《非培养手段在感染性疾病诊治中应用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《非培养手段在感染性疾病诊治中应用（35页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、非培养手段在感染性疾病诊治中的应用,现状,各种感染发生率不断升高,早期诊断不能满足临床需要,C反应蛋白（CRP）,降钙素原（PCT）,T-SPOT.TB,G-试验,GM试验,乳胶凝集试验,CRP（C-reactive protein）,是一种急性时相蛋白，在机体受到微生物入侵或组织损伤等炎症性刺激时由肝脏合成，因能在钙离子存在时与肺炎球菌C多糖起沉淀反应而得名。 1930年由Tillett和Francis发现。,CRP,主要由肝细胞在白细胞介素（interleukin,IL）-6、IL-1及TNF-刺激下合成。 受年龄、免疫状况和药物等因素影响较小。 正常合成率1-10mg/d，急性炎症反应时
2、每天合成大于1g。 CRP在体内分布广，除血液外，胸腔积液、腹水、心包液、关节液等中均可检出。 不能通过胎盘。,CRP,超敏CRP（hs-CRP） 与CRP为同一种蛋白质，该检测方法具有能检测到小于或等于0.3mg/L的CRP的能力。,在感染发生后6-8小时开始升高，24-48小时达高峰。 升高的幅度与感染的程度正相关，可升高几百倍甚至上千倍； 成人或儿童10-99mg/L提示局灶性或浅表性感染；大于或等于100mg/L提示败血症或侵袭性感染等。 疾病治愈后，含量急速下降，1周内可恢复正常。,CRP,病毒性感染时CRP一般不升高。 外科损伤患者血CRP水平在8-10小时内可增加10倍。,降钙素
3、原（PCT）,是降钙素的前体，为相对分子量13000的糖蛋白，无激素活性。 由甲状腺的髓质细胞分泌。先由甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网翻译为PCT前体，PCT前体在进入内质网，经糖基化、剪切后成为PCT。,PCT,正常情况下，血浆中PCT含量极少（低于0.1g/L）。 细菌、真菌、寄生虫感染、SIRS、脓毒症、败血症、创伤等时，PCT显著增高，可达正常的几倍甚至上万倍。 病毒性感染、肿瘤、自身免疫性疾病等时正常或轻度升高。,PCT,全身细菌感染患者血清PCT水平比CPR出现早。感染后2h开始升高，6h急剧上升，8-24h维持高水平。 血清PCT非常稳定，收集标本24h后PCT浓度在室温下大约下降1
4、2%，4度时下降6%，容易检测。,PCT,抗生素治疗有效时，PCT的降低早于临床症状的改善。 PCT水平持续升高提示炎症处于上升期或提示病情趋于恶化，反之亦然。,PCT与脓毒症,PCT在诊断血培养阳性脓毒症患者的意义优于CRP。 PCT与脓毒症相关器官衰竭评分（SOFA评分）有显著相关性。,Hur M,et al.Comparison of diagnostic utility between procalcitonin and C-reactive protein for the patients with blood culture-positive sepsis.2009. Sudhir
5、 U,et al.Significance of serum procalcitonin in sepsis.2011.,PCT与胰腺炎,急性水肿型胰腺炎和无菌坏死胰腺炎PCT无显著变化。 重症胰腺炎血清PCT明显高于轻型患者。 PCT0.5g/L，提示重症胰腺炎； 1.8g/L可预测胰腺感染坏死。,Blbller N,et al.Procalcitonin is a predictive marker for severe acute pancreatitis.2006. Pavlidis TE,et al. Advances in prognostic factors in acute p
6、ancreatitis,a mini-review.2010.,PCT与胰腺炎,PCT可作为急性胰腺炎发生感染并发症的指标，并可区分重症胰腺炎和轻症胰腺炎及作为观察疗效的指标，其升高程度还可反映全身炎症感染激发器官衰竭的严重性。,PCT与细菌性脑膜炎,细菌性脑膜炎患者PCT明显高于病毒性脑膜炎组。 以PCT2g/L诊断细菌性脑膜炎的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为100%、66%、68%、100%；以PCT0.5g/L诊断细菌性脑膜炎的灵敏度、特异度分别为99%、83%。,PCT与自身免疫性疾病,PCT不受自身免疫性疾病活动的影响，仅在全身感染时显著升高。 不受激素使用剂量或其他免
7、疫抑制因素的影响。 可用来鉴别自身免疫病是否同时合并感染。,PCT与真菌感染,真菌感染时，PCT轻度升高。 其水平高低有助于鉴别细菌或真菌感染。 PCT90%，可排除细菌血症的阴性预测值为94%。,结核病诊断,皮肤结核菌素试验,特异性较低,对免疫抑制者 诊断灵敏度低,操作简便，成本低廉,T-SPOT.TB（T细胞斑点试验）检测原理,结核杆菌：胞内感染病原体，感染后难以彻底清除； 结核杆菌激发机体产生较强的Th1细胞介导的细胞免疫； 效应T细胞被近期暴露的抗原再次刺激后释放-干扰素；,T-SPOT.TB（T细胞斑点试验）检测原理,使用结核分枝杆菌特有的片段即缺失区域（deletion regio
8、n,RD）RD1基因编码的早期分泌靶抗原6（early secreted antigenic target 6,ESAT-6）和培养过滤蛋白10（culture filtrate protein 10,CFP-10）作为近期抗原刺激； 应用酶联免疫斑点技术（enzyme-linked immunosot assay,ELISPOT）检测经结核分枝杆菌特异性抗原刺激后释放-干扰素的细胞数量。,特点,敏感性高：能从60 000个分泌-干扰素的细胞中检测出1个细胞； 特异性高：只有结核分枝杆菌和极少数非结核分枝杆菌才会出现阳性反应，BCG及其他多数非结核分枝杆菌无阳性反应； 受机体免疫状态的影响较小
9、；,特点,对活动性肺结核、肺外结核、潜伏性结核感染及免疫抑制的结核患者均能检测； 对胸腔积液中的单核细胞进行T-SPOT.TB检测有助于结核性胸膜炎的诊断； 可进行疗效评估。,缺点,检测步骤较繁琐； 对实验室条件和技术要求较高； 所需仪器和试剂昂贵； 不能完全鉴别潜伏性结核感染与活动性结核感染。,真菌抗原、细胞壁成分检测,G试验：诊断是否真菌感染，但不能区别是曲菌或酵母样真菌；对隐球菌、接合菌无意义。 GM试验：血浆、血清、BAL、胸水、CSF，诊断是否曲霉菌感染； 乳胶凝集试验：检测循环荚膜抗原，诊断是否新生隐球菌。,G试验检测1-3-D-葡聚糖,是多种不同类真菌的细胞壁的共有成分，其相对分
10、子量6800部分可激活马蹄蟹的协同凝集酶-G因子（发生凝集），用于系统性真菌病的筛选。 正常人含量为4pg/ul，深部念珠菌病人可增加数倍。特点：与症状的消长成正比，可用于疗效观察。,G试验的临床意义,早期、快速诊断侵袭性真菌感染 可用于真菌感染早期筛查，适用于念珠菌、曲霉、肺孢子菌、镰刀菌、地霉、组织细胞浆菌和毛孢子菌等，不能用于检测隐球菌和接合菌感染； 对真菌感染病症进行诊断，阳性结果代表存在侵袭性真菌感染。,半乳甘露聚糖（GM试验）,半乳甘露聚糖（galactomannan,GM）是曲霉菌细胞壁的组成成分，当曲霉在组织生长时可释放进入血循环。 监测的是半乳甘露聚糖，主要适于侵袭性曲霉菌感
11、染的早期诊断。但菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原。GM释放量与菌量成正比，可以反映感染程度。连续检测GM可作为治疗疗效的监测。,GM试验临床意义,诊断侵袭性真菌感染 血清GM检测能区分侵袭性肺曲霉感染与白色假丝酵母菌、毛霉、肺炎链球菌感染和烟曲霉口咽定植。但不能区分曲霉菌种。 评价疗效的可靠指标。,GM试验与G试验小结,可作为推定诊断的标准。 GM：检测半乳甘露聚糖，对曲霉菌感染诊断特异性强，假阳性反应可以在青霉菌属中出现；部分含青霉烷砜衍生物的抗菌药物可以诱发阳性反应。 G试验：检测1-3-D-葡聚糖，在很多真菌中都可以出现阳性反应，但在隐球菌、接合菌、毛霉、根
12、霉呈阴性反应。,隐球菌病,新生隐球菌好发于细胞免疫功能低下者，在免疫功能正常的人群中，感染率约为十万分之一。 在免疫抑制患者中，发病率约为5-10%。 在AIDS患者中，感染率高达30%，在国外隐球菌病已成为艾滋病患者常见的并发症之一，也是导致患者死亡的重要原因。 新生隐球菌循环荚膜抗原是新生隐球菌病，尤其是新生隐球菌脑膜炎的诊断手段。,隐球菌荚膜多糖抗原检测,敏感性和特异性高 最有价值和应用最广的免疫学方法 抗原滴度与疾病转归呈正相关 可指导与治疗判断预后 新生隐球菌乳胶凝集试验 5min可出结果，特异性达90-100%，可检测35ng/ul的抗原,乳胶凝集试验对隐球菌脑膜炎的诊断价值,168例患者中，隐球菌抗原乳胶凝集试验法检测阳性19例，18例为隐球菌脑膜炎，1例为病毒性脑膜炎。 墨汁染色涂片：敏感性61.1%，特异性100%。 脑脊液真菌培养：敏感性38.9%，特异性100%。 脑脊液隐球菌抗原检测：敏感性100%（18/18），特异性99.3%（149/150） 李娟等.四川大学学报（医学版），2010,41（6）:107,PCT G试验 GM试验 隐球菌抗原等,早期诊断 快速诊断 指导用药 评价效果 动态观察,谢谢！,
