韭子对老年小鼠免疫功能影响的实验研究_1

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果韭子对老年小鼠免疫功能影响的实验研究 【摘要】 目的 研究 韭子水煎剂对老年小鼠免疫功能的 影响 。 方法 以韭子水煎剂灌胃老年小鼠30 d， 应用 流式细胞技术检测小鼠T淋巴细胞亚群、放射免疫方法检测血清白介素2含量，ELISA方法检测血清中免疫球蛋白G的含量。结果老年组脾脏T淋巴细胞亚群比例失调，血清IL2和IgG含量下降；老年韭子水煎剂 治疗 组脾脏T淋巴细胞亚群由失衡恢复到平衡，血清IL2和IgG含量提高。结论 韭子水煎剂具有恢复老年小鼠免疫功能的作用。

2、 【关键词】 韭子水煎剂；老年小鼠；免疫功能 中药韭子为百合科植物韭的种子，含有生物碱、挥发油、皂甙、硫化物、蛋白质、氨基酸、油脂、维生素C等成分。研究表明，中药韭子具有补肝肾，暖腰膝，壮阳，抗炎抑菌、祛痰等药理作用1，并能增强小鼠非特异性免疫和体液免疫功能2。但对老年个体的免疫功能调节作用 目前 尚未见报道。本实验通过检测老年小鼠T淋巴细胞亚群，IL2活性以及IgG含量，探讨韭子对老年小鼠免疫功能的影响。 1 材料与方法 11材料 韭子购于佳木斯市药材公司。抗小鼠CD3、抗小鼠CD4、抗小鼠CD8单克隆抗体：北京医科大学免疫系。IL2试剂盒：解放军总 医院 科技 开发中心放免所；IgG EL

3、ISA检测试剂盒：北京邦定生物试剂公司。 1对象 健康昆明种小鼠来自本校实验动物中心，30只,雌雄各半，青年组(2月龄)10只,体重g,老年组(12月龄)20只,体重(505）g。 13 方法 131 中药制备 韭子50 g，按传统方法水煎煮2次，合并两次滤液后加热浓缩制成含生药量为1 g/ml的韭子水煎液。 132 实验分组 实验分为三组,青年组10只，老年组10只,老年韭子水煎剂治疗组10只。治疗组根据每鼠体重灌胃给予韭子水煎剂0ml每日1次2;老年组、青年组,灌服生理盐水0ml/只，每日1次。连续30 d后，取小鼠眼球血，离心分离血清，冻存，待检；小鼠断髓处死，无菌取脾，于Hanks液中

4、研碎，制成1106/ml脾细胞悬液。 1指标检测 141 T淋巴细胞亚群测定 将脾细胞悬液分别加入2个试管内，1 ml/管。第1管加入FITC标记的抗小鼠CD3+单克隆抗体40 l、第二管同时加入PE标记的抗小鼠CD4+单克隆抗体和FITC标记的抗小鼠CD8+单克隆抗体各20 l，作用30 min后，加入1 ml荧光洗液，200 r/min离心min，去上清。加入1 ml荧光保存液，流式细胞仪检测106个细胞中各细胞亚群的百分率。 14血清IL2的检测 采用放射免疫法测定法，按试剂盒说明书操作。 14血清IgG检测 ELISA法，按试剂盒说明书操作。 1统计学处理 实验各项指标以xs表示，通过

5、SPSS100软件进行统计学处理，组间进行方差 分析 、q检验。 结果 1 韭子水煎剂对老年小鼠T淋巴细胞亚群的 影响 见表1。老年组与青年组比较，CD4+ 亚群的比例、CD4+/CD8+的比值明显降低，统计学有显著性差异，说明模型成功； 应用 韭子水煎剂 治疗 后，治疗组CD4+亚群和CD4+/CD8+的比值与青年组比较无明显差异。表1 韭子水煎剂对衰老小鼠脾脏T淋巴细胞 亚群功能的影响(略) 韭子水煎剂对老年小鼠血清IL2和IgG含量的影响 见表2。老年组与青年组比较，血清IL2和IgG水平明显降低，具有显著性差异，说明模型成功；应用韭子水煎剂治疗后，治疗组与青年组比较，血清IL2和IgG

6、含量水平无明显差异。 表韭子水煎剂对小鼠血清IL2的影响(略) 讨论 在衰老个体，免疫器官出现萎缩,淋巴细胞总数下降,各亚群的功能也降低,CD4细胞和CD8细胞比例改变,表面的CD4受体和CD8受体的密度也下降；淋巴细胞分泌的细胞因子如IL2的含量也发生了改变，造成个体一生中第二个发病高峰3。通过本实验证明,韭子水煎剂能调整衰老个体T淋巴细胞亚群的失衡，起到了恢复细胞免疫功能的作用。并通过提高IL2和IgG水平，进一步的调整了衰老小鼠细胞免疫功能和体液免疫功能。T细胞介导细胞免疫，Th细胞(CD4+)和TS细胞(CD8+)的相互协调是调控的重要环节之一。 CD4+/ CD8+的比值反应机体免疫

7、内环境是否稳定的一个重要指标,两者平衡决定了免疫反应的总效应,若比值偏离正常值,说明机体免疫功能失调4。本实验结果表明：老年小鼠CD4+细胞明显降低，CD4+/ CD8+比值偏离正常水平，提示老年小鼠T细胞亚群的分布发生了变化,导致衰老小鼠细胞免疫功能低下。IL2的主要来源是Th细胞。主要促进CTL和NK细胞增殖;促进B细胞分化和增殖，B淋巴细胞经过细胞增殖、抗原选择、免疫球蛋白类型转换和细胞表面某些标志的改变以及体细胞突变，最终分化为浆细胞，产生高亲和力抗体，介导体液免疫5。老年小鼠血清IL2和 IgG较青年组明显减少，说明老年个体也存在着体液免疫功能的低下，这与产生IL2的Th淋巴细胞减少

8、有关，从而导致IL2的产生减少或活性降低，则刺激B淋巴细胞活化以及分泌抗体能力减弱。 韭子水煎剂可改善老年小鼠CD4+亚群比例及CD4+/CD8+比值、提高老年小鼠血清IL2水平和IgG的含量，则说明韭子可增强老年小鼠细胞免疫功能和体液免疫功能，达到恢复老年小鼠免疫功能低下的目的。所以，韭子作为重要的免疫调节剂，为老年免疫功能低下和预防免疫功能低下疾病提供了重要的实验依据。 【 参考 文献 】 1 肖培根新编中药志M第2卷北京：化学 工业 出版社，XX:512 于 艳韭子增强非特异性免疫和体液免疫作用的实验 研究 J黑龙江医药 科学 ，XX；29：1920鲁彦，吴绍宇，姚嵩坡，等玉米须对老年小鼠细胞免疫功能的影响J 中国 老年学杂志，XX；25：13878Fagnoni FF，Vescovini R，Passeri G,et alShortage of circulating naive CD8+ T cells provides new insights on immunodeficiency in agingJBlood，XX；95：28608张涛，柳朝阳，王建杰，等肉苁蓉总苷对D半乳糖所致衰老模型小鼠免疫功能的影响J 课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。