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1、,血型鉴定和交叉配血 中常见问题分析和处理,血型相容性检测,受血者和供血者AB0血型是否相容 受血者和供血者RhD血型是否相容 主次侧交叉配血是否相容 受血者血清中是否有临床有意义的意外抗体,第一部分,ABO正反定型不符的原因分析和处理,第二部分,原因,一、实验者操作技术的错误 二、红细胞标本问题 三、血清标本的问题,原因,一、实验者操作技术错误未加入抗体或血清未识别溶血血清与红细胞比例不当离心速度、时间不够使用失效或错误试剂实验结果记录、解释错误,1.假阴性结果,原因,离心速度过大、时间过长使用了受到细菌污染的试剂试验器皿不干净实验结果记录、解释错误,2.假阳性结果,二、红细胞标本问题,患者
2、近期接受了大量ABO血型相容但不同型的红细胞，如骨髓移植患者，或非O型人接受O型红细胞,原因,二、红细胞标本问题,某些ABO基因变异的个体或ABO亚型红细胞，一些白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原减弱，应用抗A、抗B试剂未能出现预期的凝集反应,原因,二、红细胞标本问题,红细胞获得性或遗传性的异常，如获得性B抗原红细胞或Tn/T多凝集红细胞，人血清抗A、抗B试剂可能与这些异常的红细胞反应,原因,二、红细胞标本问题,使用未洗涤的红细胞标本，其表面黏附的血浆或血清中含针对抗A、抗B试剂中染色剂或其他成分的抗体，出现假阳性反应,原因,二、红细胞标本问题,患者血清中高活性、高浓度冷自身抗体严重致
3、敏（包被）自身红细胞，以至自发地发生凝集，而不是试剂的特异性免疫反应所致 红细胞表面包被IgG类抗体,原因,三、血清标本的问题,小的纤维蛋白凝集的红细胞凝块被误认为是血液凝集，如使用血浆标本或未完全去除纤维蛋白的血清标本时。,原因,三、血清标本的问题,免疫抑制疾病患者血清中ABO抗体减少或消失。老年人ABO抗体减弱 4-6月龄内婴儿血清中ABO抗体未产生或很弱，一般只做正定型,原因,三、血清标本的问题,血清中不正常浓度和比例的蛋白质成分或高分子蛋白增多可引起非特异凝集，如缗钱状红细胞的非特异凝集。 血清中含抗A、抗B以外的其他红细胞抗体，如抗M、抗I等。 患者接受了ABO血型不同的骨髓移植,原
4、因,三、血清标本的问题,患者血清中含有针对红细胞保护剂的抗体 大量C 1分子由于异常高效价的补体结合抗体抗A、抗B作用，结合到红细胞膜上，遮蔽了A、B抗原位点，不发生凝集,原因,基本程序,1.重新采集标本，以避免采集、标记、污染等错误 2.查询患者既往病史、输血史、用药史、骨髓移植史 3.彻底洗涤标本或试剂红细胞 4.应用抗AB、抗A1、或抗H检测红细胞 5.分析抗筛结果，确定结果是否受同种异型或自身冷抗体干扰 6.室温孵育30min后，离心观察结果，以检测弱的抗原抗体反应 7.用自身红细胞对照，以确定自身抗体的干扰,分析和处理,一、 抗原表达减弱所致的ABO正反定不符 二、抗-A、抗-B血清
5、的意外反应所致的ABO正反定不符 三、 意外的血清学反应所致的ABO正反定不符,分析和处理,ABO正反定不符的分类,一、抗原表达减弱所致的ABO正反定不符,血型抗原表达减弱的常见原因 ABO亚型红细胞 白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱，应用抗A、抗B试剂未能出现预期的凝集反应 新生儿,分析和处理,抗原表达减弱所致ABO正反定不符的处理 将抗A、抗B和抗A，B试剂与洗涤过的红细胞在室温或4孵育30min，以增强抗原、抗体的结合 用木瓜酶、无花果酶和菠萝蛋白酶处理红细胞，以增强抗原、抗体的结合 应用抗AB、抗A1、或抗H检测红细胞,分析和处理,一、抗原表达减弱所致的ABO正反定不符,
6、用人血清抗A、抗B进行吸收放散试验，检测弱A、B抗原，但不是所有单克隆抗体试剂都适宜做吸收放散试验，单克隆抗A、抗B必须经过系统验证，且同时要做O型血吸收放散试验作对照 检测唾液中A、B和H血型抗原物质,分析和处理, 获得性B红细胞 获得性类A抗原 混合视野凝集 抗体包被红细胞,分析和处理,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符, 引起抗-A、抗-B血清意外反应的因素,获得性B红细胞(特征) 常出现在有肠道细菌进入血循环的疾病，也可发生在正常人 通常只有A 型人能出现获得性B抗原 常伴有T和T n多凝集红细胞出现(细菌感染时) 自身抗B不与自身获得性B抗原反应(无自凝现象),分
7、析和处理,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符,获得性B红细胞(鉴定) 调整人血清抗B试剂pH至6.0时，即不与获得性B细胞反应 分泌型者唾液中无B血型物质 乙酸酐处理能明显减弱其反应，但正常B细胞不受影响,分析和处理,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符,获得性类A抗原 造血干细胞的体细胞突变可造成部分红细胞持续性Tn抗原激活，类同A抗原 Tn和T一样属隐蔽性抗原,激活暴露后与所有血型的血清和人血清血型抗体出现凝集反应(全凝后多凝) 蛋白酶能降解Tn分子，消除与抗A凝集反应性，而正常A抗原不受影响,也
8、可通过AB血清证实,分析和处理,混合视野凝集 非O型人近期输用O型血 骨髓移植后 A3细胞与抗A呈典型的混合视野凝集现象 单合子的镶嵌红细胞、双合子的交移体红细胞,分析和处理,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符,抗体包被红细胞 患HDN婴儿、存在自身免疫或同种异体免疫的成人，其红细胞严重包被IgG抗体分子 与含一定蛋白质浓度的试剂（抗D、抗A、抗B）产生凝集 45 放散后，抗体解离，即可准确定型,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符,分析和处理,抗体太弱或消失 非正常高浓度的抗A、抗B可引起前带现象 A2、A2B或其他ABO亚型人血清中可能有抗A1 患者血
9、浆蛋白浓度过高或静脉输用了大量大分子药物等原因，可发生类似凝集现象，如缗钱状凝集,分析和处理,引起意外血清学反应的因素,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符,冷自身抗体，如抗I、抗IH、抗IA等 自身免疫性温型抗体 同种抗体/意外抗体,分析和处理,引起意外血清学反应的因素,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符,抗体太弱或消失如新生儿、老年人、免疫抑制患者，应注意患者的年龄和诊断 非正常高浓度的抗A、抗B可引起前带现象，导致假阴性,将血清稀释或用EDTA（2.5）处理可消除 A2、A2B或其他ABO亚型人血清中可能有抗A1, 抗A1只凝集A1型红细胞而不凝集A2、O型红细胞,三、意外
10、的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,患者血浆蛋白浓度过高或静脉输用了大量大分子药物等原因，可发生类似凝集现象，如缗钱状凝集将血清用生理盐水稀释3倍或用盐水替换技术可消除,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,冷自身抗体，如抗I、抗IH、抗IA等(自凝)a.所有试剂及细胞37孵育， 37下判读结果b.将冷自身抗体吸收c.将血清用0.01mol/L DTT处理和再定型,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,自身免疫性温型抗体 自身免疫性溶血性贫血病人血清中可有温型自身抗体 37反应比室温强 血清能凝集自身和其他各型红细胞 若红细胞上吸附自这种自身抗体，在自身或他
11、人血清中均可出现凝集,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,自身免疫性温型抗体 正定被误认为AB型，反定被误认为O型用递增温度（22，37，45）洗涤红细胞后再做血型鉴定,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,同种抗体/意外抗体室温下抗-P、抗-M、抗E等，可能出现意外反应，干扰ABO血型鉴定 抗体特异性抗体鉴定，选择抗原阴性的红细胞做反定,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,多发性骨髓瘤致ABO血型鉴定困难1例,应用举例,多发性骨髓瘤（MM）：一种恶性浆细胞疾病，大量分泌异常的单克隆免疫球蛋白(M 蛋白) ,影响红细胞表面负电荷状态,血清蛋白浓度和
12、比例异常,A/G比例失调,红细胞呈缗钱状非特异性聚集,给血型鉴定带来一定的困难。,病情简介,患者，女，38岁，因骨痛、贫血 2个月入院；Hb 65 g/L ,WBC 6.4 109 / L,PL T 90 109 / L, 尿本周蛋白阳性,BUN、Cr 均异常；骨髓象示:浆细胞37% 。诊断：多发性骨髓瘤。有既往输血史。,血型血清学检查,正定： A型，RhD（） 反定： O型 直抗： （） 抗筛： （）,处理,1.吸收试验,6次洗涤后的患者压积红细胞 等量的抗A、抗B血清（1:128）,4 1h,离心，取上清，测吸收液的抗A、抗B效价,抗A降低明显，抗B 1：128,吸收后的患者RBC用NS洗
13、涤6次等量的NS,56 1015min,放散液与5标准 A、B RBC反应,Ac:+ Bc: -,彻底洗涤,吸收放散试验证明：患者RBC上有A抗原，无B抗原,为A型,2.放散试验,3.将患者血清用O型标准RBC吸收,等份血清等份O细胞 振荡,室温 1530min,离心，取上清，转移到另一等份O细胞中,吸收后的血清与标准A、B红细胞反应,Ac: - Bc:+,患者血清中有抗-B，无抗-A,患者血型最终确定为A型 RhD（），输注2U 经过筛选的A型悬浮RBC后，未见任何不良反应,交叉配血试验中常见问题分析和处理,第三部分,交叉配血原则,除非极为紧急情况，输血前患者与献血者必须进行交叉配血 受血者
14、血清中无即刻或迟发性地凝集和(或)溶解所输入的红细胞的抗体 献血者血清中无即刻或迟发性地凝集和(或)溶解受血者红细胞的抗体,方法,盐水介质交叉配血检测不完全抗体的交叉配血,盐水介质交叉配血只能检出IgM类抗体（主为ABO血型系统抗体），无法检出IgG，具有很大的危险性，只能在受血者血清中不含临床有意义抗体的情况下进行。,检测不完全抗体的交叉配血临床最常见的迟发型输血反应ABO系统以外的其他血型(如Rh）的IgG类抗体导致的血型不相容 有输血史、妊娠史或血清中有意外抗体的患者必须进行不完全抗体的交叉配血试验 包括抗人球蛋白法、蛋白酶法、促凝剂法等,抗人球蛋白法鉴定不完全抗体最可靠的方法，传统的抗
15、人球法不能成 为临床输血的常规检验。1986年,Lapierre发明的微柱 凝胶抗球蛋白试验准确、可靠、不需洗涤，可方便的应 用于抗体筛检和交叉配血试验,交叉配血不相容的原因及解决办法,一、血型鉴定错误：受血者、献血者红细胞ABO血型不相容，出现问题最多的是，其次才是技术错误。 复查血型二、患者存在冷反应自身抗体：采用自身对照和37 水浴以及递增盐水温度洗涤患者红细胞等方法排除非特异性凝集的干扰,责任错误,交叉配血不相容的原因及解决办法,三、患者存在温反应自身抗体：采用吸收放散试验后取患者的红细胞与血清和同型的洗涤红细胞进行交叉配血。,交叉配血不相容的原因及解决办法,四、血清蛋白紊乱及白球蛋白
16、比例倒置引起的假凝集：如多发性骨髓瘤、肺癌、肝癌患者等。多表现为主侧凝集,交叉配血不相容的原因及解决办法,五、ABO血型以外的其它血型系统引起的交叉配血不合：常发生于有输血史、妊娠史的患者，产生主侧凝集。如抗D、抗E、抗C、抗c、抗I、抗e和抗Fyb等，用经筛选的不含相应抗原的血液进行交叉配血即可消除。,交叉配血不相容的原因及解决办法,六、献血者红细胞DAT阳性：大约万分之一健康人包被了IgG或补体的红细胞，不应输用此类细胞。,交叉配血不相容的原因及解决办法,七、献血者红细胞是多凝集红细胞：正常人血清中可含有非红细胞刺激而产生的自然发生的抗体，如抗T、抗Tn等。应筛选低水平抗T、抗Tn的血液,
