《咪唑类药物致急性脱髓鞘脑病的药物流行病学研究课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《咪唑类药物致急性脱髓鞘脑病的药物流行病学研究课件（44页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、左旋咪唑诱发加重EAE的实验研究通报,温州医学院附属第一医院 神经科 郑荣远 邢清和 韩 钊 李 勇 杨学志 朱振国 殷为勇 邱伟文 吴赛珍 卢晔芬,一、左旋咪唑对中枢免疫的作用？ 二、LMS对实验性变态反应性 脑脊髓炎(EAE)的影响? 二、LMS诱发加重EAE的作用机制?,LMS能诱发人体的急性脱髓鞘性脑炎,推测是引发了颅内B型药物不良反应的型变态反应; 急性脱髓鞘性脑炎的动物模型? 公认是EAE-T细胞介导的迟发性自身免疫反应性脑脊髓炎!,EAE能模拟人类急性脱髓鞘性脑炎,行为学改变 组织病理学改变 炎症细胞浸润 神经髓鞘脱失 分子病理学改变 CD4+/CD8+分子水平 TH1/TH2分
2、子水平 促炎细胞因子、抑炎细胞因子表达水平,LMS能否诱发加重实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)?,LMS对EAE的影响是直接的?还是间接的? LMS是在怎么样的条件下才能够起作用的? LMS通过体内哪些免疫反应环节?何种途径?何种蛋白? 而发生作用的? 学术探索-艰辛之旅-漫长畸曲之路,阳光灿烂之道!,动物试验建立LMS诱发加重 急性脱髓鞘性脑炎的动物模型,1、Wistar大鼠实验性过敏性脑脊髓炎（experimental allergic encephalomyelitis, EAE）动物模型，来研究LMS对急性炎性脱髓 鞘脑病作用及其机制; 2、Lewys大鼠EAE动物模型，来研究LMS
3、对 急性脱髓鞘性脑炎(脑病)的作用及其机制; 3、C57/BL小鼠EAE模型，来研究LMS对中枢 急性炎性脱髓鞘性脑病的作用及其机制;,LMS能否诱发加重实验性变态反应性脑脊髓炎EAE?,A、用LMS不同剂量、不同给药方法，直接或间接地诱发Wistar大鼠EAE，观察其发病率、神经症状、病理改变、复发等影响,实验结果一：LMS对EAE有明显的 促发（加重）作用：,1）LMS可明显提高EAE的发病率，加重其神经症状，促进EAE的复发。 2）LMS对EAE影响的量效关系呈“钟型”，以10mg/kg的LMS作用最强，在发病率、病理表现、炎性细胞因子等变化均如此。 3）LMS对能明显上调EAE中枢IC
4、AM-1、iNOS、IFN、IL-1、IL-2、IL-6 mRNA表达。,LMS对不同免疫方法诱发EAE的影响: 提高发病率、加重神经症状、促进复发,LMS对GPSCH组和GPSCH+BPV组两种方法诱发的EAE均有促发-加重作用： LMS可增加EAE的发病率，加重临床症状 LMS对两者的影响程度明显不同： LMS对GPSCH组的促发作用更为明显。,1、邢清和，郑荣远。复旦学报医学科学版，2001，28(3): 202-205。 2、邢清和，郑荣远。中国免疫学杂志，2002， 18(6): 420-421。,LMS提高EAE的发病率,GPSCH：豚鼠全脊髓匀浆； LMS：左旋咪唑，抗原乳剂免疫
5、后0、24、48h 3次ip； BPV:百日咳疫苗，抗原免疫后即刻后肢ic； dpi:免疫后天数； a P0.05, b P0.05, c P0.01与GPSCH组相比；d P0.05, 与GPSCH+BPV组相比。,表1 左旋咪唑对不同方法诱发EAE的影响,LMS加重EAE的神经症状,*为发病动物EAE症状评分的均值；GPSCH：豚鼠全脊髓匀浆；LMS：左旋咪唑；BPV:百日咳疫苗，抗原免疫后即刻后肢ic；dpi:免疫后天数；a P0.05, b P0.05, 与GPSCH组相比；d P0.05, e P0.05 与GPSCH+BPV组相比。,表2 左旋咪唑对不同方法诱发的EAE症状评分的影
6、响 (症状评分标准差)*,图2.LMS对EAE症状评分影响的动态观察 （）Control, () GPSCH, () GPSCH+LMS, () GPSCH+BPV, () GPSCH+BPV +LMS. N=10.,照片三. LMS促发EAE的CNS病理变化,照片四. LMS促发EAE的CNS病理变化,LMS不同给药方法对EAE的影响,单次给药、3次给药对EAE均有促发作用： EAE发病率增加，症状加重趋势，潜伏期无明显影响 不同方法给药，影响程度明显不同： 3次给药对EAE促发作用更为明显。,表3. 左旋咪唑不同给药方法对EAE影响,dpi:免疫后天数； a P0.05, b P0.05,
7、 与EAE组相比；LMS：左旋咪唑； 抗原乳剂免疫后即刻1次ip LMS 10mg.kg-1； *抗原乳剂免疫后0、24、48h 3次ip LMS 10mg.kg-1。,表4. 左旋咪唑不同给药方法对EAE症状评分影响 (症状评分标准差)*,* 为发病动物EAE症状评分的均值； LMS：左旋咪唑； *抗原乳剂免疫后即刻1次ip LMS 10mg.kg-1； *抗原乳剂免疫后0、24、48h 3次ip LMS 10mg.kg-1。 dpi:免疫后天数；a P0.05, 与EAE组相比。,图4. LMS不同给药方法对EAE症状分值影响的动态观察,（）Control, () GPSCH, () GP
8、SCH+LMS*1, () GPSCH+LMS*3, N=10.,图3. LMS不同给药方法对EAE体重的影响,（）Control, () GPSCH, () GPSCH+LMS*1, () GPSCH+LMS*3, N=10., LMS对EAE复发的影响,LMS不仅增加EAE发病率，还促进EAE复发,表5. 左旋咪唑对EAE复发的影响,* 免疫后天数；LMS：左旋咪唑，抗原乳剂免疫后0、24、48h 3次ip.,图5. LMS对EAE复发的影响,（）Control, () EAE, () EAE+LMS10, () EAE+LMS30. N=8.,重复实验结果表明：LMS能诱发动物的中枢免疫
9、变态反应过程，诱发急性脱髓鞘性脑病（脑炎）。相关的动物模型能复制。,以上表明LMS能：,增加EAE的发病率，加重EAE的临床症状，并促进EAE的复发，对EAE有明显的促发作用。 LMS 3次给药的促发作用强于单次给药， 剂量为10mg.kg-1作用最强，这与LMS增强免疫时的量效关系是一致的； 单独应用LMS制成的乳剂来免疫Wistar大鼠，亦表现出与EAE大鼠相似的临床症状与病理学改变，随后的研究亦证实了这一点，如图6、图7和表6、表7,实验结果二：LMS对EAE有 （直接）激发作用：,LMS能直接激发EAE： 经过两届研究生的重复试验，用LMS（替代豚鼠脊髓匀浆）制作抗原乳剂，也同样能激发
10、EAE，行为学和组织病理学改变与经典的EAE相同。,4、李 勇，李剑敏，郑荣远，等. 温州医学院学报。2003,33(2):82-84。 5.杨学志，郑荣远，李剑敏，等. 中国临床神经科学.2005,13(4):343-347,LMS能直接激发EAE：,图6 所示：随着疾病的不断进展，动物逐渐出现活动减少、食欲下降、体重减轻，症状达到高峰时，体重下降达到最低点。,表6. 不同抗原组别诱发EAE的发病情况,Dpi: 免疫后天数，分别与GPSCH组的潜伏期和发病率相比: ap = 0.525 0.05； bp = 0.049 0.05； dp = 0.024 0.05,EAE动物的神经症状观察(评
11、分法),图7所示：于抗原免疫后10天左右，相继出现尾巴无力、松弛、下垂， 步履蹒跚，后肢无力、瘫痪、四肢麻痹等典型症状， 与GPSCH组相比，LMS+GPSCH组潜伏期明显缩短。,LMS激发EAE的组织病理学改变,照片五. LMS激发 EAE , CNS明显炎性反应(血管套) -HE染色200）,照片六. LMS激发 EAE，CNS明显炎性反应和脱髓鞘，（LFB染色200，斑片状脱髓鞘）,照片七. LMS激发EAE,CNS明显炎性反应和脱髓鞘（LFB染色400，片状髓鞘稀疏）,LMS的中枢免疫药理作用机制？,LMS 通常已知的CNS免疫反应过程 有哪些影响呢？,IL-2 TNF- IFN-,I
12、L-4 IL-10,TGF-,EAE相关的细胞因子网络,TNF-,IFN-,诱发和加重EAE的发展,IL-23,IL-4,IL-10,促进EAE的缓解和恢复,TGF-,IL-17,IL-12,TH1细胞,THIL-17细胞,TH2细胞,TH3细胞,实验结果三、LMS促发加重EAE的免疫分子病理表现,进行了有关免疫细胞、蛋白、分子水平的观察，结果表明： LMS对加重EAE大鼠CNS血脑屏障的影响 MMP-2 、ICAM-1表达增加。 LMS增加EAE神经系统CD4阳性细胞数，同时激活了B27-CD28共刺激信号通路的分子表达。 LMS促进EAE的ICAM-1、iNOS及IFN、 IL-1、IL-
13、1和IL-2mRNA表达的升高。 LMS促进EAE大鼠脊髓内ICAM-1及IFNmRNA 的表达。,6.杨学志，郑荣远，李剑敏，等.温州医学院学报.2005,35(6):443-445 11. 李勇, 郑荣远, 李剑敏,等. 中国神经科学杂志,2004,20(05):384-387.,LMS对EAE大鼠脊髓内 CD28和CD4表达的影响-增加,与第3组比较，p0.01, p0.05,表2 EAE大鼠CD28 CD4及CD8变化,LMS对EAE大鼠脊髓内 B7-1和B7-2表达的影响,与第3组比较，p0.01,表2 EAE大鼠B7-1、B7-2表达水平情况,图1 EAE发病过程中的症状评分变化,
14、Mean Clinical Score为每组所有动物EAE症状评分的均值,LMS对EAE脊髓内 IFN-、TGF-1 mRNA表达的影响,各组IFN-、TGF- mRNA表达水平与临床指标变化/病理变化程度之间具有相关性,表5 LMS对EAE大鼠脊髓IFN-、TGF- mRNA表达的影响,吴赛珍，郑荣远，邱伟文，等。中国临床神经科学杂志，2006（6）,表4-2. LMS对EAE大鼠脊髓内 IL-1和IL-1 mRNA表达的影响,a P0.05, b P0.05, c P0.01与Control组相比; d P0.05, e P0.05, f P0.01与EAE组相比.,表4-3. LMS对E
15、AE大鼠脊髓内 IL-2和IL-6 mRNA表达的影响,a P0.05, b P0.05, c P0.01与Control组相比; d P0.05, e P0.05, f P0.01与EAE组相比.,表4-4 LMS对EAE大鼠脊髓内 ICAM-1和iNOS mRNA表达的影响,a P0.05, b P0.05, c P0.01与Control组相比; d P0.05, e P0.05, f P0.01与EAE组相比.,表4-5. LMS对EAE大鼠脊髓内 IFN mRNA表达的影响,a P0.05, b P0.05, c P0.01与Control组相比; d P0.05, e P0.05,
16、 f P0.01与EAE组相比.,LMS对EAE大鼠CNS血脑屏障的影响 MMP-2 、ICAM-1表达增加,LMS1与EAE组相比P0.05 LMS2与EAE组相比P0.01,表4 各组大鼠大脑MMP-2 、ICAM-1 mRNA阳性细胞数(个/ 视野) 的变化(x s),groups MMP-2 ICAM-1,CFA对照组 EAE组 10.661.52 10.331.15 LMS1组 18.802.282 14.002.001 LMS2组 17.252.912 14.372.442 LMS3组 10.500.70 10.001.41,卢晔芬，郑荣远，邱伟文，等。中国临床神经科学杂志，2006（6）,
