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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划微生物生理生化反应实验报告细菌的生理生化反应实验报告【实验目的】了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。【实验原理】通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条
2、件下与肌酸类物质反应，生成红色化合物为反应阳性。有些细菌发酵糖类产生有机酸较多，使发酵液的pH下降到以下，当加入甲基红试剂后，时发酵液变红色，为甲基红反应阳性。某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。【实验材料和用具】1.菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。2.培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂3.仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、杜氏小管。【实验方法】V-P反应1.试管标记取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯
3、草芽孢杆菌和空白对照。2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。3.观察记录去除以上培养物，分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中，加入与培养液等量的V-P试剂，充分震荡2min。放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。甲基红实验于V-P实验留下的培养液中，分别加入2-3滴甲基红指示剂，立即观察培养液的颜色变化吲哚实验1.试管标记取5只装有蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照
4、不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。3.观察记录在培养基中加入乙醚1-2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿试管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂。观察记录结果糖发酵试验1.试管标记取分别装有葡萄糖、蔗糖、乳糖发酵培养液试管各4支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。3.观察记录【实验结果与分析】V-P产气肠杆菌结果为阳性，其余为阴性。甲基红大肠杆菌可以利用葡萄糖和乳糖，并且产气；普通变形菌可以利用葡萄糖、乳糖和蔗糖并
5、且在蔗糖中产气。大肠杆菌和普通变形菌结果为阳性，其余为阴性。抗生素氯苯青霉素对两种细菌的药性最强。抗生素对金黄葡萄球菌的药性强弱依次为氯苯青霉素、卡那霉素、氯霉素和链霉素。而对大肠杆菌则是链霉素、氯霉素和卡那霉素、氯苯青霉素。姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别3【实验题目】微生物生理生化实验【实验目的】1.了解生理生化的意义。2.掌握几种常用生理生化的实验方法。【实验器材】1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌，变形杆菌，产气肠杆菌2、试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等3、仪器和用具：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、
6、烧杯、量筒、德汉氏小管等4、培养基淀粉培养基、油脂培养基葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基蛋白胨水培养基葡萄糖蛋白胨水培养基【实验原理】在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程。具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶。许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以促进细胞外的化学反应。各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出他们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。具体实验原理如下：一、大分子物质的水解实验原理姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目
7、微生物学实验题目微生物生理生化实验组别31、淀粉水解由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，所以必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精,双糖和单糖，能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉。已知淀粉遇到碘会显现蓝色，因此可通过在淀粉培养基上滴加碘液来判断微生物是否能产生淀粉酶分解淀粉，菌落周围不呈蓝色，出现无色透明圈，则该菌种能够水解淀粉。2、油脂水解脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，而产生的脂肪酸可改变培养基的PH,因此在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间
8、后可通过观察菌苔的颜色判断菌种是否能够水解油脂，若出现红色斑点，则说明这种菌可产生分解油脂的酶。二、糖发酵实验原理糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。A培养前的情况B培养后产酸不产气
9、C培养后产酸产气图1：糖发酵实验姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别3三、IMViC实验1、吲哚实验用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测的指标。大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。2、甲基红实验某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸、乙酸和乳酸等多种有机酸，使培养基的PH值降低，加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色
10、，即甲基红反应。尽管所有的肠道微生物都能发酵葡萄糖产生有机酸，但是这个实验在区分大肠杆菌和产气肠杆菌上还是有价值的。这两种细菌在培养的早期均产生有机酸，但大肠杆菌在培养的后期仍能维持酸性倒平板：按照淀粉培养基配方配制固体淀粉培养基，灭菌，待培养基冷却至50左右，在酒精灯火焰旁倒平板，每组两个平板。标记：用记号笔在平板底部划成四部分，标好要进行接种的菌的编号，以免混淆。接种：在无菌操作台上，将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和铜绿假单胞菌分别在标记好的区域内点种，如图1所示，注意仅用接种针接触极少面积的培养基，避免因接种菌量过多而造成假阳性。培养：将平板倒置，在28温箱中培养两天。观察：取出培养
11、基，观察各种细菌的生长情况，打开平板盖子，滴入适量卢戈氏碘液于平板中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板，观察培养皿中菌落周围是否有无色透明圈产生，若有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解，该种菌为阳性，姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别3反之则为阴性。记录实验结果。2、油脂水解试验倒平板：按照油脂培养基配方配制固体油脂培养基，灭菌，待培养基冷却至50左右，充分振荡，使油脂均匀分布，在酒精灯火焰旁倒平板，每组两个平板。标记：用记号笔在在平板底部划成四部分，并标好需要接种的菌的编号。接种：在无菌操作台上将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和铜绿假单胞菌分
12、别划十字线接种于平板相对应部分的中心，如图2所示。培养：将平板倒置，在28温箱中培养两天。观察：取出平板，观察菌苔颜色，如果出现红斑点，说明脂肪水解，为阳性反应。记录实验结果。3.葡萄糖发酵实验培养基的配制：按照糖发酵培养基配置葡萄糖发酵培养基，分装至试管中，先将德汉氏小管中注满培养基，再把德汉氏小管倒置放入试管中，注意不要让德汉氏小管中进入空气，每组3只试管，灭菌。接种：待培养基冷却至常温时，在无菌操作台上，取葡萄糖发酵培养基试管2支分别接入大肠杆菌和普通变形杆菌，接种后轻摇试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡，第3支不接种，作为对照组。在各试管外壁上贴上标签，标签上分别标明发酵培养基的名
13、称和所接种的细菌菌名。培养：把接种后的试管在试管架上放好，将其放入培养箱中于28下培养两天。观察：观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡，并记录实验结果。4.乳糖发酵实验培养基的配制：按照糖发酵培养基配置乳糖发酵培养基，分装至试管中，用胶头滴管往德汉氏小管中注满培养基，再把德汉氏小管倒置放入试管中，注意不要让德汉氏小管中进入空气，每组五只试管，灭菌。姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别3接种：待培养基冷却至常温时，在无菌操作台上，取乳糖发酵培养基试管2支分别接入大肠杆菌和普通变形杆菌，接种后轻摇试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡。在试管外壁上贴上
14、标签，标签上分别标明发酵培养基的名称和所接种的细菌菌名。培养：把接种后的试管在试管架上放好，将其放入培养箱中于28下培养两天。观察：观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡，并记录实验结果。5.吲哚实验培养基的配制：按照蛋白胨水培养基配方配制培养基，分装至试管中，每组3只，高压灭菌锅灭菌接种：待培养基冷却后，在无菌操作台上将大肠杆菌、产气肠杆菌分别接入2支蛋白胨水培养基，剩余一只试管不接种，作为空白对照，贴好标签。培养：把接种后的试管放在试管架上放好，将其放入培养箱中于28下培养两天。观察：往培养后的蛋白胨水培养基内加入3-4滴乙醚，摇动数次，静置1min，待乙醚上升后，沿试管避徐徐加入2滴吲
15、哚试剂。在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。观察加入试剂后试管内的颜色反应并记录实验结果。6.甲基红实验培养基的配制：按照葡萄糖蛋白胨水培养基配方配制培养基，分装至试管中，每组3只试管，高压灭菌锅灭菌。接种：待培养基冷却后，在无菌操作台上将大肠杆菌、产气肠杆菌分别接入2支葡萄糖蛋白胨水培养基，剩余一只试管不接种，作为空白对照，贴好标签。培养：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培养箱中于28下培养两天。观察：培养两天后后，将每支葡萄糖蛋白胨水培养基培养物内加入2滴甲基红试剂，培养基变为红色者为阳性，变为黄色者为阴性。观察试管内的颜色变化，并记录实验结果。实验八微生物的生理生化反应请同学们预习现代工业微生物学实验技术P15916
