《酵母菌关键控制点报告》由会员分享，可在线阅读，更多相关《酵母菌关键控制点报告（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划酵母菌关键控制点报告山东大学实验报告XX年11月日姓名郑冲冲系年级08级生科一班组别同组者张健康于政达学号XX题目酵母菌的培养、形态观察、死活鉴定和子囊孢子的观察一、目的要求1、掌握酵母培养基的配置和酵母菌的接种方法2、观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。3、学习掌握区分酵母菌死、活细胞的实验方法。4、学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。二、基本原理1、培养基：酵母菌的能源主要是糖，一般用麦芽汁琼脂培养基培养。但实验要求不是很严格时，可以用由酵母膏、蛋白胨、葡萄糖配置的培养基来培养；
2、但酵母菌子囊孢子的观察要用麦氏培养基，其有利于子囊孢子的形成。2、酵母菌的形态：酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色浸片和水-碘液来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。3、美蓝染色液：美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观
3、察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。4、水-碘液染色液：该染液将革兰氏染液用碘液用水稀释4倍后得到的，亦可用于酵母形态和出芽生殖的观察。4、子囊孢子的观察：酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。三、实验器材1.菌种：酿酒酵母培养数天的酵母-麦氏培养基斜面2.溶液与试剂：%吕氏碱性美蓝染液，5%孔雀绿，%沙黄、95%乙醇，水-碘染液3.培养基：酵母液体培养基，麦氏培养基。4.仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯、接种环等。四、实验步骤1、酵母培养基的配置：蛋白质2%，酵母膏1%葡萄糖2%，加冷水
4、100Ml，自然PH，在115下高压蒸汽灭菌30min。2、接种和培养：无菌操作下，在灭菌的培养基中倒入少许酵母菌液即可。在28下培养48h左右。3、美蓝染色操作：1在载玻片中央加一滴吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌液，混合均匀；2用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，避免产生气泡；3将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。4染色开始到过30min期间，观察死活细胞数量的变化；4、水-碘液浸片法：滴加一滴水-碘液在载玻片的中央，无菌操作挑取少许酵母菌液至于染液中涂匀，盖上盖玻片后镜检。5、子囊孢子的观
5、察：1.制片：取经产孢培养的酵母斜面培养物，在洁净载玻片上按常规涂片、干燥固定。2.染色：滴加孔雀绿染液染色1min，水洗。3.脱色：用95%的乙醇脱色30s，水洗。4.复染：用番红复染1min，水洗，干燥。5.镜检：干后用油镜观察子囊孢子的形态。五、实验结果及分析实验报告实验名称：与酵母菌发酵所属课程名称：发酵工程工艺原理班级：XX级生物技术组长：组员：时间:实验指导教师：黄循吟海南师范大学生命科学学院XX年12月5日摇瓶的应用与酵母菌发酵摘要：发酵工程属于生物技术的范畴，是指利用微生物的生长繁殖和代谢活动来大量生产人们所需要的产品过程的理论和工程技术体系，是生物工程和生物技术学科的重要组成
6、部分。本实验通过对酵母菌进行摇瓶培养,并定时取样测定其OD值、pH和菌体数，制作菌体生长曲线，以此判断酵母菌的生长发酵状况。关键词：发酵、摇床、酵母菌一.目的1.掌握酵母发酵工艺流程及其具体操作方法。2.了解酵母菌的生长代谢的基本规律。二原理千百年来，人类几乎天天离不开酵母菌，例如酒类的生产，面包的制作，乙醇和甘油的发酵，本实验主要通过对酵母菌发酵过程中一些数值的测定，绘制其生长曲线，来了解酵母菌的生长状况。为获得实验相关数据，需对酵母菌进行培养，首先涂布平板28培养48小时后挑取单菌落进行斜面保存，再挑取斜面保存的菌种进行扩大培养，自扩大培养起，每三个小时取一次样，在OD505下测吸光度，在
7、显微镜下观察，计算菌种数量当菌种数量达到108个/ml时，即可进行发酵培养。自发酵培养起每三个小时取一次样，测其吸光度值、pH值、菌种数量。结果整理：以时间为横坐标。OD值为纵坐标作图。对最终的发酵液进行离心，得湿酵母烘干，称干重，计算得率。最后对实验结果进行讨论和分析。三.材料与方法1实验材料菌种：酵母菌2.培养基配方分离培养基：黄豆芽100g，葡萄糖50g，水100ml，琼脂20g，pH值自然种子培养基：葡萄糖40g，蛋白胨10g，蒸馏水1000ml，pH值自然3仪器设备分光光度计、旋转式摇床、离心机、冷藏箱、pH计、电子天平、电磁炉等。4用具烧杯、三角瓶、量筒、玻璃棒、比色杯、试管、离心
8、管、移液管、接种环、酒精灯、培养皿、滴管、移液枪5试剂蒸馏水、酒精四实验步骤与方法1.酵母菌种的分离：分离培养基制备与灭菌：称鲜豆芽100g，放入烧杯中，加水1000ml，煮沸30min，用纱布过滤，用水补足原量，再加入葡萄糖50g，琼脂20g，煮沸溶化，分装三角瓶和试管，包扎，在121下灭菌20分钟。菌种的保存:取酵母粉1g，加10ml无菌水制成菌悬液，并按梯度101、10-2、10-3进行稀释。分别取涂布平板，在28培养48小时，挑单菌落于斜面试管在28培养48小时，备用。2.菌种扩大培养：用接种环挑两环保存在斜面试管上的菌种，放入150ml的三角瓶(每瓶含有75ml的种子培养液)中进行扩
9、大培养，150r/min,28摇瓶培养48小时。3.发酵培养：将扩大培养后的菌液按10%的接种量接到250ml的三角瓶中进行摇床培养，即取20ml菌种液置于200ml的种子培养液中，150r/min,28培养48小时，同扩大培养一样，每三个小时取一次样，测其吸光度值、pH值和菌种数量。4.数据整理，绘制曲线：以时间为横坐标，分别以菌液浓度，pH，OD值为纵坐标作图。5.计算得率：发酵完毕，取出摇瓶内培养基装入离心管，离心分离，得湿酵母烘干，称干重，计算得率。1.扩培过程数据结果每3小时记录一次扩培过程中菌液的pH值、OD505、菌液浓度，结果如表1：表1扩培过程各参数值时间扩配时间h01:00
10、04:0007:0010:0013:0016:0019:0022:0001:0004:0007:0010:0013:0016:0019:0022:00温度OD505菌液浓度104106107107107107108108108108108108108108108108pH值转速r/min0150取样mL实验方案酵母菌酒精发酵的条件研究学院：生物与化学工程学院专业：生物工程学生姓名：鑫学号：班级：生物工程二班指导教师：肖一、实验目的1、学会实验的设计和操作过程2、找到酵母菌发酵时的最优条件二、培养基和实验方法及材料的确定1、玉米粉的糖化方法玉米粉的糖化采用双酶法，其工艺流程如下玉米粉加水液化糖化
11、发酵蒸馏成品酒精试验中，发酵培养按照三角瓶100ml培养。本次工做20组是要，共需发酵液20*100=XXml。培养液按照100g玉米粉、300ml水。所以共需玉米粉700g。液化：取玉米粉，加入的水，液化温度为，值为，液化时间为，液化酶的添加量为玉米粉糖化：糖化时的工艺条件为：糖化温度为，值为，糖化时间为，糖化酶的添加量为玉米粉。2、活化培养基本实验在进行实验时采用察氏(czapck)培养基的配制，配方如下表一：表一3、扩大培养基扩大培养仍然用察氏(czapck)培养基，由于要用液体的，所以将其中的琼脂配料去掉。4、发酵培养基糖化液稀释至l0%浓度，添加辅料，灭菌三、培养基的制备及酵母的活化
12、1、准备酵母母菌一支常温下存放一天，增加菌种的活力。在母菌存放期间制作各时期培养基2、准备固体培养基50ml，做成8支试管斜面，扩大培养基800ml。做成8个三角瓶，每瓶200ml。120灭菌30min。3、发酵液的制备玉米粉的筛选实验前准备粉碎后的玉米粉700g。玉米粉的液化按照100g玉米粉、300ml水的配比对玉米粉进行液化，液化方案上文已经交代。在1000ml烧杯里，或者500ml烧杯分两次，水浴液化。器材：烧杯500ml两个，玻璃棒一个，水浴锅一个，糖化酶步骤：1、将糖化酶，玉米粉，水按照比例配置好在烧杯里。2、将配好的玉米液放于水浴锅中90液化。边液化边搅拌。玉米粉的糖化将液化后的
13、玉米液中按照/100ml加入液化液中。再在水浴锅中，58糖化。过滤糖化后的糖化液有可能有没有彻底液化的玉米颗粒，会造成浑浊，这时需要对糖化液进行过滤操作。操作步骤：最后与以上培养基一起进行灭菌处理。灭菌时，清洗16支移液管，与培养基一起灭菌。活化步骤器材：酒精灯，接种针，母菌，斜面培养基，消毒酒精。步骤：1、将器材放于实验台上。对双手合桌面进行灭菌。对接种针进行灼烧灭菌。2、在酒精灯旁按照无菌操作步骤在酒精灯火焰旁取下试管棉塞。3、将灼烧后的接种针伸入母菌试管取粘取少量母菌，粘取前将接种针放于试管内壁，冷却56s。4、按照无菌操作将取过母钟的接种针移入活化试管内并画曲线。5在酒精灯火焰旁将试管
14、棉塞塞上，塞前将棉塞烧一下。如此接种八支试管。并保存28培养2d。四、酵母的扩大培养器材：液体培养基，活化后菌种，酒精灯，接种针，消毒酒精。步骤：1、将器材放于试验台上，并对双手和桌面灭菌，接种针进行灼烧灭菌。2、在酒精灯旁取下棉塞，并用接种针接种少量菌种于液体培养基内。3、在酒精灯旁塞好棉塞，并于28培养。根据发酵单因素的不同，确定培养时间。其中变量是菌龄的一瓶瓶号1、2要求培养时间分别为：对数期1：1516h，对数期2:1618h，缓冲期：2024h，稳定期：2426h。其他菌种培养20h进行接种。五、发酵培养1、不同菌龄下的发酵器材：扩大菌种的四个不同阶段即对数期1：1516h，对数期2:1618h，缓冲期：2024h，稳定期：2426h。移液管四个，酒精灯，发酵液，洗耳球。步骤：1、将对数期1的菌种和其他设备放于实验台上。2、用移液管按照发酵液的10%的比例移取扩大培养液到发酵液中。3、塞好棉塞将发酵液放于30条件下培养2d。4、按照以上步骤将不同菌龄的扩大菌种移接到发酵液中进行发酵培养。之后进行酒精检测。2、不同菌量下的发酵器材：扩大菌种，移液管四个，酒精灯，发酵液，洗耳球。步骤：1、将实验器材放于实验台上。2、用移液管移取8%的扩大菌种到发酵液中。3、塞好棉塞，将发酵液存放于30条件下发酵2d。4、按照以上步骤，分别移取10%、12%、
