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1、实验七饥饿与饱食对肝糖原含量的影响,一、实验目的和要求,1.掌握饥饿与饱食对小白鼠肝糖原含量的影响 2.熟悉肝糖原提取鉴定的原理和方法 3.掌握低速常温离心机的使用，了解离心技术,二、实验原理,肝糖原是由许多葡萄糖分子聚合而成的物质，是动物机体能够迅速动用的糖储存形式之一。,二、实验原理,血糖,糖原合成,肝（肌）糖原,胰高血糖素,胰岛素,二、实验原理,提取:用三氯醋酸破坏肝组织的蛋白质和酶，使其沉淀而保留糖原，再用乙醇将糖原从滤液中沉淀出来，溶于热水中，即为糖原溶液。 性质:糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。 定量:肝糖原在浓硫酸中水解为葡萄糖后，分子内部脱水缩合成5-羟甲基-呋喃甲醛。后者与
2、蒽酮反应生成蓝色化合物，在620nm波长下有最大光吸收。,三、器材和试剂,1.主要器材：手术盘、剪刀、镊子、天平、研钵、离心机、离心管、恒温水浴箱、分光光度计、微量进样器、试管及试管架、白瓷凹皿 2.主要试剂： （1）蒸馏水 （2）5%三氯乙酸 （3）标准的葡萄糖溶液：0.5ml相当于25ug葡萄糖 （4）95%乙醇 （5）碘试剂：I2 100mg 及KI 200mg溶解于30ml蒸馏水中 （6）0.2%蒽酮试剂,四、操作,四、操作,小白鼠,断头处死,0.5g肝脏,2ml 5%三氯乙酸,研钵中研为匀浆,离心管,3ml 蒸馏水洗涤,上清液转移至另一离心管中,4000rpm 离心3min,沉淀即为初步纯化糖原。加2ml H2O溶解，吹打混匀，即为肝糖原提取液,加5ml 95%乙醇，混匀，静止1min，4000r/min离心5min,观察对比两组溶液现象,取0.5ml定量检测,取2滴于白瓷凹皿中,观察、记录两组颜色，与蒸馏水比较,加入碘试剂1滴,四、操作,四、操作,四、操作,五、实验结果,1.性质：糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。,2.定量： 糖原浓度(g /ml)=Au/As Cs 1/1.11 肝糖原含量=糖原浓度100/0.5液体体积106 注：1.11是用此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的系数，即100g糖原用蒽酮试剂显色相当于111g葡萄糖用蒽酮试剂所显的色。,
