《手的细菌试验报告》由会员分享，可在线阅读，更多相关《手的细菌试验报告（14页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划手的细菌试验报告学号：微生物学大实验班级：姓名：1.培养基的配置及消毒灭菌通用培养基的配制实验目的了解配制微生物培养基的原理和培养基的种类。掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤。实验原理培养异养细菌最常用的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基，它是一种天然培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，它不仅能为微生物提供碳源、氮源，还含有多种维生素。蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经蛋白酶水解后的中间产物，含有?、胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物，因此完全能满足大多数异养细菌对营
2、养的需要。材料和器皿试剂：牛肉膏、蛋白胨，NaCl，1mol/LNaOH,1mol/LHCl。器皿：台秤，玻璃烧杯，搪瓷烧杯，三角瓶，量筒，漏斗，试管，玻璃棒等。其他：pH试纸，牛角匙，牛皮纸，棉花，纱绳，灭菌锅等。方法和步骤1.配制牛肉膏蛋白胨培养基配方及配量：牛肉膏，蛋白胨5g，琼脂蒸馏水500ml称取药品：按照营养基配方与配量分别称取各药品，取少于总量的水于烧杯中，将培养基成分逐一加入水中待溶。加热溶解：将烧杯放在石棉网上，用文火加热，并不断用玻璃棒搅拌，使各药品快速溶解，然后补水至500ml。调节pH：用1mol/lNaOH调pH至避免调过碱，应缓慢加入，边加入边搅拌，并用pH试纸测酸
3、碱度值。分装：将配制好的培养基分装到相应的玻璃器皿中，并在固体和半固体培养基中加入琼脂，贴好标签，待灭菌。加压蒸汽灭菌法实验目的懂得加压蒸汽灭菌原理及其安全使用的注意事项。实验原理以加热密封锅体内的水和水蒸气的压力来提高锅体内蒸汽温度而达到对物品灭菌的目的。方法和步骤加水：取出装料桶，往锅内加水至与搁架圈同样高度为止。装料：将待灭菌的物品放入装料桶内并放回锅。加盖排气：在水煮沸后，以蒸汽驱赶锅内的空气沿排气软管从排气阀中溢出，待空气排尽后，才可关闭气阀继续加热。升压、保压、降压取料注意事项注意检查锅体和锅盖上的部件是否完好，并严格按照操作程序进行，避免发生各类意外事故。灭菌时切勿擅自离开岗位，
4、要注意压力表指针动态；要按培养基中的营养成分的耐热程度来设置合理的灭菌温度与时间，以免营养成分过多被破坏。务必待锅压下降到零后再打开排气阀和锅盖，否则因锅内压力突然下降，使瓶装培养基或其他液体因压力瞬时下降而发生复沸腾，从而造成瓶内液体沾湿棉塞或溢出等事故。在放入灭菌料桶前，切记应往锅体内加入适量的水，若锅体内无水或水量不够等均会造成在灭菌时引发重大事故。2.大肠杆菌的接种方法穿刺接种法实验材料目的掌握穿刺接种法并观察细菌在半固体培养基中的运动力。实验原理穿刺接种法就是用接种针挑取少量菌苔，直接刺入半固体直力柱培养基中央的一种接种法。方法和步骤1、接种前准备标明菌名旋松棉塞点燃酒精灯2、穿刺接
5、种法挑取菌种：在超净台中，酒精灯旁，左手持菌种管，右手拿接种针，经火焰灭菌后，用持针的右手拔出试管塞，试管口过火灭菌后再将接种针伸入菌种管中，现在斜面上端冷却后挑取少量菌苔，移出接种针，管口再过火，塞上塞子，将菌种管放回试管架上。刺穿接种：左手拿直立柱试管，在火焰旁用右手的小指和掌边拔出塞子。随之将试管口朝下，同时将接种针从直立柱培养基中央自下而上直刺到离管底处，然后沿原穿刺线拔出接种针。管口过火，塞上塞子，插在试管架上。灭接种针上的残菌：将带有菌的接种针在火焰上烧红，经灭菌后才可以放在桌面上。随手再将塞子塞紧，以防脱落。3、培养将已接种的直立柱试管置37恒温箱中，培养24h后取出，通过透射光
6、目测细菌在穿刺线上的生长情况，并记录结果。4、接种后处理清洗：将废弃的菌种管塞子拔去，置水浴中煮沸20min，然后刷洗干净，倒置于试管架上，沥干。整理：清理桌面。实验结果结果总体上来说算不错，穿刺线形状如玻璃棒，有扩散现象；边缘不整齐，这说明了大肠杆菌有鞭毛，可运动。注意事项半固体培养基琼脂的用量依据琼脂牌号不同而定的。其硬度的判断，以培养基冷却凝固后，用手轻敲即碎为准。为使培养基透明而不浑浊，配置的培养基必须过滤。接种前应该将接种针拉直，穿刺时手要平稳，不可左右摆动。穿刺接种时，接种针不可穿透培养基。液体接种法实验目的掌握利用各种接种工具进行液体接种的步骤及方法。观察细菌在液体培养时的群体特
7、征。实验原理在无菌操作条件下，用无菌的接种环、滴管、移液管或移液枪等接种工具将斜面菌种或菌种悬液移接到液体培养基中的一种方法。在定量接种时可用移液管进行。方法与步骤接种环接种1、接种前准备标明菌名旋松棉塞点燃酒精灯2、接种操作要点左手持试管，右手拿接种环，在火焰上灭菌后，将接种环伸入菌种管中，现在斜面上端冷却后挑取少量菌苔转移到试管的新鲜培养液中，让接种环在液面和管壁的交界处反复摩擦及振荡，以洗下环上的菌体，使其均匀分散入培养液中，然后移出接种环，塞上塞子，并立即烧去环上的菌体。3、混匀培养液：用拇指和中指捏住试管的上部，食指摁住塞子，将试管底部在左手手掌心上轻拍振荡，使成团的细菌细胞与培养液
8、充分混匀。4、适温培养:将试管插于试管架上，置于37恒温箱中，培养24h后取出，观察细菌在液体培养基中的生长特征，并记录结果。实验结果没摇动前，液面微浑浊，有一层菌膜覆盖，且管底有大量菌体沉淀，摇动后观察到液体有絮状浑浊。脓汁和粪便标本中病原菌的检测摘要脓汁和粪便标本中有不同的病原菌。为了探究两种标本中病原菌的种类、特性和生化反应等，本实验将对脓汁和粪便中的病原菌进行分离培养、革兰染色、生化反应、血清学反应、细菌药物敏感性试验等操作。在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等操作方法。从而达到掌握各种微生物实验的操作方法，培养对微生
9、物实验的兴趣，反思微生物实验中所遇到的问题并总结探讨如何解决优化的目的。引言常见的化脓性病原菌有金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、淋病奈瑟菌、铜绿假单胞菌等。临床上，脓汁标本在做细菌分离培养的同时，须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽孢有无，为临床提供最初的诊治依据；粪便和经离心的尿沉淀物等则直接接种与指定的培养基中。粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、大肠埃希菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基，选择培养基时应根据需要尽可能地抑制杂菌，以利于病原菌的检出。本实验通过常规的病原菌检
10、测方法从脓汁标本中分离出黄白两种细菌，均为革兰氏阳性球菌，其中黄色是致病菌金黄色葡萄球菌，白色是白色葡萄球菌；从粪便标本中分离到紫黑色和粉红色的细菌，均为革兰氏阴性杆菌，其中紫黑色的是大肠埃希菌，粉红色的是痢疾志贺菌。1.实验材料器材酒精灯、接种环、接种针、打火机、试管、棉塞、油性笔、污物盘、普通冰柜、奥林巴斯CX21型生物显微镜、拭镜纸、称量纸、药勺、牛皮纸、电炉、橡皮筋、锥形瓶、刻度尺、镊子、玻片、吸水纸、培养皿、高压蒸汽灭菌器、隔水式电热恒温培养箱等。试剂药品脓汁标本、粪便标本、营养琼脂、营养肉汤、半固体琼脂、普通营养琼脂培养基、伊红-美蓝培养基、斜面琼脂、结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、
11、稀释品红、香柏油、拭镜油、葡萄糖微量发酵管、乳糖微量发酵管、青霉素抗菌素纸片、先锋霉素抗菌素纸片、庆大霉素抗菌素纸片、蒸馏水、生理盐水、兔血浆、福氏志贺菌诊断血清等。2.实验方法与步骤实验的总流程：培养基的制备细菌的分离培养细菌的纯培养细菌的形态学检查细菌的生化试验等细菌的血清学试验、结果分析培养基制备营养琼脂培养基营养琼脂干粉与蒸馏水按适当比例充分混合均匀加热溶化高压蒸汽灭菌倒平板分装琼脂完全凝固后，平板倒放4冰箱保存备用斜面培养基营养琼脂干粉与蒸馏水按适当比例充分混合均匀加热溶化高压蒸汽灭菌倒试管分装培养基趁热斜放琼脂凝固以后，4冰箱保存备用空气与人体体表细菌学检查空气的细菌学检查实验方法
12、自然沉降法:根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面，培养以后，计数菌落形成单位，可了解空气的污染情况。实验步骤每组1个营养琼脂平板，选择采样地点将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边平板暴露于空气中15分钟平板倒扣盖上作标记37温箱培养24小时观察结果人体体表的细菌学检查实验步骤甲常规洗手，乙标准洗手，甲和乙共用1个平板。按下图在普通平板上接种手指上的细菌。第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。细菌的分离培养实验方法平板划线法：借助于划线，将混杂的多种细菌，在平板表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉
13、眼可见的细菌集团。实验步骤接种环烧灼灭菌分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和伊红美蓝平板上，各做两份烧掉接种环上多余的脓汁或粪便标本冷却后，使用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板，粪便标本接种于伊红美蓝平板接种环烧灼灭菌将平板倒置37培养1824h观察结果细菌的群体生长特性观察和纯化培养实验方法斜面接种法：是一种从已经生长好的菌种中挑取少量菌种移植到另一个斜面培养基的饭方法。该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。用灭菌的接种环取单个菌落或少许细菌，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线，一直划到斜面顶端。实验步骤接种环烧灼灭菌挑选平板上典
14、型的四种单菌落进行斜面接种纯培养做好标记接种环烧灼灭菌斜面培养基置于37培养过夜保存备用细菌的个体形态特征的观察实验方法:革兰氏染色法和肉汤接种法实验原理革兰氏染色法：G菌的细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上，呈紫色。G菌的肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，稀释品红复染后呈红色。实验步骤革兰氏染色法：涂片干燥固定染色具体步骤如下：取洁净玻片用灭菌操作后的接种环取生理盐水1-2环于玻片上挑取细菌培养物少许与盐水轻轻抹匀待涂片干燥后在酒精灯火焰外侧快速来回2-3回合结晶紫初染1分钟水洗卢戈碘液媒染1分钟水洗95乙醇脱色约20秒钟水洗稀释品红复染1分钟水洗吸干,镜检。肉汤接种法接种环烧灼灭菌分别在斜面培养物中挑取菌苔少许立即移入肉汤培养基管中在接近液面的管壁上轻轻研磨沾取少量肉汤调和混匀试管口通过火焰2-3次灭菌塞好棉
