日粮中不同水平的维生素C对团头鲂幼鱼生长及生长的影
7、响摘要以团头鲂幼鱼为研究对象，以酪蛋白和明胶为蛋白源，豆油为脂肪源配制团头鲂幼鱼基础饲料，制成维生素C水平为0.2 mg/kg、33.4 mg/kg、65.8 mg/kg、133.7 mg/kg、251.5 mg/kg和501.5 mg/kg 的6种等氮等能的试验饲料。每种试验饲料随机投喂3组实验团头鲂幼鱼，每天投喂3次，达饱食水平，试验周期为90d。1维生素C对团头鲂幼鱼生长、血液学及肌肉理化指标的影响。随着饲料中维生素C添加量的增加，增重率（WG）、特定生长率（SGR）呈先上升而后趋于平缓的趋势，其中251.5 mg/kg和501.5 mg/kg Vc添加组团头鲂WG、SGR显著高于对照组
8、（P0.05）。各组间肝体比（HSI）和肥满度（CF）无显著性差异，仅133.7 mg/kg Vc添加组团头鲂脏体比（VSI）显著高于对照组（P0.05）。与对照组相比，饲料中添加65.8 mg/kg-501.5 mg/kg Vc显著降低了血液中白细胞（WBC）数量；添加65.8 mg/kg Vc显著降低了血清谷草转氨酶（AST）活力，133.7 mg/kg和501.5 mg/kg 试验组显著降低了谷丙转氨酶（ALT）的水平；添加501.5 mg/kg Vc显著提高了团头鲂血清中甘油三酯（TG）的水平；添加133.7 mg/kg Vc显著提高了肌肉中SOD活性（P0.05）。以鱼体增重率为评价
9、指标，经折线模型（Broken line model）回归分析，得到团头鲂幼鱼饲料中Vc的适宜添加量为150mg/kg。2. 日粮中不同水平维生素C对团头鲂幼鱼非特异性免疫、抗氧化能力以及肝脏三种HSPs mRNA表达的影响。通过测定血清相关免疫指标、肝脏抗氧化指标、三种HSPs mRNA表达以及抗病原菌能力等指标，研究Vc对团头鲂幼鱼免疫力的影响。结果表明，维生素C对团头鲂幼鱼血清中补体3（C3）、补体4（C4）的浓度、肝脏超氧化物歧化酶（SOD）、抗超氧阴离子（ASAFR）的活性、三种HSPs mRNA表达以及抗病原菌能力有显著的影响（P0.05），在适宜范围内，随着维生素C添加量的增加，
10、SOD、ASA的活性、C3、C4的浓度、三种HSPs mRNA表达以及抗病原菌能力呈上升趋势，并显著高于对照组（P0.05）。综上所述，Vc作为免疫刺激剂能有效地增强团头鲂幼鱼的免疫力。3. 日粮中不同水平的维生素C对团头鲂幼鱼抗pH应激的影响。养殖试验结束后，各槽中选取20尾鱼进行连续15 d的pH应激试验（pH9.5），分别于0 d、1 d、5 d、10 d和15 d采样，并分析团头鲂幼鱼血液和肝脏的生化指标以及肝脏三种HSPs mRNA的表达水平。结果表明，与pH应激前相比，团头鲂幼鱼在pH应激后血清血清碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、补体3（C3）、补体4（C4）以及肝脏超氧化物
11、歧化酶（SOD）和抗超氧阴离子（ASAFR）的水平显著降低；血清谷丙转氨酶（ALT）、皮质醇（COR）和肝脏丙二醛（MDA）的水平以及肝脏三种HSPs mRNA的表达水平显著升高（P0.05）；其中COR、SOD、ASAFR、MDA的水平以及肝脏三种HSPs mRNA的表达水平呈先升高后下降的变化趋势。pH应激下，与对照组相比，各维生素C试验组均不同程度的提高了团头鲂幼鱼血清ALP、TP、C3、C4、肝脏SOD和ASAFR的水平以及肝脏三种HSPs mRNA的表达水平；降低了血清ALT、COR和肝脏MDA的水平显著升高（P0.05）。综上所述，在日粮中添加维生素C，可提高团头鲂非特异性免疫力、
12、抗氧化能力以及三种HSPs mRNA的表达水平，有效地增强团头鲂幼鱼抗pH应激的能力。4. pH应激下不同水平的维生素C对团头鲂幼鱼感染嗜水气单胞菌的影响。pH应激试验结束后，从每槽中各取6尾鱼（每组18尾）进行腹腔注射感染嗜水气单胞菌试验，1 d后统计死亡率；并在攻毒前后采样检测团头鲂血液和肝脏的生化指标以及肝脏三种HSPs mRNA的表达水平。结果表明，与攻毒前相比，团头鲂幼鱼在感染嗜水气单胞菌后红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、肝脏超氧化物歧化酶（SOD）和抗超氧阴离子（ASAFR）的水平显著降低；血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、肝脏丙二醛（MDA）的水平以及HSP6
13、0、HSP70 mRNA的表达水平显著升高（P0.05）。攻毒后，与维生素C最低水平组（33.4 mg/kg Vc试验组）相比，65.8和133.7mg/kg Vc试验组显著提高了血清总蛋白（TP）的水平；251.5mg/kg Vc试验组显著提高了肝脏HSP60和HSP70 mRNA的表达水平，显著降低了血清谷丙转氨酶（ALT）和皮质醇（COR）的水平（P0.05）。统计也表明，维生素C添加组鱼的累计死亡率在攻毒后12 h、24 h均显著低于对照组（0.2 mg/kg Vc试验组）（P0.05）。由此可见，在日粮中添加维生素C可增强鱼体抵抗病原菌感染的能力。关键词：团头鲂；维生素C；生长；免疫
14、；pH应激 IXABSTRACTEFFECTS OF DIETARY VITAMIN C LEVELS ON GROWTH AND IMMUNITY OF JUVENILE WUCHANG BREAM (MEGALOBRAMA AMBLYCEPHALA)ABSTRACTAn 90 days feeding trial was conducted to estimate the adequate dietary vitamin C (Vc) requirement of juvenile Wuchang bream (Megalobrama amblycephala) and its effect on growth,. hematology and muscle physiochemical indexes. 450 healthy fish were selected and randomly divided into six groups that Vc were supplemented at 0.2 ,33.4,65.8 ,133
