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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划消毒与灭菌实验报告实验一消毒与灭菌一、实验实训目的了解高压蒸汽灭菌的原理、使用范围和注意事项。熟悉高压锅和干燥箱的构造，掌握高压蒸汽灭菌、烘烤灭菌的方法，学会培养皿及吸管的包扎。二、实验实训材料高压蒸汽灭菌锅，恒温干燥箱，待灭菌的培养基，培养皿、长棍条等。三、实验实训内容和方法(一)高压蒸汽灭菌1.高压锅的构造实验室常用的是手提式高压锅，其构造一般分为外锅、内锅、和锅盖。外锅是装水的厚锅桶，内锅是放置待灭菌物品的薄锅桶，内锅壁上有一壁管，是插入排气管用的。锅盖上有压力表、排气阀和安全
2、阀。2.高压锅的使用步骤高压锅的使用步骤一般分为装锅、加热排气、升压、保压和降压。装锅手提式高压蒸汽灭菌锅可向外锅注入适量水分。放入内锅，将待灭菌的培养基或其它物品疏松摆放其内，盖上锅盖，对角线式拧紧锅盖上的螺旋。加热排气用电源或其它热源加热。打开排气阀，待大量热蒸汽冒出约2min，以完全排净冷空气后再将其关闭。升压排气后关闭排气阀，使高压锅处于密闭状态，随着热蒸汽的不断增多，锅内蒸气压也随之加大，温度逐渐上升，直至压力达到所需压力。升压要缓而稳，不能忽快忽慢甚至降压。保压待压力升至所需的压力时，开始计算灭菌时间。调节热源维持恒压直至完成灭菌时间。一般培养基需在103kPa压力下，维持30mi
3、n左右。不同物品应采用不同的压力和时间，保压过程中要不断调节热源，使压力始终维持在所需压力值上，不能升降幅度过大。降压完成灭菌时间后关闭热源，压力徐徐下降，一定要待压力自然下降至“0”时才能打开排气阀和锅盖，降压过急会导致培养基喷出或玻璃器皿破裂。若待灭菌的物品是培养基，应将锅盖略打开，让热气将棉塞或包扎纸烘干。出锅灭菌物品若是培养基，可在温度降至60时将其取出，随即把试管中的培养基摆成斜面。将试管斜置于棍条上，以斜面长度约为试管长的1/2为宜。若气温较低，可在试管上覆盖毛巾等物品，以防止降温太快使试管中形成(转载于:写论文网:消毒与灭菌实验报告)大量的冷凝水，不利于菌种的成活。若装培养基的容
4、器是三角瓶，可将其倒入无菌培养皿中，形成平板培养基。高压锅中的灭菌物品被取出后应随即将外锅中的水倒出。锅盖不要盖严，以利于锅内保持干燥和延长锅盖上下密封圈的使用时间。(二)烘烤灭菌1.培养皿和吸管的包扎制平板培养基时用的培养皿和菌种分离时用的吸管都要经包扎后进行严格的灭菌。培养皿一般5或10套为一包，用双层报纸包。吸管在包扎前，应在管口塞入长约1cm的棉花，以防止菌液吸入口中或口中菌体进入管内。然后将吸管尖端放在45cm宽的长纸条的一端，使其与纸条呈45角卷叠纸条，直至将吸管全部包卷，末端多余的纸条打结，最后再将吸管集中包扎成捆。玻璃刮铲的包扎同吸管一样，也要逐个用报纸包裹。2.恒温干燥箱的使
5、用方法利用恒温干燥箱进行烘烤灭菌的步骤大致为装箱、加热排气、升温、保温灭菌和降温开箱。(1)装箱将包装好的培养皿、吸管等耐烤的物品均匀放入箱内，关闭箱门。(2)加热排气接通电源，开启干燥箱上的开关，打开箱顶排气孔以排除水汽。若配有鼓风设备，可同时打开鼓风机，以加速干燥。待灭菌温度升至100105进关闭排气孔。(3)升温关闭排气孔上继续加热，温度继续上升直至灭菌所需温度。(4)保温当温度上升至160170时，计算灭菌时间，控制温度调节器，维持温度2h后关闭电源。(5)降温2h结束后，让温度自然下降，必须等箱温下降至60以下时方能打开箱门，取出灭菌物品，以免导致玻璃器皿爆裂。用烘烤法进行灭菌时，除
6、注意箱温勿超过180外，还不能用油纸或蜡纸包扎被灭菌物品。四、实验实训报告写出高压蒸汽灭菌和烘烤灭菌的操作过程。五、思考题1.高压锅的构造如何？安全阀和排气阀各有何作用？2.高压锅在使用中应注意哪些问题？3.干燥箱在使用中有哪些注意事项？新吉尔灭消毒剂消毒验证实验报告一目的根据实际生产与微生物实验操作过程中，选用消毒剂符合使用要求而进行的检验及现场验证，验证对代表菌种有效消灭情况进行确认。二实验准备消毒剂：75%酒精、%新吉尔灭消毒液代表菌种：大肠杆菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌缓冲液：%生理盐水：称取9g氯化钠，溶解于1000ml纯化水中，分装，121、15min压力蒸汽灭菌后备用。培养基：
7、营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂、乳糖胆盐培养基三菌悬液配制菌悬液的制备取金黄色葡萄球菌加入%无菌氯化钠溶液，将菌种脱落，吸出菌液至无菌试管内，制成均匀菌液。取大肠埃希菌加入100ml双料乳糖胆盐中在37培养箱中培养2天制得悬菌液，吸出菌液至无菌试管内，制成均匀菌液。将上述培养物用稀释液稀释至所需浓度备用，以生长菌落每平板为100cfu以内者为宜。消毒剂的验证验证消毒剂的配制与准备工作75%酒精：根据公司实际情况采购备用。%新吉尔灭消毒液：根据试剂说明取原液，加入纯化水溶解，分装，121、15min压力蒸汽灭菌后备用。取10ml消毒剂分别注于无菌试管中。每组平行两管。试验步骤大肠杆菌实验步骤取
8、大肠杆菌增值培养物，接种于已有消毒剂试管中，轻轻摇动，作用10min，十分钟后，吸取此混合液1ml加入无菌培养皿中，注入15-20ml温度不超过45的溶化营养琼脂培养基，混匀，361培养48h后计数，平行2组。重复上述操作，完成3次试验按照上述方法进行金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的操作,但白色念珠菌操作时，应使用马铃薯葡萄糖培养基，并且在261培养3天计数。四阴性、阳性对照阴性：按要求浓度的消毒剂10ml和已灭菌10ml%氯化钠混合液，吸取此混合液1ml加入无菌培养皿中，注入15-20ml温度不超过45的溶化营养琼脂培养基/马铃薯葡萄糖培养基。阳性:菌悬液稀释至所需浓度，接种于平皿中，平行两组。
9、五培养及计数大肠杆菌、金黄色葡萄球菌接入营养琼脂培养基中，白色念珠菌接入马铃薯葡萄糖培养基。含菌膜向上。放入所需恒温培养箱中培养3-5天后计数。试验菌稀释级数为10-6能肉眼读数并且符合标准。每块平皿含菌量不低于106cfu/ml，符合验证要求。菌落计数表消毒液消毒效果验证结果：杀灭率=阳性对照回收菌数-试验组回收菌数*100%=100%阳性对照回收菌数实验证明新吉尔灭消毒液具有杀菌抑菌效果六现场验证墙面、地面验证准备工作(1)卵磷脂吐温80营养琼脂培养基按比例(见商标的标注)配制后分装于500ml三角瓶中，灭菌后放入461水浴箱中备用，或经预培养阴性后置于冰箱中冷藏备用(用前先溶化)。预培养
10、在每个灭菌好的平皿中倒入15ml左右的上述培养基，待凝固后翻转平皿置352培养箱中培养24h,24h后经观察无菌,可移入冰箱、冷藏备用。(2)消毒剂：75%酒精、%新吉尔灭消毒液试验步骤对照组：选一间未清洁的作业车间将平皿均匀的放置在车间内，每处放置2个培养皿且均匀放置在车间内，打开上盖并放在下盖的一个边缘上。做好标识。开始计时，30分钟后盖好上盖收起平皿，并翻转平皿，放在352培养箱中培养482h，同时记录所放平皿的位置。阴性对照：将同批卵磷脂吐温80营养琼脂作为阴性对照组培养。用75%酒精、%新吉尔灭消毒液对墙面、地面进行擦拭消毒，作用10min后，每处地点放置培养皿2个，将平皿均匀的放置
11、在车间内，打开上盖并放在下盖的一个边缘上。做好标识。开始计时，30分钟后盖好上盖收起平皿，并翻转平皿，放在352培养箱中培养482h，同时记录所放平皿的位置。阴性对照：将同批卵磷脂吐温80营养琼脂作为阴性对照组养。学号：微生物学大实验班级：姓名：1.培养基的配置及消毒灭菌通用培养基的配制实验目的了解配制微生物培养基的原理和培养基的种类。掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤。实验原理培养异养细菌最常用的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基，它是一种天然培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，它不仅能为微生物提供碳源、氮源，还含有多种维生素。蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经蛋白酶水解
12、后的中间产物，含有?、胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物，因此完全能满足大多数异养细菌对营养的需要。材料和器皿试剂：牛肉膏、蛋白胨，NaCl，1mol/LNaOH,1mol/LHCl。器皿：台秤，玻璃烧杯，搪瓷烧杯，三角瓶，量筒，漏斗，试管，玻璃棒等。其他：pH试纸，牛角匙，牛皮纸，棉花，纱绳，灭菌锅等。方法和步骤1.配制牛肉膏蛋白胨培养基配方及配量：牛肉膏，蛋白胨5g，琼脂蒸馏水500ml称取药品：按照营养基配方与配量分别称取各药品，取少于总量的水于烧杯中，将培养基成分逐一加入水中待溶。加热溶解：将烧杯放在石棉网上，用文火加热，并不断用玻璃棒搅拌，使各药品快速溶解，然后补水至500ml。调节pH
13、：用1mol/lNaOH调pH至避免调过碱，应缓慢加入，边加入边搅拌，并用pH试纸测酸碱度值。分装：将配制好的培养基分装到相应的玻璃器皿中，并在固体和半固体培养基中加入琼脂，贴好标签，待灭菌。加压蒸汽灭菌法实验目的懂得加压蒸汽灭菌原理及其安全使用的注意事项。实验原理以加热密封锅体内的水和水蒸气的压力来提高锅体内蒸汽温度而达到对物品灭菌的目的。方法和步骤加水：取出装料桶，往锅内加水至与搁架圈同样高度为止。装料：将待灭菌的物品放入装料桶内并放回锅。加盖排气：在水煮沸后，以蒸汽驱赶锅内的空气沿排气软管从排气阀中溢出，待空气排尽后，才可关闭气阀继续加热。升压、保压、降压取料注意事项注意检查锅体和锅盖上
14、的部件是否完好，并严格按照操作程序进行，避免发生各类意外事故。灭菌时切勿擅自离开岗位，要注意压力表指针动态；要按培养基中的营养成分的耐热程度来设置合理的灭菌温度与时间，以免营养成分过多被破坏。务必待锅压下降到零后再打开排气阀和锅盖，否则因锅内压力突然下降，使瓶装培养基或其他液体因压力瞬时下降而发生复沸腾，从而造成瓶内液体沾湿棉塞或溢出等事故。在放入灭菌料桶前，切记应往锅体内加入适量的水，若锅体内无水或水量不够等均会造成在灭菌时引发重大事故。2.大肠杆菌的接种方法穿刺接种法实验材料目的掌握穿刺接种法并观察细菌在半固体培养基中的运动力。实验原理穿刺接种法就是用接种针挑取少量菌苔，直接刺入半固体直力柱培养基中央的一种接种法。方法和步骤1、接种前准备标明菌名旋松棉塞点燃酒精灯2、穿刺接种法挑取菌种：在超净台中，酒精灯旁，左手持菌种管，右手拿接种针，经火焰灭菌后，用持针的右手拔出试管塞，试管口过火灭菌后再将接种针伸入菌种管中，现在斜面上端冷却后挑取少量菌苔，移出接种针，管口再过火，塞上塞子，将菌种管放回试管架上。刺穿接种：左手拿直立柱试管，在火焰旁用右手的小指和掌边拔出塞子。随之将试管口朝下，同时将接种针从直立柱培养基中央自下而上
