《干扰素联合无环鸟苷、维生素c治疗单疱病毒性角膜炎的实验研究_1》由会员分享，可在线阅读，更多相关《干扰素联合无环鸟苷、维生素c治疗单疱病毒性角膜炎的实验研究_1（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果干扰素联合无环鸟苷、维生素C治疗单疱病毒性角膜炎的实验研究摘要 目的 通过动物实验 研究 干扰素联合无环鸟苷眼液、维生素C 治疗 单疱病毒性角膜炎的疗效。 方法 在Hep-2细胞上进行单纯疱疹病毒-I型接种培养，制作兔HSK模型。 结果 联合治疗组分别与种毒对照组、无环鸟苷组、干扰素组相比，角膜上皮病变分值差异有显著性；平均治愈时间：联合治疗组为天，干扰素组为天，无环鸟苷组为天；病理结果：联合治疗组角膜上皮及基质病变程度同期比明显轻于其他3组。 结论 干扰素与无
2、环鸟苷、维生素C联合 应用 治疗HSK能增强药物的抗病毒作用、抑制HSV复制、提高机体的免疫力，与单独使用干扰素、无环鸟苷眼液相比，提高了疗效，缩短了病程，取得了较满意的效果。 关键词 干扰素；无环鸟苷；维生素C；单纯疱疹病毒；角膜炎 Study on treating herpes simplex keratitis with interferon，acyclovir and vitamin C Abstract Objective To study the rapeutic effect of IFN and ACV，VitC on eyes of rabbit herpes simple
3、x keratitis (HSK) models. Methods Herpes simplex virusI(HSV1) was propagated and quantitated on Hepcells so that rabbit models of HSK could be Compared with the other groups，the corneal epithelial involvement score of the IFN+ACV+VitC group had remarkable difference. The curative time： the IFN+ACV+V
4、itC group was () days，the IFN group was () days，and the ACV group was () days. Results of pathological records:The development of cornea disease of IFN combined with ACV，VitC was lighter than that of the other groups. Conclusion The antivirus effect was stronger when the interferon and acyclovir，vit
5、amin C were used response to treatment of IFN combined with ACV，VitC was better than attained with ACV，IFN curative time was shorter and the curative effect was better. Key words interferon；acyclovir；vitmit C；herpes simplex virus；keratitis 单纯疱疹病毒性角膜炎是常见的危害视力的病毒性眼病，在角膜盲中居首位，多发于青壮年，男女之比为21。其特点是多类型、易复发
6、，发病机制与免疫状态有关1。 目前 我国每年约进行角膜移植3000例，其中HSK所致的角膜盲占首位2。本文利用HSV-1接种兔角膜建立HSK动物模型，研究干扰素联合无环鸟苷、维生素C治疗HSK的疗效，以求找出治疗HSK有效的药物及方法。 1 材料与方法 材料 动物4只健康新西兰白兔，体重，雌雄不限，双眼无结膜炎、角膜炎等眼部疾病。 药品 干扰素：长春长生基因药业股份有限公司生产。无环鸟苷眼液：湖北潜江制药股份有限公司生产。维生素C针剂：山东新华制药股份有限公司生产。 细胞和病毒 Hep-2细胞：为人喉癌细胞；HSV-1病毒：为HSV-1Sm44株，在Hep-2细胞上增殖，TCID50/ml=1
7、06，由山东省医学 科学 院基础研究所微生物室提供。 1. 方法 制作HSK动物模型 于接种病毒前2天给实验兔双眼滴加氯霉素眼液，每次1滴，每日3次。手术前24只兔双眼分别用1%盐酸丁卡因滴眼液滴眼，3min后再滴1次，以麻醉兔眼。用号针头作兔角膜上皮层井字划痕，长度56mm，深度约，吸取HSV-1毒株原液30l滴入结膜囊，被动闭合兔眼，轻揉20s。接种病毒2448h后，将兔眼用荧光素染色，在裂隙灯下观察角膜感染情况，当兔角膜出现树枝状或地图状病灶时，说明病毒感染成功，动物模型制成。 动物分组及治疗方法4只兔感染成功后随机分为4组，每组各6只：种毒对照组：不用任何药物治疗。无环鸟苷组：给予无环
8、鸟苷眼液治疗。方法：每2h滴眼1次，每次1滴，每天5次。干扰素组：给予干扰素点眼，方法同ACV组。联合治疗组：给予干扰素和无环鸟苷眼液交替点眼，给药方法同ACV组，2种眼药水点眼每次间隔10min。每周每只兔球结膜下注射VitC0mg 1次，共2次。 裂隙灯显微镜观察 每日用荧光素染色后，在裂隙灯下观察兔角膜上皮、基质及前房病变程度，并进行评分。角膜上皮病变评分标准采用Trousdale记分法3。Trousdale计分法是国际通用标准方法，以1/4为间隔，即上皮病变面积占整个角膜面积的25%，即累计1分4。其他评价参数包括：眼睑、结膜、虹膜和房水，其中以角膜上皮病变分值为主要指标。 病理切片制
9、作 于接种病毒后第10天分别从4组兔中随机各取一只兔角膜，经4%中性甲醛固定液固定、石蜡包埋后，使用LEIcia128组织切片机连续切片，厚度4m，然后用HE (苏木精伊红)染色，显微镜下观察。 1. 统计学方法 采用美国SPSS研究公司研制的统计软件包中配对样本T检验，对结果进行统计学 分析 。 结果 .1 裂隙灯显微镜检查 接种病毒后24h，所有兔角膜上皮均出现点状、棒状浸润病灶。各组兔角膜病变 发展 程度，见表1。 . 种毒对照组 角膜病变发展很快，病变程度为各组中最重。与其他3组相比，CEIS差异均有非常显著性均未能自愈。 表1 各组不同时期病变程度记录表 .1. 无环鸟苷组 上皮及基
10、质病变程度较轻，以点状病灶为主，基质水肿、浸润轻微，第1113天上皮迅速愈合。与IFN组相比，CEIS差异无显著性。结膜炎发病率为80%，虹膜炎发病率为60%，无前房积脓及眼睑疱疹发生，平均治愈时间为天。 .1. 干扰素组 病变程度与无环鸟苷组类似。角膜及结膜病变程度轻、较局限，病变以点状、棒状病灶为主，无明显溃疡形成，病变恢复较快，第14天仅个别角膜有点、片状病灶残留。基质病变较轻，为轻度水肿。结膜炎发病率为100%，虹膜炎发病率为60%，未出现前房积脓及眼睑疱疹。平均治愈时间为天。 .1. 联合 治疗 组 与以上3组相比，CEiS差异均有显著性。角膜病变程度最轻，以点状病灶为主，基质水肿、
11、浸润较轻微，第911天上皮迅速愈合，角膜无溃疡及瘢痕形成。结膜炎发病率为70%，虹膜炎发病率为30%，无前房积脓及眼睑疱疹发生。平均治愈时间为天。 . 病理切片结果 种毒对照组：上皮细胞增大，核大呈椭圆形，基质浅层水肿，有较多浆细胞及少许中性粒细胞浸润；干扰素组：角膜上皮层轻度水肿，上皮细胞增大，基质浅层有部分浆细胞及少许中性粒细胞浸润；无环鸟苷组：角膜上皮轻度水肿，上皮细胞增大，基质浅层有少许炎性细胞浸润；联合治疗组：角膜病变程度较轻，上皮及基质层无明显水肿，上皮层有少许炎性细胞，基质层未见明显炎性细胞浸润。 讨论 HSV感染在人群中极为普遍， 文献 报道，美国每年大约有40万人受到HSV感
12、染，每年估计有48000例活动性眼病发作，其中2万人为新发病例5。HSK病情迁延，易反复发作，终使视功能受到严重损害。单独用一种抗病毒药易产生耐药性且复发率较高。有关T细胞亚群在原发性致病中的重要性还有争议。在兔眼模型发现，角膜感染后在三叉神经节内有T淋巴细胞的存在6。进一步的 研究 发现，辅助性T细胞I型CD4+细胞起着更加特异性的作用。无环鸟苷是二代核苷类选择性抗疱疹病毒代表药物，实验证明无环鸟苷更易进入HSV感染的细胞，随机被HSV诱导的胸腺嘧啶核苷激酶磷酸化为ACVMP，在相应酶作用下进一步酸化成ACVTP，ACVTP竞争性抑制病毒DNA聚合酶，从而抑制病毒DNA合成，正常细胞的TK不
13、能使ACV磷酸化，因而对正常DNA聚合酶无作用，不能 影响 正常细胞7。 目前 ，无环鸟苷是治疗HSK的首选药物，具有作用强、选择性高、毒性少等优点，而且具有良好的眼内穿透性，能透过完整的角膜上皮和基质，在房水中达到一定的治疗浓度。 应用 无环鸟苷治疗浅层HSK疗效已肯定，对深层HSK的治疗稍逊8。干扰素不但可以阻止病毒衣壳蛋白的合成，进一步抑制HSV的复制，从而发挥直接抗病毒作用；而且它还有免疫调节作用，可通过调节T细胞的免疫功能，加强吞噬细胞活性，提高NK细胞的杀伤作用，从而杀灭病毒9，10。干扰素是目前公认的一种广谱有效的抗病毒药物，是一种高活性、多功能的诱生蛋白，而且能增强一般抗病毒药
14、物的抗病毒能力。维生素C是一种水溶性化合物，也是一种重要的自由基清除剂，能参与体内糖代谢氧化还原过程和神经递质的合成，增强机体的抵抗力，维持免疫功能，促进病变的恢复。现已广泛用于治疗某些全身病毒感染，无毒副作用。本组动物每次给予30mg球结膜下注射，每周1次，共2次，未见任何不良反应。有学者认为氧自由基参与HSK的发生过程，在HSK时，角膜组织脂质过氧化物明显增高，且其生成量与炎症发生的程度呈正相关。氧自由基不但损害角膜上皮细胞和内皮细胞，而且还吸引吞噬细胞在炎症部位浸润，加大炎症反应，加重角膜的病理损伤11。而维生素C是一种重要的自由基清除剂，在HSK发生时应用维生素C治疗可减轻氧自由基对角
15、膜组织的损伤，增强机体的抵抗力，促进病变的恢复。因此笔者认为干扰素联合无环鸟苷、维生素C治疗实验性HSK疗效较好，复发率低，无毒副作用，是一种值得临床推广的治疗措施。 参考 文献 1 李凤鸣.眼科全书.北京:人民卫生出版社，1996，1379. 谢立信.角膜病治疗进展.眼科经纬，1998，1：2. Trousdale MD，Nesburn of 1(2Fluoro-2 DeoxyBDA rabinofu ranosy1) thymine against herpes simplex virus in cell cultures and rabbit Agents Chemother，1983，23(6):809. O Brien WJ，Tsao LS，Tailor specific accumulation of latencyas
