《糖的显色反应和定性测定预习报告》由会员分享，可在线阅读，更多相关《糖的显色反应和定性测定预习报告（22页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划糖的显色反应和定性测定预习报告化学综合实验第十组1班班环境工程1班环境工程1班祝钰朱丽华林斌刘刚组长：环境工程组员：环境工程甲基橙的制备及性能测定一、实验目的1、掌握甲基橙的制备方法2、掌握有机化合物的合成的基本方法3、掌握红外光谱仪的使用及图谱解析4、掌握酸碱滴定方法及重点判断二、实验原理甲基橙是一种酸碱指示剂，pH值变色范围之前为红色，为橙色，以后为黄色测定多数强酸、强碱和水的碱度，容量测定锡(热时Sn2+)使甲基橙褪色)。强还原剂(Ti3+、Cr2+)和强氧化剂(氯、溴)的消色
2、指示剂。分光光度测定氯、溴和溴离子。可与靛蓝二磺酸钠或溴甲酚绿组成混合指示剂，以缩短变色域和提高变色的锐灵性。氧化还原指示剂，如用于溴酸钾滴定三价砷或锑。贮存：密封阴凉干燥保存。它是由对氨基苯磺酸重氮盐与N,N-二甲基苯胺的醋酸盐，在弱酸性介质中偶合得到的。偶合首先得到的是嫩红色的酸式甲基橙，称为酸性黄，在碱中酸性黄转变为橙色的钠盐，即甲基橙。NaOHHO3SNH2O3SNH3NaO3SNH2H2O三、实验仪器及药品序号名称12烧杯胶头滴管规格数量用途装反应混合物物滴加溶液100ml,50ml2,2常规234布氏漏斗常规11抽滤抽滤抽滤瓶循环水式真空泵淀粉碘化钾试纸干燥表面皿量筒滤纸天平玻璃棒
3、N,N-二甲基苯胺浓盐酸,稀盐酸溶液无水乙醇，乙醚亚硝酸钠对氨基苯磺酸氢氧化钠容量瓶10ml常规ARARARARARAR5%.10%常规若干13211ml10ml10ml,25ml测反应终点呈放滤饼量取溶液过滤称重搅拌反应物参与反应洗涤参与反应参与反应参与反应250ml,100ml配制溶液四、实验步骤传统法：低温二步法先将对氨基苯磺酸碱化成水溶性较好的盐,然后在低温强酸性环境中发生重氮化反应,制得的重氮盐于醋酸环境中与N,N-二甲基苯胺偶联、碱中和、重结晶制得。1.重氮化称取对氨基苯磺酸于100ml烧杯中，再加入10m5%NaOH，水浴加热至溶解。对氨基苯磺酸为白色粉末状，溶解后溶液呈橙黄色。
4、让溶液冷却至室温。向另一个烧杯中加入和6ml水,混合均匀后，加入到上述烧杯中，冰水浴冷却至05摄氏度。在不断搅拌下，将3ml浓HCl慢慢加入到10ml的水中，混合均匀后。边搅拌边逐滴加入到溶液中。然后用KI-淀粉试纸检验。直至试纸呈蓝色。在冰水浴中放置15分钟。2.偶合将,N-二甲基苯胺和1ml冰醋酸加到试管中，震荡混合后，边搅拌边加到重氮盐中，搅拌10min。N,N-二甲基苯胺淡黄色油状液体，加入混合液后，溶液变成了红色的糊状液。往溶液中慢慢加入25ml10%NaOH溶液至橙色，粗甲基橙呈细颗粒状析出。3.盐析抽滤将烧杯从冰盐水浴中拿出恢复至室温，加入5gNaCl搅拌。于沸水浴中加热使其全部
5、溶解，冷却至室温后在冰水浴中冷却。待甲基橙晶体完全析出后减压抽滤。用少量饱和NaCl溶液洗涤烧杯、滤饼，压紧抽干。4.重结晶将上述粗产品用沸水进行重结晶，每克粗产品仅需25ml水。冷却，待结晶析出完全后减压抽滤。滤饼依次用无水乙醇，乙醚进行洗涤。在50一下晾干，称量，并计算产率。五、性能测试1.仪器与样品序号名称酸式滴定管锥形瓶胶头滴管移液管红外光谱仪实验室甲基橙产品甲基橙溴化钾盐酸规格50ml150ml常规25mlIR-460mol/l数量份1份用途装盐酸容器精确量取定量量取压片分析指示剂指示剂100-200制作压片75ml酸碱滴定生物化学实验预习报告实验二酶活力测定方法的研究淀粉酶活性的研
6、究一、研究背景酶即由活细胞产生的一类有催化活性的生物大分子，大多数由蛋白质组成，它是细胞赖以生存的基础，细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。酶的催化具有高效性、专一性、可调节性以及需要温和的条件。酶的催化活性受外界条件的影响，如温度、pH、离子强度、激活剂、抑制剂等均会使酶活性发生改变。另外，酶在工业生产及生活中应用广泛，如酱油、食醋以及酿酒工业都需要酶的参与，洗衣粉加入酶增强去污能力等。酶活性的测定具有较强的实际意义，例如某些酶活性的变化可以引起特定的疾病，测定这些酶的活性可以作为疾病诊断的一个依据。淀粉酶是水解淀粉糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的方式，可以分为-
7、淀粉酶与-淀粉酶等。休眠的种子中只有-淀粉酶存在，而-淀粉酶在种子萌发过程中才形成。测定淀粉酶的活性具有重要的意义，淀粉酶普遍存在于植物体内，特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强，其活性高低可以衡量种子萌发速率，也可以作为水稻抗逆性的生化指标。本实验中我们通过学习经典的淀粉酶活力测定方法，分析具体的实验细节，从而获取酶活力测定的相关理念。二、研究目标1.掌握酶活力测定的一般思路与方法；2.进一步熟练使用分光光度法测定物质浓度；3.测定-淀粉酶与-淀粉酶的活性；4.体会并掌握实验细节的设计与分析方法。三、研究策略两种淀粉酶的特性有所不同，-淀粉酶不耐酸，在以下迅速钝化；-淀粉酶不耐热，在701
8、5min钝化。根据它们的这种特性，在测定活力时钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。本实验采用加热的方法钝化-淀粉酶，测出-淀粉酶的活力。在非钝化条件下测定淀粉酶总活力，再减去-淀粉酶的活力，就可求出-淀粉酶的活力。另外，实验时分别设置对照组和测定组，从而排除无关变量的干扰。采用分光光度法测定产物麦芽糖的含量，计算出产物的生成速率，从而表征出淀粉酶的活性。四、研究方案及可行性分析1.研究方案酶的获取淀粉酶广泛存在于禾谷类的种子中，所以取萌发的小麦种子研磨浸提得到初始酶液。反应过程-淀粉酶耐高温，而-淀粉酶在高温下易被钝化。可以在适当的高温下水浴处理，使-淀粉酶失去活性的同时-淀粉酶活性基本
9、不受影响，与此同时，设置对照组以排除干扰因素，对比测定组与对照组的差异，分解淀粉所得到的产物就可以认为是-淀粉酶催化的产生，即可得到-淀粉酶活力。另外，不做高温处理，在相同的测定条件下测量-淀粉酶和-淀粉酶的总活力，最终计算两者差值得到-淀粉酶活力。产物检测淀粉水解产物为麦芽糖，在碱性条件下，麦芽糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸，在一定范围内，麦芽糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度呈一定的比例关系，在520nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线可求出样品中还原糖的含量。酶活力计算酶活力的大小与所催化反应的产物生成速率成正比。规定淀粉酶的活
10、力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化生成的麦芽糖毫克数。以分光光度法测定产物麦芽糖的含量，计算出产物的生成速率，最终得到酶的活力。2.可行性分析就实验方案本身而言，利用两种酶的不同特性加以处理，钝化其一，测定另一种酶的活性，方案合理，简便易行，具有可操作性；实验材料可在实验室获得，所需各种试剂均为实验室常备试剂，温度控制可通过恒温水浴箱实现，分光光度计、离心机等仪器实验室都有，所用试管、研钵等器具实验室均可提供；实验所用时间约为3h，可在规定时间内完成，故时间上有可行性。综合以上各点，本实验具有很大的可行性。3.预期实验结果-淀粉酶与-淀粉酶活力均可通过本实验测得。五、具体实验设计1.实验仪器及
11、试剂722型光栅分光光度计、托盘天平、离心机、恒温水浴锅、具塞刻度试管、50ml容量瓶、研钵、石英砂、微量可调手动移液器、1%淀粉溶液、蒸馏水、的柠檬缓冲液、3,5-二硝基水杨酸溶液、麦芽糖标准液、溶液、萌发的小麦种子2.实验步骤初始酶液的制取2g萌发的小麦种子少量石英砂，研磨至匀浆少量多次用蒸馏水转移到50ml容量瓶至40ml颠倒浸提1520min定容至刻度混匀3500r/min离心20min上清液-淀粉酶活性的测定取所制取的酶液5ml，放入100ml容量瓶中，定容至刻度，混合均匀得到稀释后酶液。麦芽糖含量的测定-淀粉酶活性=样品稀释总体积/样品总重5min；淀粉酶总活性=样品稀释总体积/样
12、品总重5min；A-淀粉酶测定管中的麦芽糖浓度A-淀粉酶对照管中的麦芽糖浓度B-及-淀粉酶总活性测定管中的麦芽糖浓度B-及-淀粉酶总活性对照管中的麦芽糖浓度3.实验所需时间预计所用时间共计约3h。4.某些试剂与操作的作用1%淀粉溶液淀粉酶的反应底物的柠檬缓冲液提供和维持淀粉酶反应的最适pH1使酶失去活性2为还原糖的3,5-二硝基水杨酸反应溶液；3使对照组与测定组的处理保持一致，降低实验无关变量所造成的误差提供碱性环境；3,5-二硝基水杨酸溶液显色剂，与麦芽糖反应，通过颜色变化深浅反映出麦芽糖含量麦芽糖标准溶液绘制标准曲线酶提取液70恒温水浴15min使-淀粉酶活性丧失而-淀粉酶活性不受影响酶液
13、40恒温水浴15min在最适温度下，使酶的活性维持在最高状态淀粉溶液40预热使底物的的温度与酶的最适温度相吻合，避免混合时温度发生变化导致酶的活性不在最高状态。酶与底物混合液40恒温水浴5min最适温度下，酶具最大活性与底物以恒定初速度反应生成产物-及-淀粉酶总活性测定时酶液的稀释总活性较高，分解淀粉速率较快，短时间内底物迅速减少，因而测定得到的便不是初速度，而稀释后降低酶的比活，便于测定产物与3,5-二硝基水杨酸沸水浴共热5min使麦芽糖与3,5-二硝基水杨酸在加热条件下充分反应，显色充分，生成有色物质的量及颜色稳定测定吸光度前溶液稀释至15ml低浓度下分光光度法对待测物质浓度的测定更加准确
14、5.误差分析本实验中容易产生误差的地方有以下几个：初始酶液的制取。为减小误差，应研磨充分，浸提充分，准确定容。进行钝化和保温这两步。因此，为了保证酶促反应时间的准确性，必须做到准确记录时间，尽量减小因各管保温时间不同而引起的误差，同时恒温水浴温度变化不应超过，以减少温度变化所引起的误差。显色的过程。显色需要加热15min，时间要严格控制，而且沸水浴的水位要高于试管中试剂的高度，因为显色程度与水温和加热时间有关系。六、质疑及相关思考1.酶活力测定时需要测反应的初速度，这就需要底物浓度要足够大且远远超过酶量，测定时间要在最初的几分钟内。在本实验中，底物为2ml1%的淀粉溶液，测定反应时间为5min，这两个标准是如何确定的？而这些标准是否真的满足酶活力测定的要求？2.本实验-淀粉酶活性测定时是在70恒温水浴15min，该条件下-淀粉酶活性是否真的完全丧失，而-淀粉酶活性是否完全不受影响？我想不能完全这么肯定，如果是这样的话，这些因素所带来的误差有多大？是不是可以忽略？3.实验中显色时间控制为15min，我在其他资料上也看到有的将显色时间定为10min1，我们知道，显色时间过短，待测物质未与显色剂充分反应，显色不充分，会使测定结果偏低；若显色时间过长，生成有色
