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1、1/79,大赛璐（中国）手性事业部,手性分析中的注意事项,手性分析条件的建立和优化,2/79,Daicel手性色谱柱一览表,正相直链淀粉衍生物CHIRALPAK AD / AD-HCHIRALPAK AS / AS-H纤维素衍生物CHIRALCEL OD / OD-HCHIRALCEL OJ / OJ -HCHIRALCEL OA, OB, OCCHIRALCEL OF, OG, OKCHIRALCEL CA-1,反相CHIRALPAK AD -RHCHIRALPAK AS -RHCHIRALCEL OD-RHCHIRALCEL OJ -RH,其它CROWNPAK CR (), ()CHIRA
2、LPAK OT(), OP ()CHIRALPAK WH, MA ()CHIRALPAK QD-AXCHIRALPAK QN-AX,共价键合型新产品CHIRALPAK IACHIRALPAK IB,3/79,第二代手性色谱柱,1) 5 微米硅胶用于获得高的理论塔板数 2) 适用于痕量分析3) 采用15cm长的手性柱可节省分析时间,2) H 系列手性柱,CHIRALPAK AD-H CHIRALCEL OD-H CHIRALPAK AS-H CHIRALCEL OJ-H,9 / 47,H系列,AS vs. AS-H (中性组分),AS,AS-H,柱尺寸 ： 0.46cmI.D. x 25cmL
3、样品 ： trans-Stilbene oxide 条件流动相 ： 正已烷 / 异丙醇 = 90 / 10流量 ： 1.0 ml/min. 温度 ： 25 C检测波长 ： UV 254nm,10 / 47,2) H 系列手性柱,AS vs. AS-H (碱性组分),AS,AS-H,柱尺寸 ： 0.46cmI.D. x 25cmL 样品 ： 1-5-Chloro-2-(methylamino)phenyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline 条件流动相 ： 正已烷 / 异丙醇 / 二乙胺 = 90 / 10 / 0.1流量 ： 1.0 ml/min. 温度 ： 25 C
4、检测波长 ： UV 254nm,11 / 47,2) H 系列手性柱,AS vs. AS-H (酸性组分),AS,AS-H,柱尺寸 ： 0.46cmI.D. x 25cmL 样品 ： 2-(4-Hydroxyphenoxy)丙酸 条件流动相 ：正已烷 / 异丙醇 / 三氟乙酸 = 90 / 10 / 0.1流量 ： 1.0 ml/min. 温度 ： 25 C检测波长 ： UV 254nm,2) H series columns,12 / 47,柱尺寸 ： 0.46cmI.D. x 25cmL 样品： 1-Phenyl ethanol 条件流动相 ： 正已烷 / 异丙醇 90 / 10温度 ：
5、25 C流量 ： 1.0 ml/min.检测波长 ： UV 254nm,OJ,OJ vs.OJ-H (痕量分析),OJ-H,痕量分析 0.5 手性化合物,13 / 47,2) H 系列手性柱,柱尺寸 ： 0.46cmI.D. 25cmL 样品 ： 2-Phenyl丙酸 条件流动相 ： 正已烷 / 异丙醇 / TFA = 80 / 20 / 0.1温度 ： 25 C流量 ： 1.0 ml/min.检测波长 ： UV 254nm,AD vs. AD-H (痕量分析),AD,AD-H,痕量分析 0.5 手性化合物,14 / 47,2) H 系列手性柱,9/79,* Chiral Crown Ethe
6、r coated on silica * For amino acids (primary amino group near the chiral center) * Dipeptides,CROWNPAK CR(+) 冠醚性手性色谱柱,10/79,CROWNPAK CR(+) 的拆分实例,Resolution of Amino acids on CROWNPAK CR(+),11/79,第三代手性色谱柱,CHIRALPAK IA, IB,12/79,涂敷型正相: 正己烷, 异丙醇, 乙醇反相: 水, 乙腈, 甲醇, 乙醇, 异丙醇,在广泛的流动相条件下具有很强的手性分离能力 色谱试验过程中，
7、用于溶解样品的溶剂没有任何限制 在各种溶剂中柱性能异常稳定,键合型,CHIRALPAK IA, CHIRALPAK IB,CHIRALPAK IA与IB研发背景,13/79,规格 : 150 或 250 X 4.6 mmID, 250 X 10 或 20 mmID柱温 : 0 to 40 C柱压 : 10 MPa,CHIRALPAK IA, IB 的基本特征,CHIRALPAK IA 载体 : 硅胶 手性选择剂 : 直链淀粉- 三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯),R=,CHIRALPAK IB 载体 : 硅胶 手性选择剂 : 纤维素- 三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯),14/79,不同流动相
8、体系下手性分离,19/21,CHIRALPAK IA柱应用实例,15/79,流动相: n-hexane/EtOH 90/10 1 ml/min, 25C,20/21,IA,IB柱的修复再生,16/79,CHIRALPAK IA分离实例 -中性样品-,甲基叔丁基醚 =100 k1=0.31, =2.94,Hexobarbital,Lorazepam,正己烷/丙酮 =60/40 k1=1.75, =1.47,正己烷/1,4-二氧环乙烷 =70/30 k1=1.65, =2.19,Glutethimide,正己烷/二氯甲烷 =25/75 k1=3.93, =1.52,4-Benzoyloxy- 2-
9、azetidinone,17/79,Hex/THF/DEA=90/10/0.1 k1=3.94, =1.55,Bupivacaine,Hex/EtOAc/DEA=40/60/0.1 k1=2.90, =2.22,Hydroxyzine,Hex/Acetone/DEA =80/20/0.1 k1=3.36, =1.37,Disopyramide,MTBE/EtOH/DEA =80/20/0.1 k1=0.67, =1.75,Indapamide,CHIRALPAK IA分离实例 -碱性样品-,18/79,Hex/EtOAc/TFA =70/30/0.1 k1=2.83, =1.18,Suprof
10、en,Hex/EtOH/TFA =85/15/0.1 k1=0.74, =1.37,Flurbiprofen,MeOH/EtOH/TFA =50/50/0.1 k1=0.59, =1.45,Sulindac,Hex/THF/TFA =65/35/0.1 k1=1.01, =1.14,Tropic acid,CHIRALPAK IA分离实例 -酸性样品-,19/79,正己烷/三氯甲烷 =50/50 =1.12,正己烷/二氯甲烷 =80/20 k1=0.69, =1.62,正己烷/四氢呋喃 =90/10 k1=2.28, =2.26,Mephobarbital,trans-Stilbene oxi
11、de,2,2,2-Trifluoro-1- (9-anthryl)ethanol,CHIRALPAK IB分离实例 -中性样品-,20/79,正己烷/THF/EDA =70/30/0.1 k1=0.67, =2.68,正己烷/CHCl3/EtNA =65/35/0.1 k1=1.20, =1.33,MTBE/EtOH/EDA =95/5/0.1 k1=0.45, =2.98,Laudanosine,Terfenadine,Oxprenolol,CHIRALPAK IB分离实例 -碱性样品-,21/79,正己烷/乙酸乙酯/TFA =70/30/0.1 k1=2.69, =1.59,Warfari
12、n,N-Benzyloxycarbonyl-valine,正己烷/CHC/甲醇/TFA =70/30/1/0.1 k1=1.52, =1.14,CHIRALPAK IB分离实例 -酸性样品-,22/79,维也纳大学 W.Lindner教授研究开发的离子交换型手性色谱柱,不对称炭原子临近的胺正离子和酸性官能基（X - )所形成的不对称环境是 手性化合物分离的基本作用力,手性识别剂Quinine衍生物 QN-AX：(8S, 9R) Quinidine衍生物 QD-AX：(8R, 9S),离子交换型新手型色谱柱,23/79,CHIRALPAK QD-AX MeOH/AcOH=100/1(v/v),N
13、-Ac-Ala,N-Ac-Ser,CHIRALPAK QD-AX MeOH/AcOH=97/3(v/v),N-Boc-Leu,CHIRALPAK QN-AX MeOH/AcOH=100/1(v/v),7.7,9.5,4.7,5.6,7.6,9.5,N-保护氨基酸的分析实例,24/79,内容提纲,1. 手性HPLC分析条件的建立和优化1-1 正相色谱2-2 反相色谱2. 手性色谱柱的自动筛选3. 手性分析中的注意事项,25/79,4种主要的正相柱和反相柱,R=,R=,R=,R=,15/21,26/79,分析条件优化流程图 (1),酸性,中性,碱性,1. 流动相中添加物的必要性,配制流动相,Hex
14、/IPA/TFA =90/10/0.1,Hex/IPA/DEA =90/10/0.1,Hex/IPA =90/10,样品,27/79,碱性样品,添加物在分离中的作用,Hex/IPA/DEA=90/10/0.1,流量：1.0mi/min. 温度：25、检测波长：（254）,流动相 Hex/IPA=90/10,Hex/IPA/AcOH=90/10/0.1,流动相 Hex/IPA=90/10,流量：1.0mi/min.温度：40、检测波长：（254）,酸性样品,（没出峰 ),（无法分离 ),28/79,添加物的种类和用量,*1 主要用于1级胺 *2 主要用于1级氨基醇,29/79,分析条件优化流程图
15、 (2),保留时间?,长,适宜的分析时间 (10-30 min.),短,增加 异丙醇,增加 正已烷,2. 配制好流动相,选择合适的手性柱,分析,30/79,分析条件优化流程图 （3）,没有分离,部分分离,3. 选择合适的手性柱,尝试别的手性柱,OK!,基线分离,继续优化分析条件,分离？,31/79,筛选结果,色谱条件流动相： Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1 流量 ：1.0ml/min. 温度 ：40 检测波长 ：UV254nm 样品 ：,先择效果最好的手性柱, 然后继续优化分析条件,32/79,分析条件优化流程图 （4-A）,部分分离,A.降低异丙醇浓度,B. 调整温度,C. 更换醇类,4.分析条件继续优化,33/79,醇浓度的影响,在多数情况下，降低醇的浓度可延长保持时间，改善分离度,Column：AD, Temp.：40, Flow rate：1.0ml/min.,Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1,Hex./IPA/ AcOH =100/1/0.1,Sample：Flurbiprofen,34/79,部分分离,
