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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划细菌分布检测实验报告大学活动场所室内环境细菌密度测定实验成员：罗小青、施俊译、上官玉虎、叶紫宇、徐丹丹1、目的：了解在校学生主要活动场所室内环境细菌密度情况，提高学生对自己环境卫生意识，同时锻炼学生的实际操作能力。2、方法：该测定有两种方法，其一是撞击法，它是通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔而产生高速气流，从而使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到培养琼脂平板上，经37、48h培养后，计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。另一种方法是自然沉降法，即采样法，它是在直径9cm的
2、营养琼脂平板在采样点暴露5min，或更多暴露时间进行分析，再经37、48h培养后，计算生长的细菌菌落数的采集测定方法。由于设备的不完全，该细菌测定方法采用采样法。3、仪器和设备高压蒸汽灭菌器恒温培养箱个培养皿锥形瓶试纸酒精灯4培养基营养琼脂培养基成分：蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂1520g蒸馏水1000mL制法：将上述各成分混合，加以溶解，校正PH至，过滤分装，在12120min高压灭菌，用自然沉降法测定时，倾注15mL于培养皿中，制成营养琼脂平板。5操作步骤设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点，通常设置5个采样点，高度为。采样点应远离墙壁1m以上
3、，并避开空调、门窗等空气流通处，本实验选择了食堂、宿舍作为实验场所，其中采样宿舍位于食堂旁边的六楼，也是我们队员男生生活的地方，通过我们生活场所来反映我们学校学生宿舍的环境情况，其采样布置点为阳台、床铺旁、书桌、门口和卫生间。采样食堂位于人比较密集的地方，以更准确的反映食堂卫生环境，其采样布置为收餐台、台子、门口、洗碗池和窗户。将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5min盖上皿盖，翻转平板，置361恒温箱中，培养48h计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数，以每平皿菌落数报告结果。实验主要步骤如下图所示：6结果分析菌落生长情况如图：结果计算与分析：宿舍对应的数据如下：食堂
4、对应的数据如下：数据分析：我校某宿舍平均菌落数为(CFU/皿)，依据室内空气质量标准GB/T18883-XX卫生标准：按奥梅梁斯基氏计算法：在面积为100cm2的培养基表面，5min沉降下来的细菌数相当于10L空气中所含的细菌数。100cm2培养基的菌落数=每块平板数r2100=(CFU)，1m细菌数=/10*1000=8069(CFU)，远大于室内标准，说明了该宿舍空气质量3比较差，所以在我们生活当中应常开窗，保持空气对流，同时要定时打扫卫生，使我们生活得更加舒适。对于食堂而言，我们可以看到上图细菌生长情况，有的无法计数，这也说明了该场所的细菌比较多，依据饭馆、餐厅卫生标准GB16153-1
5、996卫生标准：远超过标准，食堂其实是我们在学校一日三餐、人流通密度大的重要公共场所，对我们身心健康影响重大，为提高食堂空气质量，应对其场所常开窗，保持空气对流，吃饭时应养成洗手的好习惯等等。参考文献：1、环境工程微生物学2、公共场所空气中细菌总数的测定3、室内空气质量标准GB/T18883-XX4、饭馆、餐厅卫生标准GB16153-19965、刘国强,周娅.校园空气污染微生物的检测与评价J.微生物学杂志,XX(3):56-58.南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：验证综合设计创新实验日期：实验成绩：实验十细菌菌落总数的测定一、实验目的：1学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的
6、方法。2了解培养基平板菌落计数原则二、实验基本原理：细菌菌落总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。它是有机污染程度的指标，也是卫生指标。在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水有机污染的程度外，还指示该饮用水能否饮用。但还应当指出的是，水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。因此，结合大肠菌群数以判断水的污染的安全程度就更全面。我国现行生活饮用水的卫生标准规定：细菌菌落总数在1ml自来水中不得超过80个。细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们的培养基才能将它们培养出来。然而在实验工作中不易做到，通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性
7、细菌，以它的菌落总数表明有机污染程度。三、主要仪器设备及耗材：电热干燥箱，高压蒸汽灭菌锅，电热培养箱，恒温水浴，冰箱，菌落计数器，放大镜，肉膏蛋白胨脂培养基，灭菌水，灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。四、实验步骤：1水样的采取供细菌学检验用的水样，必须按无菌操作的基本要求进行采样，并保证在运送，贮存过程中不受污染。为了要正确反映水质在采样时的真实情况，水样在采取后应立即送检，一般从取样到检验不应超过4小时。条件不允许立即检验时，应存于冰箱，但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。生活饮用水先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，用灭
8、菌三角烧瓶接取水样，以待分析。池水、河水或湖水应取距水面1015的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，立即返回实验室检查，否则需放入冰箱中保存。2细菌总数测定自来水(a)用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做三个平皿。(b)分别倾注约15ml已溶化并冷却到45左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。(c)另取三空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml，作空白对照。(d)培养基凝固后，倒置于37温箱中，培养24小时，进行菌落计数。三个平板的平均菌落数即为1
9、ml水样的细菌总数。池水、河水或湖水等(a)稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。取1ml水样注入第一管9ml灭菌水内，摇匀，再从第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、10-2与10-3。稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。一般中等污秽水样，取10-1、10-2与10-3三个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度。(b)自最后三个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做三个培养
10、皿。(c)各倾注15ml已溶化并冷却至45左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。(d)凝固后倒置于37培养箱中培养24小时。3菌落计数用肉眼观察，计平板上的细菌菌落总数，也可用放大镜和菌落计数器计数，记下同一浓度的三个平板的菌落总数。各种不同情况的计算方法如下：先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个培养皿有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的培养皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全培养皿的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。首先选择平均菌落数在30300之间的，当只有一个稀
11、释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数。若有两个稀释度的平均菌落数均在30300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数。若大于2，则取其中较小的菌落总数。若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数。若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数。菌落计数的报告，菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的位数，以四舍五入方法计
12、算。微了缩短数字后面的零数，可用科学计数法表示。五、实验数据及处理结果湖水水样：菌落总数：自来水样：菌落总数：六、思考讨论题1、测定水中菌落总数有什么实际意义？2、根据我国水质标准，讨论你这次检验结果？七、实验体会及对实验改进的建议微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.2.3.4.5.掌握光学显微镜的使用及日常维护掌握细菌的三种形态掌握临床常见细菌的形态及染色掌握细菌的特殊结构了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1.普通光学显微镜的使用1.在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2.从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没
13、在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3.根据需要调节显微镜亮度2.普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3微生物知识1细菌按形态分类：球菌：球形杆菌：杆状螺旋菌：螺旋状2细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛
14、菌。如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5真菌单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。如：霉菌6白假私酵母菌生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检菌体、芽生孢子、假菌丝7新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等慢性炎症和脓肿；侵袭CNS亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1.观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌、脑膜炎双球菌、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白
