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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划免疫与微生物的实验报告学号：微生物学大实验班级：姓名：1.培养基的配置及消毒灭菌通用培养基的配制实验目的了解配制微生物培养基的原理和培养基的种类。掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤。实验原理培养异养细菌最常用的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基，它是一种天然培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，它不仅能为微生物提供碳源、氮源，还含有多种维生素。蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经蛋白酶水解后的中间产物，含有?、胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物，因此完全能满足大多数异养细
2、菌对营养的需要。材料和器皿试剂：牛肉膏、蛋白胨，NaCl，1mol/LNaOH,1mol/LHCl。器皿：台秤，玻璃烧杯，搪瓷烧杯，三角瓶，量筒，漏斗，试管，玻璃棒等。其他：pH试纸，牛角匙，牛皮纸，棉花，纱绳，灭菌锅等。方法和步骤1.配制牛肉膏蛋白胨培养基配方及配量：牛肉膏，蛋白胨5g，琼脂蒸馏水500ml称取药品：按照营养基配方与配量分别称取各药品，取少于总量的水于烧杯中，将培养基成分逐一加入水中待溶。加热溶解：将烧杯放在石棉网上，用文火加热，并不断用玻璃棒搅拌，使各药品快速溶解，然后补水至500ml。调节pH：用1mol/lNaOH调pH至避免调过碱，应缓慢加入，边加入边搅拌，并用pH试
3、纸测酸碱度值。分装：将配制好的培养基分装到相应的玻璃器皿中，并在固体和半固体培养基中加入琼脂，贴好标签，待灭菌。加压蒸汽灭菌法实验目的懂得加压蒸汽灭菌原理及其安全使用的注意事项。实验原理以加热密封锅体内的水和水蒸气的压力来提高锅体内蒸汽温度而达到对物品灭菌的目的。方法和步骤加水：取出装料桶，往锅内加水至与搁架圈同样高度为止。装料：将待灭菌的物品放入装料桶内并放回锅。加盖排气：在水煮沸后，以蒸汽驱赶锅内的空气沿排气软管从排气阀中溢出，待空气排尽后，才可关闭气阀继续加热。升压、保压、降压取料注意事项注意检查锅体和锅盖上的部件是否完好，并严格按照操作程序进行，避免发生各类意外事故。灭菌时切勿擅自离开
4、岗位，要注意压力表指针动态；要按培养基中的营养成分的耐热程度来设置合理的灭菌温度与时间，以免营养成分过多被破坏。务必待锅压下降到零后再打开排气阀和锅盖，否则因锅内压力突然下降，使瓶装培养基或其他液体因压力瞬时下降而发生复沸腾，从而造成瓶内液体沾湿棉塞或溢出等事故。在放入灭菌料桶前，切记应往锅体内加入适量的水，若锅体内无水或水量不够等均会造成在灭菌时引发重大事故。(转载于:写论文网:免疫与微生物的实验报告)2.大肠杆菌的接种方法穿刺接种法实验材料目的掌握穿刺接种法并观察细菌在半固体培养基中的运动力。实验原理穿刺接种法就是用接种针挑取少量菌苔，直接刺入半固体直力柱培养基中央的一种接种法。方法和步骤
5、1、接种前准备标明菌名旋松棉塞点燃酒精灯2、穿刺接种法挑取菌种：在超净台中，酒精灯旁，左手持菌种管，右手拿接种针，经火焰灭菌后，用持针的右手拔出试管塞，试管口过火灭菌后再将接种针伸入菌种管中，现在斜面上端冷却后挑取少量菌苔，移出接种针，管口再过火，塞上塞子，将菌种管放回试管架上。刺穿接种：左手拿直立柱试管，在火焰旁用右手的小指和掌边拔出塞子。随之将试管口朝下，同时将接种针从直立柱培养基中央自下而上直刺到离管底处，然后沿原穿刺线拔出接种针。管口过火，塞上塞子，插在试管架上。灭接种针上的残菌：将带有菌的接种针在火焰上烧红，经灭菌后才可以放在桌面上。随手再将塞子塞紧，以防脱落。3、培养将已接种的直立
6、柱试管置37恒温箱中，培养24h后取出，通过透射光目测细菌在穿刺线上的生长情况，并记录结果。4、接种后处理清洗：将废弃的菌种管塞子拔去，置水浴中煮沸20min，然后刷洗干净，倒置于试管架上，沥干。整理：清理桌面。实验结果结果总体上来说算不错，穿刺线形状如玻璃棒，有扩散现象；边缘不整齐，这说明了大肠杆菌有鞭毛，可运动。注意事项半固体培养基琼脂的用量依据琼脂牌号不同而定的。其硬度的判断，以培养基冷却凝固后，用手轻敲即碎为准。为使培养基透明而不浑浊，配置的培养基必须过滤。接种前应该将接种针拉直，穿刺时手要平稳，不可左右摆动。穿刺接种时，接种针不可穿透培养基。液体接种法实验目的掌握利用各种接种工具进行
7、液体接种的步骤及方法。观察细菌在液体培养时的群体特征。实验原理在无菌操作条件下，用无菌的接种环、滴管、移液管或移液枪等接种工具将斜面菌种或菌种悬液移接到液体培养基中的一种方法。在定量接种时可用移液管进行。方法与步骤接种环接种1、接种前准备标明菌名旋松棉塞点燃酒精灯2、接种操作要点左手持试管，右手拿接种环，在火焰上灭菌后，将接种环伸入菌种管中，现在斜面上端冷却后挑取少量菌苔转移到试管的新鲜培养液中，让接种环在液面和管壁的交界处反复摩擦及振荡，以洗下环上的菌体，使其均匀分散入培养液中，然后移出接种环，塞上塞子，并立即烧去环上的菌体。3、混匀培养液：用拇指和中指捏住试管的上部，食指摁住塞子，将试管底
8、部在左手手掌心上轻拍振荡，使成团的细菌细胞与培养液充分混匀。4、适温培养:将试管插于试管架上，置于37恒温箱中，培养24h后取出，观察细菌在液体培养基中的生长特征，并记录结果。实验结果没摇动前，液面微浑浊，有一层菌膜覆盖，且管底有大量菌体沉淀，摇动后观察到液体有絮状浑浊。微生物学实验报告实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察第一部分：显微镜的使用一、目的要求1熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。2学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。3了解各种显微镜的主要特征。二、实验原理光学显微镜的构造微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光
9、学部分。1、机械部分普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。放大倍数标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。物镜的放大倍数愈大，其工作距离愈短，这时光圈就要打开得愈大。显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。R=/式中：R-分辨距离
10、；-作用光的波长；数值口径。一些介质的折射率介质空气水玻璃香柏油折射率11355三、实验内容材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。方法：细菌很小，须使用油镜方可观察到。油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法：1、为使低倍镜取得最适之光源，可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度，将聚光器提高，光圈完全打开，然后调节电压旋钮至视野最合适。2、滴一滴香柏油，固定于载物台上，用推动器调节到载物台正中。在双目侧视下，下旋粗调节器，使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。然后眼睛从目镜观察，徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后
11、，再用细调节器调节以使物像清晰。如镜头已离开油面还未看到物像，则再重新操作。3、更换标本时应先提高油镜头，再更换玻片，切勿随意移动显微镜的位置。4、油镜观察完毕后，按“显微镜保护”中项处理。5、最后将油镜各部分还原，聚光器下降，反光镜垂直于镜座，镜头转成八字形，以免与聚光器发生碰撞。四、思考题1、使用显微镜时为何调节下列构造？反光镜，光圈，聚光器，粗调节器，细调节器，镜头回转器。答：聚光器的位置之升降可影响视野的明亮度，上升则视野明亮，下降则光线减弱。光圈的放大或缩小也可控制视野明亮程度。粗调节器和细调节器均是调节焦距的装置。镜头回转器为装置物镜和转换物镜之用。2、使用不同放大倍数的物镜时，工
12、作距离与光圈的关系。如何利用这一原理用好显微镜？答：物镜的放大倍数愈大，其工作距离愈短。标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。3、为何要选用与玻璃折射率相似的香柏油作为油镜的介质？油镜的原理是什么？答：香柏油只在使用油镜头时使用，因为当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增加数
13、值孔径达到提高分辨率的目的。可见光的波长平均为m。当使用数值孔径为的高倍镜时，它能辨别两点之间的距离为m；而使用数值孔径为的油镜时，能辨别两点之间的距离则为m。选用香柏油是因为它的折射率是4、显微镜有哪几种？各自的主要特征是什么？答：光学显微镜中除明视野显微镜外，还有暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显微镜；除光学显微镜外，还有电子显微镜。暗视野显微镜：在普通光学显微镜载物台下安装一个暗视野聚光器即成暗视野显微镜。相差显微镜：相差显微镜成像的原理和普通光学显微镜一样，所不同的是相差显微镜包括有环状光阑、装有相板的相差物镜和全轴调整望远镜三个特殊部分。荧光显微镜：荧光显微镜的主要特征是以紫外线为光源
14、，当照射到用荧光素标记的细菌时，荧光素吸收了紫外线的能量后，再发射出可见的橙、黄、浅绿色荧光。由于用荧光素标记的菌体各种结构中的溶解、吸附或化合情况不一，于是发出不同色调和亮度的荧光，从而可以观察细菌的不同结构。电子显微镜：电子显微镜的基本结构和工作原理与普通光学显微镜非常相似，不同的是用电子流代替光线，用电磁圈代替透镜聚焦。第二部分：细菌形态学检查方法一、目的要求1、了解不染色标本检查法，用悬滴法观察活细菌及其动力。2、熟悉染色标本的制备过程，掌握革兰氏染色法及其结果判断，了解革兰氏染色法原理。3、了解其它常用染色法。二、实验原理检查细菌形态的主要工具是显微镜，可根据不同目的将细菌染色或不染色进行镜检。常用的碱性染料有结晶紫、美蓝、碱性复红等。染色法又分单染色法和复染色法两大类。单染色法即仅用一种染料着色，所有的细菌均被染成一种颜色，无鉴别细菌的作用。复染色法又称鉴别染色法，通常用二种或二种以上的染料着色，由于不同种类的细菌或同种细菌的不同组成结构对染料有不同的反应性而被染成不同的颜色，从而有鉴别细菌的作用。2、最常用的细菌复染色法是革兰氏染色法。通过革兰氏染色法操作，可把细菌分成
