R2A 琼脂培养基培养基适用性检查方案 文件编号：VP-QC-2015-05R2A 琼脂培养基适用性检查方案文件编号：VP-QC-2015-05起 草 人： 审 核 人： 批 准 人： 批准日期： 年 月 日R2A 琼脂培养基培养基适用性检查方案 文件编号：VP-QC-2015-05目录1 概述 12 验证目的及范围 13 验证小组人员组成及职责 14 验证依据 25 验证前准备 26 验证的实施 2R2A 琼脂培养基培养基适用性检查方案 文件编号：VP-QC-2015-057 偏差处理 58 验证数据及评估 59 验证报告及评审 510 再验证及周期 511 验证文件及归档 512 附件 5R2A 琼脂培养基培养基适用性检查方案 文件编号：VP-QC-2015-051 验证目的及范围2015 版《中华人民共和国药典》中规定纯化水的微生物限度检查采用的培养基为R2A 琼脂培养基。
为 了 保 证 纯 化 水 微 生 物 限 度 检 查 的 准 确 性 和 可 靠 性 ， 需 对 该R2A 琼 脂 培 养 基 进 行 适 用 性 检 查 实 验 2 验证方法照 2015 版 药 典 非 无 菌 产 品 产 品 微 生 物 限 度 检 查 ： 微 生 物 计 数 法 （ 通 则1105） 中 “计 数 培 养 基 适 用 性 检 查 ”的 胰 酪 大 豆 胨 琼 脂 培 养 基 的 适 用 性 检 查 方 法 进行 ， 试 验 菌 株 为 铜 绿 假 单 胞 菌 和 枯 草 芽 孢 杆 菌 ， 应 符 合 规 定 3.验证小组人员组成及职责：3.1 验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部3.2 验证小组组成及职责列表组成 职 责QC1. 负责起草验证方案的起草2. 负责本方案的培训3. 仪器仪表校验确认4. 负责验证的实施5. 负责数据的收集和整理6. 负责数据分析7. 负责完成验证报告质量部 1. 负责验证方案、验证报告的审核与批准2. 负责验证现场的监督审查生产部 1. 负责保障设备、器具的完好2. 负责动力系统的保障4 验证接受标准4.1 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 0.5~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；4.2 被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。
5.验 证 前 准 备5.1 验 证 人 员 培 训 ： 验 证 报 告 起 草 人 有 责 任 在 方 案 批 准 后 （ 且 在 验 证 实 施 前 ） 对 本次 验 证 相 关人员进行培训培训人员记录见附件 1 R2A 琼脂培养基培养基适用性检查方案 文件编号：VP-QC-2015-055.2 将 所 有 的 平 皿 和 稀 释 剂 都 应 该 严 格 按 照 相 关 的 灭 菌 程 序 消 毒 ， 以 确 保 其 对 试 验的 结 果 没 有影响 5.3 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录5.4 相 关 文 件序号 相关文件 文件编号1 DHG 型电热恒温鼓风干燥箱操作规程 WI-1002 BSC-100-II-B2 生物安全柜操作和维护保养规程 WI-1013 WXQI-S-18SI 自动手提式灭菌器使用和维护保养规程 WI-1034 DK 型电热恒温水浴锅操作规程 WI-1045 HWS 型恒温恒湿箱操作规程 WI-1056 JA2003N 电子天平操作及维护保养规程 WI-1067 PHS-3C 型 PH 计操作及维护保养规程 WI-1088 SHP-3C 型低温生化培养箱操作及维护保养规程 WI-1099 YJ-875SDB 型净化操作台的操作及维护保养规程 WI-11310 《培养基管理规程》 WI-766.验 证 的 实 施6.1 实验材料6.1.1 培养基类别 培养基名称 厂家 批号验证培养基 A2R 琼脂培养基对照培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基6.1.2 仪器设备DHG 型电热恒温鼓风干燥箱、BSC-100-II-B2 生物安全柜、WXQI-S-18SI 自动手提式灭菌器、DK 型电热恒温水浴锅、HWS 型恒温恒湿箱（30～35℃）、JA2003N 电子天平、PHS-3C 型 PH 计、 SHP-3C 型低温生化培养箱（ 20～25℃）、YJ-875SDB 型净化操作台。
6.1.3 稀释剂：PH 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液6.1.4 计数用培养基R2A 琼脂培养基培养基适用性检查方案 文件编号：VP-QC-2015-05胰酪大豆胨琼脂培养基6.1.5 验证用菌株铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]6.1.6 灭菌前调节 PH 溶液：10%碳酸钠溶液或 1mol/L 氢氧化钠溶液/15%冰醋酸溶液或 1mol/L 盐酸溶液6.2 验证内容6.2.1 培养基的配制灭菌过程将分装包装好的培养基分别放入灭菌器中 121℃灭菌 15 分钟后取出取 1 管已灭菌的培养基，放冷至 25℃测定 pH 值，应在 7.2 0.2 范围内6.2.1.4 外观性状灭菌后的培养基应对其外观性状仔细检查，如发现色泽异常、浑浊、橡胶塞被培养基沾染等，均应挑出弃去将制备好的培养基保存在 2～25℃、避光的环境中，在存放 2 周后，培养基外观应色泽正常，澄清透明6.2.2 菌液制备接种铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养 18〜24 小时。
6.2.3 菌液计数（每种菌液接种 2 个）6.2.3.1 分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌（50～100cfu/ml）各 1ml 加入无菌培养皿，立即注入不超过 45℃胰酪大豆胨琼脂培养基 15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养 48 小时，计数每株试验菌平行制备 2 个平皿6.2.4 培养基适用性检查6.2.4.1 分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌各 1ml 加入培养皿，每种菌液平行做 2 皿，立即注入不超过 45℃胰酪大豆胨琼脂培养基 15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养 48 小时；分别计数同时取相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验6.2.4.2 取每管装量为 9ml 的胰酪大豆胨液体培养基 7 支，分别接种小于（50～100cfu/ml）的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌 1ml 各 2 支，另 1 支不接种作为空白对照，置 30~35℃培养箱培养 48 小时，逐日观察结同时取相应的对照培养基替代R2A 琼脂培养基培养基适用性检查方案 文件编号：VP-QC-2015-05被检培养基进行上述试验。
6.2.5 结果判定：6.2.5.1 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；6.2.5.2 被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好7.偏差处理验证的数据产生的任何偏差，应及时进行偏差调查，按照《化验室偏差管理规程》进行处理并如实记录，给出合理的偏差处理措施，并上报验证领导小组，记录备案，并且根据处理措施进行相应的处理，并对处理的过程、结果进行记录与跟踪验证小组根据数据分析，做出相应的评定与结论，报请验证委员会批准8 验证数据及评估验证小组对验证检测数据进行评估，并对结果进行评价结果评价：评价人： 日期： 9.验证报告及评审9.1 验证小组依据本方案实施验证，编写验证报告9.2 验证小组组织专业人员对验证报告进行评审9.3 QA 对验证报告给出结论，验证合格发放验证合格证10.再验证及周期10.1 纯化水微生物限度检查用的 A2R 琼脂培养基的适用性检查验证，其再验证周期一般为三年，以证实确认培养基的可靠性。
10.2 当药典中纯化水微生物限度检查法发生变更时，需进行再验证；10.2 当所用到的检验设备出现故障进行重大维修，尤其是关键部件的维修；仪器的性能发生了明显的偏移，已不能再满足检验产品质量的要求时，均需要对该检验方法进行重新确认，以证明变更对已经确认的效果无影响。