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1、第九章 血脂及血浆脂蛋白检验,第一节 概述第二节 血清总胆固醇测定第三节 血清三脂酰甘油测定第四节 血清高密度脂蛋白胆固醇测定第五节 血清低密度脂蛋白胆固醇测定第六节 血清载脂蛋白A1和B测定第七节 血清脂蛋白电泳分析第八节 血清脂蛋白（a）测定,本章内容概要,第一节 概述,血脂及血浆脂蛋白脂蛋白代谢紊乱,一、血脂及血浆脂蛋白,血脂：是指血浆中脂类的总称。属于中性脂肪（甘油三酯和胆固醇）和类脂（磷脂、糖脂、固醇、类固醇）的总称,定义：,脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质 与蛋白质结合成脂蛋白的形式存在。,（一）血浆脂蛋白的分类,超速离心法：根据脂蛋白在一定密度的介质中漂浮 速率不同而进行分
2、离的方法。,电泳分离法：根据不同密度的脂蛋白所含蛋白质的表面电荷不同，利用电泳将其分离，并与血浆蛋白质的迁移率比较以判断 其部位。,分离方法,超速离心法：,乳糜微粒（chylomicron,CM）,极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein,VLDL）,中间密度脂蛋白（intermediate density lipoprotein,IDL）,低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）,高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）,脂蛋白（a）（lipoprotein (a),Lp(a)）,乳糜微粒、前-、和
3、 四条脂蛋白区带,电泳法,（二）血浆脂蛋白的组成,组成：,蛋白质、三脂酰甘油、磷脂（PL）、游离胆固醇（FC）及胆固醇酯（CE）等成分组成。,其中蛋白质部分称为载脂蛋白（Apo）,AApoA AAB48 ApoB 载脂蛋白（a） B100CApoC CCApoD近年来，还发现了Lp（a）,脂蛋白分类,1.乳糜微粒CM 颗粒最大，脂类含量高达98%，密度极低。由小肠粘膜细胞在吸收食物脂类（主要是甘油三酯）时合成，经乳糜导管，胸导管到血液。主要功能为运输外源性甘油三酯。2.极低密度脂蛋白vldl 主要在肝脏利用脂肪酸和葡萄糖合成。若食物摄取过量糖或体内脂肪动用过多，均可导致血vldl增高。vldl
4、中脂类占85%-90%，其密度也很低。主要功能为vLdL是运输内源性甘油三酯。3.低密度脂蛋白LdL的结构大致可分为三层：内层、 中层、外层。游离胆固醇分布于三层之中。,4.高密度脂蛋白HBL 是一组不均一的脂蛋白HBL主要由肝合成，小肠也可合成，HBL按密度大小又可分为HBL1、HBL2和HBL3。HBL1又称为HBLc，仅在摄取高胆固醇膳食后才在血中出现，健康人血浆中主要含HBL2和HBL3。HBL主要是将胆固醇从肝外组织转运到肝进行代谢。5. 脂蛋白（a） lp(a)核心部分由甘油三酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯等脂质和载脂蛋白b100组成，结构类似LdL。lp(a)含有两类载脂蛋白，即ap
5、oB100和apo(a)lp(a)是动脉粥样硬化性疾病的一项独立危险因子。,（三）血浆脂蛋白的结构与功能,结构：大致为球形颗粒，由两大部分组成 即疏水性的内核和亲水性的外壳（图10-1）。 内核由不同量的CE与TG组成 表层由载脂蛋白、PL及FC组成 FC及PL的极性基团向外露在血浆中，载脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而亲水部分突出于脂蛋白颗粒的表面。,血浆脂蛋白的结构与载脂蛋白的功能有密切的联系,脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白(Apo),载脂蛋白定义：,种类：,按1972年Alaupovic建议的命名方法，用英文字母顺序编码，分为ApoA、B、C、D、E、F、G、H、J等。由
6、于氨基酸组成的差异，每一型又可分若干亚型。,功能：,维持脂蛋白的结构 例如：ApoA、ApoC、ApoE调节脂蛋白代谢的关键酶 例如：ApoA、ApoC能激活磷脂酰胆碱胆固醇脂酰基转移酶（LCAT）促进胆固醇的酯化，ApoC激活脂蛋白脂肪酶（LPL），促进 CM和VLDL中三脂酰甘油降解识别脂蛋白受体 例如：ApoE能识别肝细胞CM残余颗粒受体ApoB100识别LDL受体,脂蛋白受体,定义：,脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。,脂蛋白与脂蛋白受体的作用：,不仅是运送细胞所必需的脂蛋白
7、，也能消除血和外周组织中具有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白。,种类：,已有很多种，主要有LDL受体、残粒受体及清道夫受体。,LDL受体：不仅能识别ApoB100、ApoE，在细胞结合、摄取和降解LDL及其它含ApoB100的脂蛋白过程中起中介作用，对维持细胞和全身胆固醇平衡起重要作用。,各种脂蛋白受体功能,残粒受体：能识别ApoE，是清除血液循环中CM残粒和-VLDL残粒的主要受体，它也能结合含ApoE的HDL。,清道夫受体：主要存在于巨噬细胞表面,介导修饰LDL(包括氧化LDL和-VLDL)从血液循环中清除。,二、血浆脂蛋白代谢紊乱,血浆脂蛋白代谢分类：,外源性代谢途径：指食物中摄入的胆固醇和甘
8、油三酯在小肠中合成CM及CM代谢的过程 。,内源性代谢途径：指肝脏合成VLDL，然后转变为IDL和LDL并被肝脏或其它器官代谢的过程,胆固醇的逆向转运：,HDL参与将胆固醇从外周组织运输到肝脏的过程。,脂蛋白代谢紊乱,（一）高脂蛋白血症,定义：,高脂血症是指血浆中胆固醇或和甘油三酯水平升高。血浆脂类以血浆脂蛋白形式存在，因此，高脂血症一定时会导致高脂蛋白血症。,分型：,1表型分型法,主要是基于各种血浆脂蛋白升高的程度不同而进行分型。该分类法不包括病因学，故称表型分类。,（1）型高脂蛋白血症 又称家族性高乳糜微粒血症,（2）a型高脂白血症,（3）b型高脂蛋白血症,（4）型高脂蛋白血症,（5）型高
9、脂蛋白血症,（6）型高脂蛋白血症,高脂蛋白血症表型分型法,甘油三酯及胆固醇危险水平的划分标准,2按是否继发于全身性疾病分类,继发性高脂血症：,原发性高脂血症：,继发性者由一些全身性疾病引起血脂异常，如糖尿病、肾病综合征、肾功能衰竭、甲状腺功能减退症、肝胆疾病、系统性红斑狼疮、肥胖症、饮酒等。此外，某些药物如-受体阻断剂、降压药等也可引起血脂异常。,在排除继发性高脂血症后，可诊断为原发性。已知部分原发性高脂血症由先天性基因缺陷所致,3高脂血症的基因分型法,家族性高脂血症的临床特征,低脂蛋白血症,1家族性低-脂蛋白血症,2-脂蛋白缺乏血症,3家族性低-脂蛋白血症,第二节 血清胆固醇测定,简介,胆固
10、醇是人体内重要的脂类成分，具有重要的生理功能。游离胆固醇 30% 血清总胆固醇（TC）胆固醇酯 70% 血浆胆固醇引起动脉粥样硬化，形成堵塞性血管疾病。,血清（浆）总胆固醇测定,一、比色法二、酶法三、气相色谱法四、高效液相色谱法五、同位素-稀释质谱法,酶测定法,特点：,常规测定中现已广泛应用酶法，酶法具有特异性好，精密度和灵敏度。由于操作简便，试剂无腐蚀性，特别适用于自动生化分析，目前已成为测定胆固醇的主要方法。,原理,胆固醇酯H2O 胆固醇游离脂肪酸 胆固醇O2 胆烷-4-烯-3-酮H2O2H2O24氨基安替比林酚 醌亚胺4H2O,试剂与器材,1、酶应用液2、参考血清3、器材 试管、刻度吸管
11、、微量加样器、分光光度计、恒温水浴箱,实验操作,取3支试管，按下表操作,混匀，置于37水浴箱，放置15分钟，以空白管调零点，在 510nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。 计算测定管吸光度 血清胆固醇（mmol/L）= - 参考胆固醇浓度（mmol/L）标准管吸光度参考范围3.105.70 mmol/L,评价：,主要缺点是：,优点：本法灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。,本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C和谷胱甘肽等的干扰。,影响TC水平的因素,年龄与性别； 长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TC增高； 遗传因素； 其它：如缺
12、少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。,【临床意义】,病理性高TC血症：见于脂肪肝、肝脏肿瘤、甲状腺功能亢进严重糖尿病、动脉粥样硬化等。,病理性低TC血症：见于肝脏疾病如急性肝坏死、肝硬化，甲状腺功能亢进，恶性贫血、溶血性贫血营养不良等,第三节 血清三脂酰甘油测定,简介,三酰酯甘油（TG）是由一分子甘油和三分子脂肪酸组成。 每一分子三酰酯甘油含有23种不同的脂肪酸。,血清（浆）甘油三酯的测定方法,气相层析高效液相层析红外分光光度法散射比浊法化学法酶法,基本操作：,（一）化学法分溶抽提-乙酰丙酮显色法,1、抽提：关键是选用合适的抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷 脂、游离甘油和葡萄
13、糖等干扰物质的影响。 2、皂化：甘油三酯水解生成甘油，这一步大都采用KOH作皂化剂 3、氧化：过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸 4、显色：甲醛的定量主要有两种方法：,甲醛与变色酸(4，5-二羟-2，7-萘二磺酸)在硫酸溶液中加热生成紫色化合物,甲醛与乙酰丙酮在铵离子(NH4+)存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶,实践步骤,加入物（ml） 测定管 对照管 空白管血清 0.02 - - 标准液 - 0.02 -蒸馏水 - - 0.02抽提液 2.5 2.5 2.5 0.04mol/L H2SO4 0.5 0.5 0.5 加H2SO4时边加边摇，使其充分混匀，静置分层后分别准确吸取上清液于
14、另外3支试管中上清液 0.3 0.3 0.3造化剂 1.0 1.0 1.0 混匀，在56恒温水浴箱中保温5min氧化剂 1.0 1.0 1.0显色剂 1.0 1.0 1.0,混匀后，置60 水浴20min，取出冷却。用分光光度计在波长 415nm处，空白管调零，读取各管吸光度。 计算测定管吸光度 血清三酰酯甘油（mmol/L）= - 标准液浓度（mmol/L）标准管吸光度参考范围0.561.70mmol/L,注意事项,1.每加一次试剂需摇匀。 2.皂化、氧化与显色的温度和时间对吸光度均有影响，因此，每批标本都需要做标准管。 3.以血浆作标本时，应注意抗凝剂的影响，通常用EDTA-Na2. 4.标本应及时分离，无论血清、血浆。,(二)酶法,磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAP法） 原理 TG + 3H2O LPL 甘油 + 3脂肪酸甘油 + ATP GK 磷酸甘油 + ADP磷酸甘油 + O2 GPO 磷酸二羟丙酮 + H2O22 H2O2 + 4-AAP+4-氯酚 POD 红色醌类化合物 + 4H2OGOP、4-AAP、4-氯酚三者合称PAP，故本法称GPO-PAP法,
