《疏肝理肺方防治应激条件下大鼠哮喘的作用机制研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《疏肝理肺方防治应激条件下大鼠哮喘的作用机制研究（17页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果疏肝理肺方防治应激条件下大鼠哮喘的作用机制研究 作者：童瑶，张宁霞，陈惠娟，倪力强 【关键词】 ,疏肝理肺法 摘要目的：探讨心理因素对哮喘发病的 影响 和调肝法调节应激、防治哮喘的作用机制。 方法 ：用卵蛋白加束缚应激刺激建立应激条件下哮喘大鼠模型，采用放射免疫 分析 法、酶联免疫吸附法、原位杂交、免疫组化、光镜及电镜等方法，检测各组大鼠血浆皮质酮、白细胞介素4、干扰素、海马糖皮质激素受体mRNA和下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素阳性神经元，并观察肺和海马组织形态
2、学的变化。结果：疏肝理肺方可明显降低血浆皮质酮水平，升高血浆干扰素，降低血浆白细胞介素4，减少下丘脑室旁核CRH阳性神经元，上调海马CA3区糖皮质激素受体mRNA的表达，减轻海马神经元的损伤，并可明显减轻应激条件下哮喘大鼠肺组织的病理改变。结论：疏肝理肺方通过抑制应激条件下哮喘大鼠下丘脑垂体肾上腺皮质轴功能的亢进及调节免疫系统的功能，从而起到防治哮喘的作用。 关键词应激; 哮喘; 疏肝理肺法 Protective and therapeutic effects of Shugan LifEi Recipe on rats with asthma under stress and the mec
3、hanisms ABSTRACT Objective: To explore the influence of psychological factor on asthma, the protective and therapeutic effects of Shugan LifEI Recipe on rats with asthma under stress and the mechanisms. Methods: Allergy and stressinduced asthma models were established in rats by giving ovalbumin and
4、 restraining stress. Radioimmunoassay, enzyme linked immunosorbent assay, in situ hybridization and immunohistrochemical method were used to detect plasma corticosterone, IL4, IFN, expression of glucocorticoid receptor (GR) mRNA in hippocampus and adrenocorticotropic hormone corticoliberin (CRH) pos
5、itve neuron in hypothalamus. Optical and electron microscopes were used to observe the morphological changes of pulmonary hilar and hippocampal : Shugan Lifei Recipe (SGLFR) could reduce plasma corticosterone, decrease CRH positive neurons in paraventricular nucleus of hypothalamus, upregulate the e
6、xpression of GR mRNA in hippocampus and reduce the injury of hippocampal neuron. SGLFR had certain inhibitive effect on hyperfunction of hypothalamopituitaryadrenal cortex (HPA) axis in rats with asthma under stress and could also relieve the pathological changes of the pulmonary hilar tissue. The l
7、evel of plasma IFN was increased while the level of plasma ILwas decreased in SGLFRtreated group. Conclusion: The mechanism of SGLFR in treating the rats with asthma under stress is probably to regulate the hyperfunction of HPA axis and the disorder of immuosystem. KEY WORDS stress; asthma; dispersi
8、ng stagnated liver qi and regulating lung qi 支气管哮喘是一种多病因疾病，发病机制十分复杂，严重危害人类的健康。其发病受生物、心理和 社会 三方面因素的影响，其中精神心理因素在哮喘的发生、 发展 和转归中起着重要的作用。 现代 社会工作和生活节奏日益加快，竞争日趋激烈，机体长期处于紧张状态下，通过影响神经内分泌系统继而干扰机体的免疫功能，从而诱发或加重哮喘。 中医学很早就认识到不良的环境或精神刺激与躯体疾病的发生、发展有密切的关系。肝主疏泄，调畅气机，在心理应激调节中起着决定性的作用。现代医学认为：任何形式的应激都可导致神经内分泌功能紊乱，造成免疫功
9、能障碍，使机体对各种感染性疾病呈易感状态。大量 研究 表明：肝主疏泄功能与现代医学的神经内分泌免疫 网络 密切相关，调肝法有调整神经内分泌免疫功能失调的作用。本实验运用疏肝理肺方 治疗 应激条件下的哮喘大鼠，探讨心理因素对哮喘发病的影响以及调肝法调节应激、防治哮喘的作用机制。 1材料与方法 实验动物分组及模型建立 SD雄性大鼠56只，体质量g，随机分为7组：正常组、哮喘组、应激组、哮喘应激组、地塞米松组、理肺组和疏肝理肺组，每组8只。哮喘组、哮喘应激组、地塞米松组、理肺组和疏肝理肺组大鼠分别予以腹腔注射抗原液1 ml致敏；正常组和应激组大鼠则分别予以腹腔注射等量生理盐水。致敏后第8天起，应激组
10、、哮喘应激组、地塞米松组、理肺组和疏肝理肺组大鼠予以双后肢立式固定，行束缚应激刺激，h/d，共3周；致敏后第8天起，哮喘组、哮喘应激组、地塞米松组、理肺组和疏肝理肺组大鼠另分别予以2%卵蛋白雾化吸入，min/d，共2周。 药物及给药方法 理肺方即小青龙汤，由麻黄g、桂枝g、炙甘草g、细辛g、干姜g、半夏g、五味子g和白芍g组成；疏肝理肺方即小青龙汤合四逆散，由麻黄g、桂枝g、炙甘草g、细辛g、干姜g、半夏g、五味子g、白芍g、柴胡g和炙枳实g组成。理肺方和疏肝理肺方用水煎制后滤液，制成浓缩口服液，分别含生药/ml和/ml。地塞米松于灌胃前用生理盐水配制成混悬液，浓度为 mg/ml。致敏后第8天
11、起，地塞米松组、理肺组和疏肝理肺组大鼠分别予以地塞米松混悬液10 ml/kg、理肺方口服液10 ml/kg和疏肝理肺方口服液10 ml/kg灌胃；正常组、应激组、哮喘组和哮喘应激组大鼠则分别予以等量生理盐水灌胃。共给药3周。 动物处理及取材 实验第4周末，用25%乌拉坦腹腔注射麻醉大鼠，抽取腹主动脉血立即注入抗凝管中，000 r/min离心1min，分离血浆，分装保存于70低温冰箱中待测。腹主动脉抽血后立即灌流大鼠，每组选取灌流成功的大鼠3只，取肺组织备光镜检查及视交叉至乳头体的脑组织备光镜、电镜、免疫组化和原位杂交检查。 血浆皮质酮的测定 血浆皮质酮放射免疫检测试剂盒，由晶美生物工程有限公司
12、提供。根据标记的与未标记的皮质酮抗原竞争性结合其特异性抗体的原理进行检测。反应系统中123I皮质酮抗原抗体复合物的形成量受样品中未标记的皮质酮抗原量的影响，即样品中未标记皮质酮的含量越高，则123I皮质酮抗原抗体复合物的形成就越少，通过测定抗原抗体复合物的放射性， 计算 相关参数，绘制标准曲线，直接读出样品中皮质酮的含量。实验步骤严格按试剂盒说明书操作。 海马糖皮质激素受体mRNA的检测 海马糖皮质激素受体mRNA原位杂交试剂盒，由博士德生物工程有限公司提供，采用漂浮法检测。取视交叉至乳头体的脑组织，行快速连续冰冻切片，检测步骤严格按试剂盒说明书进行，均为无菌操作。采用IMS细胞图像分析系统分
13、析结果。 下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素阳性神经元的检测 下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素阳性神经元采用SABC免疫组化试剂盒进行检测，试剂盒由博士德生物工程有限公司提供。取视交叉至乳头体的脑组织，行快速连续冰冻切片，检测步骤严格按试剂盒说明书进行。采用IMS细胞图像分析系统分析结果。 白细胞介素4和干扰素的检测 白细胞介素4和干扰素酶联免疫试剂盒，均由晶美生物工程有限公司提供。 形态学观察 大鼠海马光镜形态学观察 取大鼠视交叉至乳头体的脑组织，常规光镜下观察。 大鼠海马透射电镜形态学观察 依据鼠脑立体定位图谱，取海马矢状切面1 mm3组织块，常规电镜下观察。 大鼠肺组织光镜形态学观察 取大鼠肺
14、门组织，常规光镜下观察。 统计学方法 采用SPSS 软件进行统计学分析。计量资料均数用xs表示，采用单因素方差分析和q检验。 2结果 .1疏肝理肺方对应激条件下哮喘大鼠血浆皮质酮的影响 应激组与正常组比较，血浆皮质酮水平明显升高；哮喘应激组与哮喘组比较，血浆皮质酮水平亦有明显升高；疏肝理肺组与理肺组比较，血浆皮质酮水平明显降低。见表1。 表1 各组大鼠血浆皮质酮水平比较 Tab 1 Comparison of plasma corticosterone in different groups *P .2疏肝理肺方对应激条件下哮喘大鼠海马GR mRNA和下丘脑CRH阳性神经元的影响 应激组与正常
15、组比较，海马GR mRNA表达明显减少，下丘脑CRH阳性神经元的数目明显增加；哮喘应激组与哮喘组比较，海马GR mRNA表达明显减少，下丘脑CRH阳性神经元的数目明显增加；疏肝理肺组与理肺组比较，海马GR mRNA表达明显增加，下丘脑CRH阳性神经元的数目明显减少。见表2。 .3疏肝理肺方对应激条件下哮喘大鼠海马形态的影响 光镜下观察结果：正常组大鼠海马锥体细胞排列规则，细胞核圆而大，核仁清晰；哮喘组大鼠海马锥体细胞排列较规则，CA3区可见暗神经元；应激组和哮喘应激组大鼠海马锥体细胞排列不规则，在CA3区可见大量的锥体细胞核固缩；地塞米松组和理肺组大鼠海马锥体细胞异常改变与哮喘应激组基本相近；
16、疏肝理肺组大鼠海马锥体细胞排列比较规则，在CA3区核固缩神经元明显减少。 常规透射电镜下观察结果：正常组大鼠海马锥体细胞核形态规则，核膜光滑，核异染色质分布均匀，线粒体丰富，嵴排列规则；哮喘组大鼠海马锥体细胞核形态规则，但胞浆疏松，部分线粒体出现空泡，嵴排列紊乱；应激组和哮喘应激组大鼠海马锥体细胞核形态不规则，核异染色质明显增多，聚集成块，胞浆疏松，多数线粒体扩张、出现空泡、嵴排列紊乱；地塞米松组大鼠海马锥体细胞形态不规则，细胞器变性；理肺组大鼠海马锥体细胞胞浆疏松，多数线粒体扩张、出现空泡；疏肝理肺组大鼠海马锥体细胞核形态较规则，核膜光滑，核异染色质分布较均匀，胞浆疏松，线粒体丰富但致密。
