胃乐煎对hp感染模型大鼠胃病理组织的影响

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果胃乐煎对HP感染模型大鼠胃病理组织的影响胃乐煎是国家级名老中医陆拯主任中医师多年从事脾胃病的经验方基础上增加蜂胶研制成，对胃脘痛、胃痞等具有显著疗效。现代药理学研究证明，蜂胶具有免疫增强作用、抗氧化作用、抗溃疡作用和抗菌消炎作用1。因此我们用该方对HP感染模型大鼠进行实验观察，为临床上胃乐煎治疗HP感染提供实验依据。1实验材料实验药物胃乐煎片：棕色颗粒，主要由蜂胶、鸡矢藤、吴茱萸、炒白术、黄连、枳壳等组成，每片重量，含生药，临床用量为每人12片日，60片/瓶，批

2、号：，每片含黄连为，由上海交大穗轮药业有限公司提供，使用时用蒸馏水配成所需浓度；养胃舒冲剂：为棕黄色至棕色的颗粒，味酸、甜，由党参、白术、黄精等组成，10g6袋，批号：，合肥神鹿双鹤药业有限公司生产；丽珠维三联：由枸橼酸铋钾片、替硝唑片、克拉霉素片组成，批号，由丽珠集团丽珠制药厂生产。实验试剂哥伦比亚血琼脂基础：Oxoid公司产，批号 CM0331，规格：500g/瓶，购买于北京赛默飞世尔生物化学制品有限公司。无菌脱纤维羊血：购买于北京兰伯瑞生物技术有限责任公司生产，批号 ，规格：100mL/瓶；去氧胆酸钠：500g/瓶，上海蓝季生物公司购买。实验仪器HR40-IIA2生物安全柜、XQ-280

3、SD高压灭菌器、TGL-168离心机、YQX-II型厌氧培养箱、CM1850 LEiCA病理切片机、BM-VI生物组织冷冻包埋机、T S-12F生物组织自动脱水机、 M PLXEL病理图像分析系统。实验动物幼龄Wistar大鼠，雌雄兼备，体重80100g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，许可证号码：SCXKXX-0005，动物合格证号：XX，饲养于浙江省中医药研究院动物中心，许可证号：SYXK(浙XX-0122)。菌SS1株( Sydney Strain 1)中国疾病预防控制中心赠送，接种在含10%羊血及幽门螺杆菌选择性添加剂的哥伦比亚血琼脂培养基上，37、微需氧条件下(% O2、10% C

4、O2、85% N2) 培养。统计学处理数据均以s表示，经单因素方差分析后采用ANOVA t检验进行统计分析。2实验方法大鼠经口幽门螺杆菌感染模型取80100g的幼龄Wistar大鼠，雌雄各半，按去氧胆酸钠法造模慢性胃炎法2，用20mmol/L去氧胆酸钠和60%乙醇联合刺激，连续3周，再灌胃丽珠维三联1周，清除大鼠胃內杂菌，禁食1214h，灌胃5NaHCO32mL，5min后灌胃从培养基上冲洗下的HP菌液，30min后给食，每周感染2次，共8次。实验方案取84只上述方法造模后大鼠，随机分为6组，每组14只，雌雄各半，分别为胃乐煎高剂量组、中剂量组、低剂量组、养胃舒对照组、丽珠维三联对照组及模型对

5、照组，另取14只正常大鼠作为正常空白对照组。丽珠维三联阳性组给药1周，其它各组分别给相应药物6周，并停药4周。实验结束时，7组大鼠均禁食12h，脱颈椎处死大鼠，取胃用无菌生理盐水洗去胃内容物，用福尔马林固定，常规制作病理切片，观察胃黏膜炎症情况、胃黏膜腺体厚度、胃腺体数目、壁细胞、主细胞数目等指标。炎症情况按炎症细胞浸润的程度分为03七个级别，0级：无炎症；级：镜下观察炎症介于0与1之间；1级：在胃小凹区或固有腺底部可见多个慢性炎细胞浸润；级：镜下观察炎症介于1与2之间；2级：在胃黏膜小凹至黏膜肌层均有较多炎细胞浸润；级：镜下观察炎症介于2与3之间；3级：胃黏膜内可见成堆炎细胞聚集灶。3实验结

6、果胃乐煎对HP模型大鼠体重的影响结果见表12、插页图1。由表12及插页图1可见，HP模型大鼠的体重较正常组有明显下降，给胃乐煎后大鼠体重较模型大鼠有明显增高，给药6周后尤其明显。胃乐煎对HP模型大鼠胃黏膜病理组织的影响结果见表34，插页图26。由表34可见，HP模型大鼠的腺体厚度、腺体数目、主细胞较正常组有明显下降，而炎症指数较正常组有明显升高；给药胃乐煎后大鼠腺体厚度、腺体数目、主细胞有明显增加，炎症指数有明显下降，与模型组比较有显著性差异；胃乐煎对大鼠壁细胞数量的影响不明显。上述指标显示，胃乐煎对HP模型大鼠的胃组织有明显的康复作用。由插页图26可见，正常组大鼠胃黏膜上皮细胞排列整齐，无缺

7、损或脱落，腺体形态规则，大小形态基本一致，上皮细胞多呈单层排列，细胞质透明或呈小空泡状，腺上皮与腺管间分界较清楚；固有层偶见少许急、慢性炎细胞浸润，其间毛细血管无扩张充血现象，黏膜肌层平滑肌呈环状排列较薄，未见增生及向黏膜层深入的现象。模型组大鼠胃黏膜萎缩变薄，腺体数量略有减少，间质内有多量急、慢性炎细胞浸润，有些炎细胞成团聚集，毛细血管扩张充血，黏膜肌层增厚，结缔组织及平滑肌组织增生并向黏膜层腺体间伸延。主细胞、壁细胞均不同程度略有减少，未出现明显肠化现象。胃乐煎治疗后炎症细胞浸润状况有减少，黏膜层仍有多量急、慢性炎细胞浸润，黏膜排列规整，腺体、细胞大小、形态一致，无明显变性坏死，平滑肌增生

8、不明显，壁细胞与模型组比较无明显差异，无不典型增生及肠化现象。4讨论胃乐煎是国家级名老中医陆拯主任中医师多年从事脾胃病的经验方基础上增加蜂胶研制成，在临床观察中该经验方对胃脘痛、胃痞等具有显著疗效3。本方由蜂胶、鸡矢藤、吴茱萸、炒白术、黄连及枳壳组成。方中蜂胶为君药，性苦寒，具有抗菌消炎、调节免疫、抗氧化的作用4，臣以鸡矢藤，具有解毒消肿，活血止痛作用5；白术苦甘性温，“扶植脾胃，消食除痞”，具有调节胃肠道蠕动，保护胃黏膜的作用6；吴茱萸归肝、脾、胃、肾经，味辛苦而性热，既能温胃暖肝以祛寒，又善和胃降逆以止呕，兼有行气止痛7；佐以黄连清热解毒，祛湿调中，且能监制湿燥之性，不致伤阴，研究表明清热

9、药能增强微循环，有利于改善胃黏膜的血液供应和营养，降低血管的通透性，减少炎症渗出，有利于局部炎症的消散和吸收8；使以枳壳行气散结，宽中消胀，理气不伤阴，又能引诸药以入脾胃9。全方辛开苦降、寒温并用，补泻兼施，共奏健脾益气，止痛消痞，活血化瘀功效，使肝气疏泄，脾胃气机调畅，则诸症可愈。实验表明，胃乐煎对HP模型大鼠体重有明显增加作用，对胃腺体数目、腺体厚度、主细胞数目均有明显增加，对胃组织炎症指数有显著降低作用，上述指标显示，胃乐煎对HP模型大鼠的胃组织有明显的康复作用，这为胃乐煎开发为中药新药提供实验依据。 课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。