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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果XRCC 2 基因多态性与非小细胞肺癌易感性的关系作者：王瑞，曾辉，李琰，王娜，张健慧，张金文，王伟，刘俊峰【关键词】 非小细胞肺癌；XRCC,2基因；易感性；遗传多态性Association between gene polymorphism of XRCC and susceptibility of nonsmall cell lung cancers1Department of Thoracic Surgery, Fourth Affiliated Hos
2、pital, HebEi Medical University,Laboratory of Molecular Biology, HebEI Cancer Institute, Shijiazhuang , China,National Center for AIDS Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing , China,Operation Room, Thoracic Hospital of Hebei Province, Shijiazhuang , China,
3、Department of Surgery, Chengan County Hospital of Hebei Province, Handan , China【Abstract】 AIM: To observe the association between the risk of nonsmall cell lung cancers and polymorphism and gene frequency of XRCC C41657T and G4234C in north Chinese Han population. METHODS: The single nucleotide pol
4、ymorphisms (SNPs) of the C41657T and G4234C in the XRCC gene were genotyped by PCRRFLP analysis in2nonsmall cell lung cancer patients and00 healthy controls. RESULTS: There was XRCC gene C41657T and G4234C polymorphism in north Chinese Han population. The genotype and allelotype distributions of the
5、 XRCC C41657T and G4234C SNPs in the nonsmall cell lung cancer patients were not significantly different from those of the controls (all P). When the two XRCC SNPs were combined, the haplotype distribution in the nonsmall cell lung cancer patients was also not significantly different from that of th
6、e controls (P). But stratification analysis according to histological types and smoking status showed that, compared with C/C genotype, the combination of C/T and T/T genotypes of XRCC C41657T increased the risk of developing nonsmall cell lung cancer (OR: ,5% CI: ) and that of adenosquamous carcino
7、ma (OR:.45,5% CI=) in nonsmokers. No association was observed between XRCCG4234C and the ty pe of nonsmall cell lung cancers, and also there was no evidence for the interaction between XRCC G4234C and smoking status. CONCLUSION: XRCC gene C41657T allele may be a susceptibility factor for the develop
8、ment of nonsmall cell lung cancer and adenosquamous carcinoma in the nonsomkers of north Chinese Han population.【Keywords】 nonsmall cell lung cancer; XRCC gene; susceptibility; genetic polymorphism【摘要】目的： 观察非小细胞肺癌易感性与XRCC2基因 C41657T 及G4234C多态性及基因频率之间的关系. 方法： 应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性方法对226例非小细胞肺癌患者和300例正常对
9、照者XRCC基因 C41657T及G4234C多态性进行了分析. 结果： 中国北方汉族人存在XRCC基因C41657T及G4234C多态性；两组人群两个多态位点基因型、等位基因及单体型频率无统计学差异；但分层分析显示非吸烟者XRCC1657T基因携带者患非小细胞肺癌风险是XRCC C1657C基因型的倍，患腺鳞癌的风险是XRCC C41657C基因型的倍(5% CI=) , 而XRCC 基因G4234C多态性吸烟状况及病理分类的分层分析两组之间无统计学差异. 结论： XRCC基因41657T等位基因可能是非吸烟中国北方汉族人非小细胞肺癌及腺鳞癌的发病危险因素.【关键词】非小细胞肺癌；XRCC基
10、因；易感性；遗传多态性0引言X线修复交叉互补基因(Xray repair crosscomplementing protEin, XRCC)为RAD51的同系物，在同源重组修复过程中发挥重要作用. 有XRCC基因缺陷的仓鼠细胞对X射线的敏感性是相应正常细胞的2倍，它对DNA断裂剂的敏感性为相应正常细胞的60100倍，而其重组修复 DNA双链断裂的能力仅为相应细胞的1/1001/25. XRCC定位于染色体，存在多个单核苷酸多态位点，其中包括在XRCC非翻译区423bp处核苷酸出现GC改变和3非翻译区4165bp处核苷酸出现CT改变1. 国外文献报道这两个多态位点与乳腺癌和卵巢上皮癌的易感性无关
11、，但国内尚未见这两个多态位点与肿瘤易感性关系的报道. 本实验通过病例对照研究方法，分析在中国北方人群中XRCC C41657T, G4234C基因多态性与非小细胞肺癌易感性的关系.1对象和方法对象226例NSCLC患者为XX01/XX12在河北医科大学第四医院胸外科住院并经外科手术和病理学确诊的原发性NSCLC患者. 患者均为北方人、汉族，术前没有经过任何抗癌治疗,无职业性致癌因素接触史. 病理类型按WHO 肺肿瘤组织学分型 (XX)标准进行分类，其中鳞癌93例，腺癌85例,腺鳞癌25例，大细胞癌23例.00例健康对照为河北医科大学第四医院体检的健康成人，其来源地区、民族与患者相同，但NSCL
12、C组与对照组的性别、民族、籍贯分布相似，无血缘关系. 现吸烟或曾吸烟每日5支以上并持续a者定义为吸烟个体.方法的提取所有研究个体均采集静脉血mL，经枸橼酸钠抗凝，以蛋白酶K消化饱和氯化钠盐析法2提取外周血白细胞DNA，-20保存备用. C41657T, G4234C多态性检测采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction restriction fragment length pol ymorphism, PCRRFLP）方法进行基因型检测. 扩增XRCCC41657T, G4234C位点的上游引物序列分别为5GGAGGCCGCAATGAGCTGAGA
13、TG3和5GTGCGCACGCGCGCGGGTGGAC3，下游引物序列分别为5TCGGGAAGCTGAGGTGGGAGGA3和5GCGCCGCCCCAAGCCTC CCAATC3，扩增片段分别为41bp和251 bp. PCR反应体系为20 L，其中模板DNA 100 ng，10PCR缓冲液L，/L (C41657T)或/L(G4234C)，TaqDNA聚合酶U，dNTPs 160 mmol/L和上、下游引物各200 nmol/L. PCR反应条件为：4 min预变性后，94变性4s,2 (C41657T) 或 (G4234C) 退火4s,2 延伸1 min，35个循环后，72继续延伸min.
14、 XRCCC41657T PCR产物经限制性内切酶Mva于37 酶切1h后进行40 g/L脂糖凝胶电泳. C/C基因型为31bp,bp 和5bp个DNA片段 ，T/T基因型为35bp和5bp 两个DNA片段，C/T基因型为31bp,5bp,bp和5bp个DNA片段(图1). XRCC G4234C PCR产物经限制性内切酶Mlu于37 酶切20 h后，进行40 g/L琼脂糖凝胶电泳. G/G基因型为251 bp一个DNA片段，G/C基因型为251 bp,30 bp和21 bp个DNA 片段，C/C基因型为21 bp和230 bp两个DNA片段(图2). 为进行基因型检测的质量控制，每一批PCR
15、反应均以灭菌蒸馏水替代模板DNA作为阴性对照，实验样本随机抽取10%进行重复实验.图1PCRMva 酶切的XRCCC41657T SNP基因分型略图2PCRMlu酶切的XRCCG4234C SNP基因分型略统计学分析：采用2检验对健康对照组XRCC C41657T， G4234C多态位点的基因型分布进行HardyWEinberg平衡分析. NSCLC组和对照组的XRCC C41657T， G4234C基因型及等位基因分布比较采用RC表的2检验进行. 应用非条件Logistic回归模型计算比数比及其95%可信区间，以P 别为和). C41657T, G4234C多态性与肺癌病理类型的关系根据肺癌
16、病理类型进行分层分析表明，XRCC C41657T多态可能与腺鳞癌的发病风险相关，与C/C基因型相比，携带T等位基因的基因型(C/T +T/T)可增加腺鳞癌的发病风险；但未发现XRCC G4234C多态与NSCLC的病理类型存在相关性. C41657T, G4234C多态性与吸烟联合作用对NSCLC的影响根据个体吸烟情况进行分层分析表明，XRCC C41657T多态性可能与不吸烟人群的NSCLC发病风险相关，与C/C基因型相比，C/T基因型和携带T等位基因的基因型(C/T +T/T)可增加不吸烟人群患NSCLC的风险；但在XRCCG4234C多态位点未见二者相关. 表2XRCCC41657T 基因多态性与NSCLC发病风险的相关性分析略表3XRCCG4234C基因多态性与NSCLC发病风险的相关性分析略
