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1、实验六 果蝇唾腺染色体制片,一、实验目的二、实验材料三、实验原理四、实验用具药品五、实验步骤,一、实验目的,了解果蝇唾液腺染色体的形态学及遗传学特征；学习分离果蝇幼虫唾液腺的技术 。,二、实验材料,图1 果蝇的生活史 1.卵 2.一龄幼虫 3. 二龄幼虫 4.三龄幼虫 5.蛹 6.成虫,野生型果蝇三龄幼虫,果蝇不同生活周期形态观察,蛹,三、实验原理,果蝇唾腺染色体特点： 巨大，是多线染色体；正常：间期DNA复制 两条染色单体 着丝点裂开 子染色体 核分裂 胞质分裂果蝇：有丝分裂停止在分裂间期，DNA不断自我复制，着丝点不 裂开 同源染色体紧密配对：体细胞联会，所以染色体只呈现单倍数； 形成染色
2、中心，从染色体中心处伸出5条长臂，1条短臂； 染色后，出现一系列宽窄不同、染色深浅不一的横纹；,果 蝇 唾 腺 染 色 体 图,果蝇唾腺染色体模式核型,四、实验用具药品,1仪器用具：显微镜、双目解剖镜、培养瓶、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、酒精灯、火柴等。 2药品试剂：无水酒精、冰醋酸、1%醋酸洋红、改良苯酚品红、生理盐水、1N盐酸、蒸馏水。 3培养基：玉米琼脂培养基。,五、实验步骤,1、选取幼虫； 2、腺体剖取 ； 3、腺体解离 ； 4、染色； 5、压片； 6、观察。,1、选取幼虫：,取三龄幼虫，置于载玻片上，并滴加一滴生理盐水，观察幼虫结构：具一钝尾和带黑色口器的尖头端,尾,头,2
3、、腺体剖取：,取两支解剖针，一针压住幼虫身体的近头端1/3处，固定幼虫，另一针压住幼虫头部，压点尽可能靠头部口器处。 将解剖针平稳前移，使头部与身体拉开，口器部分断开，体内各器官从切口挤出，一对唾腺也随之而出。,唾腺,脂肪体,解剖针,解剖针,3、腺体解离：,剥离脂肪体及其他杂物，分离出纯净的唾腺 ，用吸水纸小心吸去生理盐水。 加1滴1N HCl，浸23分钟，使组织疏松，以便压片时细胞分散，染色体散开。,4、染色：,用吸水纸吸去盐酸，加1滴蒸馏水轻轻冲洗后吸干，重复34次，洗净残留的盐酸。 加2滴石炭酸品红染液，染色1020分钟（此过程应保持腺体一直处于染液的浸泡中）。,5、压片：,换上新鲜染液
4、或45%醋酸，取盖玻片和双面刀片，双面刀片放于盖玻片和载玻片间，吸去多余染液，进行压片。 在盖玻片上用解剖针柄轻轻敲压，将染色体完全压散。 将刀片取出，再用中指轻轻压片，使细胞充分分散。,6、观察：,将制片置低倍镜下找到分散好的标本，移至视野中心，然后转到高倍镜下观察。 对分散良好、染色体臂充分伸展的片子，应仔细观察染色体的横纹数量、形状和排列顺序，对照模式照片辨认出不同的染色体臂。,六 、注意事项 1. 一定加生理盐水，否则唾腺易干。 2. 将脂肪组织清除干净。 3. 水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃。 4. 染色时间不可过长，否则背景也着色。 5. 压片时要揉，用力要均匀。 6. 染色完后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片。 7. 吸水时勿将唾腺一起吸走。,七、作业及思考题,1. 绘制在显微镜下所看到的果蝇唾腺巨染色体示意图，标明实际标本在观察中所能分辨的典型部位。 2. 每人制1张染色体分散、横纹清晰的临时片。 3. 什么是染色中心（chromocenter）? 4. 根据你所学的知识，联会（synapsis）应出现在什么类型的细胞中？ 5. 利用巨大染色体可以进行哪些遗传学研究？,
