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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果超高压水射流对五味子中五味子醇甲含量影响的研究 作者：张小荣，徐柏三，王盛民，王懿萍，陈波，赵冬梅，陶敏 【摘要】 目的研究超高压水射流对五味子提取液中五味子醇甲含量的影响。方法通过150350 MPa的超高压水射流处理五味子水提醇沉液，采用薄层色谱法定性鉴别和高效液相色谱法定量测定五味子提取液中五味子醇甲的含量。结果不同超高压水射流处理五味子提取液后，五味子的薄层图谱中斑点个数、大小及Rf值无显著差异；高效液相色谱中峰个数及形状亦无明显差异，且经超高压1503
2、50 MPa水射流处理后，五味子中五味子醇甲的含量较五味子原液均有不同程度的升高，250 MPa压力处理后含量升高最多，更高的压力使五味子醇甲开始有下降的趋势。结论该研究可为超高压水射流对中药有效成分的影响提供依据，为五味子药材的药品、食品及保健品的开发研究进行有益的探索。 【关键词】 超高压水射流； 高效液相色谱法； 薄层色谱法； 五味子； 五味子醇甲 五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinesis (Turcz.)Baill.的干燥成熟果实，主产于我国东北地区，故习称“北五味子”。五味子具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效，临床上常用于久嗽虚喘，梦遗滑精，短气脉虚，内热消
3、渴，心悸失眠等1，神农本草经将其列为上品。五味子的化学成分主要有木脂素、挥发油、有机酸、萜类及多糖等多种化学成分2，木脂素是其重要的有效成分，具有保肝护肝、对中枢神经系统作用及抗氧化等作用3。五味子醇甲是五味子中木脂素类的主要成分之一，具有良好的水溶性，为五味子注射剂等制剂中的主要活性成分。药 理学 研究表明，五味子醇甲有明显的安定、镇静及抗惊活性，且对大脑皮层的兴奋抑制过程有调节作用。 超高压技术及超高压水射流技术都是近几十年 发展 起来的新兴技术，在食品加工及医药灭菌领域现已取得初步成效，超高压技术已用于五味子饮料的生产加工，不仅确保了质量，同时还提高了生产效率，减少了设备投资4。为促进超
4、高压水射流技术在饮料及医药行业中的应用，本文探讨了经超高压水射流处理后五味子水提液中五味子醇甲的含量变化情况，以期为进一步进行超高压水射流提取和超高压水射流灭菌等研究提供基础实验数据，并进行有益的探索。 1 仪器与材料 LC-20AT高效液相色谱仪，包括LC-20AT泵、SPD-20A紫外检测器、AT-330柱温箱、Class-VP数据处理系统、7725i进样阀；DPSB-3040型超高压水射流系统。 五味子药材购自于四川省峨眉山市药材公司，经本院王盛民教授鉴定为木兰科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz.）Baill.的干燥成熟果实；五味子醇甲对照品购自 中国 药
5、品生物制品检定所，批号：-XX06；乙腈为HPLC级；所用水为超纯水；其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 .1 供试品溶液的制备取五味子果实，洗净烘干后，粉碎成粗粉，称取本品约300 g，精密称定，10倍量水煎煮2次，/次，合并提取液，静置、离心，抽滤后定容至000 ml。量取五味子水提取液000 ml，用超纯水稀释至1L，分别在150，200，250，300和350 MPa压力条件下，经超高压水射流处理，将各溶液摇匀、静置，分别取未经处理和各处理液的上清液过m微孔滤膜，分别标号为0，1，2，3，4，5号，作为供试品溶液。 .2 对照品溶液的制备精密称取在40干燥2h的五味子醇甲对照品，置5
6、0 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即制成每毫升含五味子醇甲 mg的对照品溶液。 .3 五味子的薄层色谱鉴别照薄层色谱法试验，吸取“”和“”项制备的供试品溶液和对照品溶液各10 l，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出晾干，置紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。斑点较为圆整，分离效果好，各供试品斑点大小及Rf值无显著差异。 .4 HPLC色谱条件Symmetry C18色谱柱；流动相为甲醇-水；检测波长27nm；流速min-1；柱温30 ；进样量10 l。在该色谱条件下，理论塔板数按五味
7、子醇甲峰 计算 不低于000，且样品中五味子醇甲与其他组分分离效果良好，对照品及样品的色谱图见图1。 .5 线性关系考察分别精密吸取“”项下制备的五味子醇甲对照品溶液2，4，6，8，10 l进样测定，记录各样品峰面积。以五味子醇甲进样量为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，得回归方程Y=，r=。结果表明在 g范围内有良好的线性关系。 .6 精密度实验精密吸取五味子醇甲对照品溶液10 l，重复进样5次，测定峰面积，得RSD为%。 .7 稳定性实验取“” 项未经超高压水射流处理的供试品溶液，同法分别于2，4，6，8，2h测定，进样10 l/次，结果RSD为%，表明样品在2h内稳定。 .8 重复性实验取同一
8、批样品粉末，按样品含量测定法同法测定5次，RSD为%，表明该测定方法重复性比较好。 .9 加样回收实验采用加样回收法，称取已知含量的五味子药材5份，精密称定，再分别精密加入五味子醇甲对照品溶液20 ml，按“”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样10 l，记录色谱图，结果五味子醇甲平均回收率为%，RSD为%。见表1。表1 五味子醇甲回收率实验结果 .10 样品的测定精密吸取“”项和“”项下制备的供试品溶液和对照品溶液各10 l分别进样5次，按上述色谱条件测定五味子醇甲含量。结果见表2。表2 样品测定结果 讨论 五味子是著名的滋补性中药，进入21世纪后，我国已把五味子列入保健食品原料5。
9、随着功能性食品在国际上掀起热潮，已经开发出多种关于五味子的功能性食品，可见五味子的食用和保健价值正逐步为人们所重视，对其进行研究开发也越来越深入。本实验对五味子提取液进行超高压水射流处理，对深入研究其主要有效成分的结构、合成及活性，阐明五味子在传统中医应用中的功效具有重要的意义。 木脂素(ligaan)类化合物具有联苯环辛二烯结构(dibenzoa,ccycloo -ctadiene),其化学结构式及五味子醇甲的化学结构式见图2。 本实验的结果表明，在研究的150350 MPa超高压力范围内，经超高压水射流处理后，五味子中主要有效成分五味子醇甲的含量均有不同程度的升高，在150250 MPa范
10、围内，随着处理压力的升高，五味子醇甲的含量随之增加，最高较原液增加了%；但处理压力达到250 MPa以上时，随着压力的升高，五味子醇甲的含量反而呈下降趋势。经过超高压水射流处理后，五味子醇甲含量升高的原因可能是经过超高压力和水射流作用后，破坏了与五味子醇甲相结合的非共价键，使五味子醇甲能够游离出来；同时高压条件可抑制五味子醇甲类似物的分解酶活性，激活部分合成酶，促进二芳基经自由阳离子中间体氧化偶合而形成木脂素骨架，因此增加了处理液中五味子醇甲的含量。但是由于在250 MPa以上过高的压力作用下，形成五味子木脂素骨架比较困难，同时高压高速的水射流撞击容器产生的温度升高分解和破坏了五味子醇甲的结构
11、，压力越高，其破坏程度就越高，因此其含量随着压力的升高反而呈下降的趋势。 通过对单一成分含量的测定，来考察超高压水射流加工处理中药液体制剂方法的可行性，虽不能对五味子药材质量有完整和 科学 的评价，但可以从某一方面为指导生产提供科学 参考 。 【参考 文献 】 1李 萍，赵守训，李昌齐，等.生药学M.北京： 中国 医药科技出版社,XX:227. 2郑占虎，董泽宏，佘 靖，等.中药 现代 研究与临床应用，第1卷 M.北京:学苑出版社，1997：148.3Hanckejl,Burgos RA,Ahumada chinensis (TurczBail) J.Fitoterapia，1999，70(5
12、):451.4刘长娇，张守勤，吴 华，等.超高压技术在五味子饮料加工中的应用J .农业工程学报，XX，22(6) :227.5Tianhui Huang,Pingniang Shen,Yongjia separation and purification of deoxychisandrin and -schisandrin from schisandra chinensis ( Turcz1) high-speed countercurrent chromatographyJ. Journal of Chromatography A,005, 1066(2):239. 课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。
