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1、,中药显微鉴定,第二部分 显微描绘与摄影,1、显微测量,在进行显微观察时，有时需测定微细结构的大小，如长度、宽度（直径）等，作为显微鉴定的依据之一。因显微结构一般均很小，通常用微米（m）作为测量单位，超过1000m，则可以用毫米为单位。进行显微测量必须用专门的量尺即：目镜量尺(目镜测微尺)和载台量尺(载台测微尺) 。,1.1 目镜量尺与载台量尺,目镜量尺：是放在目镜内的一标尺，为一块圆形的玻璃片直径1822mm，上面刻有直线，中央亦有精细的刻度，通常长为5mm，精确等分为50或100小格。 载台量尺：是一种特制的玻片中央有一个刻度的标尺，全长为1mm，精确等分为100 小格，每小格长0.01m
2、m ，即10m。,1.2 目镜量尺的标化,目镜量尺中每一小格的长度，是随显微镜的镜筒长度、目镜与物镜的放大倍数的改变而变化的。因此，必须标化目镜量尺每一小格相当的长度；即一台显微镜在不同目镜与物镜组合下，每一格的长度。,具体方法是：使两种量尺的刻度平行，左边的“0”刻度对齐，再找出第二条重合刻度。如图：在10X物镜下目镜量尺的100小格(0100)与载台量尺的43小格 (043)的长度相等，则目镜量尺的每一小格为：4.3m 。（10m431004.3m） 同样的方法可以标化出各种放大倍数下目镜量尺每小格的长度。,1.3 用显微量尺测量的方法,将欲测定物体的标本片放在载物台上，用目镜量尺测量目的
3、物的小格数，乘以标化出的目镜量尺在该组合下每小格相当的微米数即得。 测量实物时，通常使用高倍物镜。当测量一个物体时，要分别测量其最小值与最大值，得出该物体的长度范围。每个测量值应取1520个数的平均值。,显微组织简图常用代表符号图,3.1 仪器与设备显微镜，显微镜摄影仪（照相机、数码摄像头CCD等）,3、显微摄影,要获得好的显微图像，用好显微镜是关键。显微镜分辨能力的高低取决于显微镜光学系统中物镜与聚光镜的性能，而物镜与聚光镜的性能又取决于两者的数值孔径(NA)。 数值孔径与显微镜的各种性能有密切的关系，其与显微镜的分辨力成正比，与焦深成反比；即数值孔径越大，分辨力越大，焦深就越小，则反之。
4、正确调节使用显微镜视场光阑与孔径光阑（聚光镜的数值孔径是通过孔径光阑调节）的是获得高清晰图像的关键所在。,3.2 正确使用显微镜-获取最佳图像,1.视场光阑的调节 视场光阑位于镜座之中,其作用：(1)控制照明光束的大小，根据物镜的倍率给予不同直径的光束面积,使所观察的视域能受到均匀的照明。 (2)控制杂散光在成像光路系统中的影响，特别是免除杂散光对照相系统的干扰，在显微摄影时起着增减影象反差的作用。,视场光阑位于镜座前端的主光轴上,在视野中可见视场光阑经聚光镜所形成的多边形状,聚光镜的重要参数之一是数值孔径(NA)，控制聚光镜的数值孔径是通过调节聚光镜的孔径光阑（即一个可变光圈）来实现的。 数
5、值孔径的作用：影响显微镜的分辨率，控制显微图像的反差和景深。 通过调整孔径光阑，使聚光镜的数值孔径等于物镜数值孔径的三分之二时，显微镜的分辨率最佳。,2.聚光镜系统(孔径光阑)的调节聚光镜系统:包括聚光镜主体、前端透镜及孔径光阑。,通常聚光镜的 NA=0.32 前端透镜的 NA=0.631.4 显微镜物镜 4X NA=0.1010X NA=0.2540X NA=0.65100X NA=1.25,更不应该用调节聚光镜位置高低的方法来调节视野中的亮度！,不应该用聚光镜的孔径光阑来调节视野中的亮度！,显微摄影 传统的显微摄影是指用胶片照相机进行显微摄影的方法。是将显微镜下观察到的图像用显微照相设备摄
6、录下来的一项技术。 显微摄影装置 显微镜、照相（摄影）机系统、曝光控制装置三部分。,3.3 传统的显微摄影技术,显微摄影步骤 1.安装显微摄影装置 将相机，显微镜和照明设备连一起，并能在观察镜中看到所要拍摄的标本。 2.调整好显微镜 聚光器和光源灯的调中，孔径光阑和视场光阑的调节。 3.底片选择 彩色底片、黑白底片，正片或负片，底片感光度的选择 4.曝光的确定 经验法，试摄法，测光表法。 5.取景对焦和拍摄 屈光度的调节，取景，聚焦拍摄 6.冲洗、放大 冲洗底片，洗印放大照片在此过程中，显微镜的正确使用、取景聚焦、曝光控制及冲洗放大是获得优质图像的关键。,3.3 传统的显微摄影技术,显微镜数码
7、照相技术是与数码相机的工作原理是一致的，只是将CCD（charge couple device 电荷藕合器）直接安装在显微镜上。显微镜上方的CCD将显微镜下看到的图像(光信号)，转变为数字信号输出，通过相关的图像采集软件直接显示在计算机显示器上，使显微镜中观察的图像即时生成，方便存储、编辑，较之传统的显微摄影具有明显的优势。,3.4 数码显微摄影介绍,数码显微摄影的优势：,显微图像分辨率高，拍摄的显微图像清晰。(OLYMPUS-DP50 显微照相系统 580万像素；DP70达1250万像素) 显微镜下的图像实现同步显示，快速聚焦、快速拍摄。 显微图像色彩真实，原物原色显示在屏幕上。 显微图像可
8、即时以数字形式保存、编辑。 获得的显微图像还可利用图像分析软件进行定性、定量分析。,3.5 在数码显微摄影中几个重要参数,白平衡(White Balance) 白平衡是与图像色彩相关的一个重要概念。在不同光源下，因色温不同，拍摄出来的相片会偏色。如以钨丝灯（电灯泡）照明的环境拍出的照片可能偏黄。基于CCD工作原理，必须通过白平衡的修正，调整图像中红绿蓝三色的强度，修正外部光线所造成的误差，使图像中最大光位达到纯白，以得到色彩准确的图像。 分辨率(resolution) 分辨率是与图像质量相关的一个重要概念，是衡量图像细节表现力的技术参数，它以图像横向和纵向点的总数量来衡量图像的细节，这些点我们
9、称之为像素(pixel)。现在数码相机的分辨率指标中常常给出多个分辨率，例如640X480(30万)，1024X768(80万)等。,色阶(levels) 在数字图像中，颜色的总数称“色域” ，色域中每一个具体值叫色阶。红(R)、绿(G)、蓝(B)中基色从0255分成256个等级即色阶，色阶其实就是色彩的层次感，也可以理解为颜色的浓淡，对于数字图像的质量评价，色阶的丰富与分辨率同样重要。,Bit(位) 色彩位数又称色彩深度，数码摄像头的色彩深度指标反映了摄像头能正确记录色调有多少，色彩位数的值越高，就越可能更真实地还原图像亮部及暗部的细节。目前数码摄像头的色彩位数都达到了3824位(25625
10、6256 共计1.67 亿种颜色)，即可以生成真彩色的图像。总之色彩位数是反映数码相机的色彩分辨能力，色彩深度值越高，就越能真实地还原色彩。,图像储存格式 常用的图像储存格式有jpeg、tiff、gif、bmp,Jpeg (Joint Photographic Experts Group联合图片专家组)格式 Jpeg格式的图像质量可以选择，从112，数值越大，图像质量越好，文件也就越大；数值越小图像被压缩越多，那么图像色彩就损失越多。另在格式选项中，如果要优化色彩质量就要选择基线已优化项。,Tiff (Tagged image file format) 是一种比较灵活的图像格式。Tiff 文件
11、几乎未经压缩或压缩很小，所以图像会比jpeg保持的更完整。Tiff文件格式的优点是支持256色、24位真彩色、32位色、48位色等多种色彩位，支持多平台操作使用。,Gif(Graphic Interchange Format 图形交换模式)图像格式，也是计算机图像常用的格式之一。Gif 不是侧重于图像的高压缩率，而是在不破坏图像质量的前提下压缩并还原(Gif图像具有可逆性)。Gif图像的缺点是只能表示256色。多用于网络传输。,BMP(Bitmap-File) 图形文件是Windows操作系统中的标准图像文件格式，是最简单的图像格式。在Windows 环境下运行的所有图像处理软件都支持BMP格
12、式。这种格式的特点是包含的图像信息较丰富，几乎不压缩，由此导致了它与生俱生来的缺点-占用磁盘空间过大。,以Olympus 显微数字照相 DP50 为例介绍,3.6 数码显微摄影操作,DP50 具有高分辨率和高灵敏性，使用150万像素的CCD，可获得相当于580万像素的极精确的数字图像。在数据方面，通过最先进的色彩数字转换程序，其图像是35mm照相机分辨率的4倍。有效记录像素则根据使用者的需要可选择2,7762,074，13921040和640480分辨率。DP50不仅在色彩方面而且甚至是荧光样品都保证获得卓越的彩色图像。,1. 打开取景器 2. 调整显微镜的光路到摄影的光路 3. 开始预览（打
13、开预览开关按钮，图中）,Olympus显微数字照相 DP50操作步骤：,4. 设置拍摄影像的模式 A. 选择常光模式或荧光模式（图中）B. 选择自动模式或手动模式（图中）C. 选择拍摄影像的大小（图中）,5. 设置成像范围，选择光点曝光表(spot meter) 的大小（图中）,6. 调整样本的取景范围及焦距 7. 移动光点曝光表到样本上测光(图中)， 调节曝光值（图中） （该软件的曝光值设置范围1/10000S60S）,8. 调节白平衡White balance (WB)，如果需要调节黑平衡Black balance (BB)，调节黑平衡，应在关闭光圈的情况下进行(图中）,Olympus显微
14、数字照相 DP50操作步骤：,9. 拍摄，图按下按钮，图像拍摄完成 10. 检查所拍摄图像的质量 11. 保存图像（tiff格式）,在数码显微摄影中应注意的问题：,1、设定白平衡根据拍摄对象，预先校正白平衡，防止所拍摄图像出现偏色。 2、选择曝光时间手动曝光时，通常选用曝光时间在1/240S1/30S之间。 3、选择曝光模式常用的曝光模式有：Fine/Quick; 手动/自动。Fine模式下能得到质量优良的图像，但在观察活体标本时则优先选择 Quick模式，此时，快速捕捉模式得到的图像质量会更好。 4、选择图像大小一般的软件均有可供选择的图像大小：640480，1024768，12801024
15、，22501800等等；分辨率大则图像所占空间就大，则反之。 5、捕捉与保存图像选择质量好的图像及时捕捉，保存图像要对文件名指定文件格式、保存路径等。,3.7 数码显微图像的处理技术（了解Photoshop软件功能）,Photoshop图像处理软件功能强大，实用而有效，是处理、编辑图像最常用的软件。经显微镜采集的图像一般需进行处理，如对图像进行裁剪、编辑、添加文字符号等等，使之符合我们编写鉴定报告、发表科学论文的要求。,Photoshop工作区,Photoshop主要功能使用,一、图像的调整：1. 图像大小的调整 2. 画面的旋转 3. 画布大小的调整4. 画面的剪裁 二、图像色彩调整（在色彩
16、调整前必须保证显示器的颜色准确）1.色阶调整（可以重新安排画面色彩亮度水平分布）2.曲线工具（利用“曲线”可以在图像的整个色调范围内最多调整14个不同的点）3.色相/饱和度的调整4.亮度/对比度的调整5.色彩平衡调整,Photoshop主要功能使用,三、图像素材的取舍：1. 使用选择菜单 2. 利用套绳工具进行选择（套绳、多边套绳、磁性套绳） 3. 利用魔术棒进行选择 四、图像的修饰1.利用仿制图章工具2.利用修复画笔工具3.利用涂抹工具 五、添加文字,六、电子图版的制作,1、电子图版的格式：国内的期刊要求提供TIFF格式的图版国外的期刊要求提供TIFF或EPS格式的图版 2、图版尺寸：图版的大小与期刊版面有关，16开版面(185mm260mm)，图版尺寸为15cm21cm；大16开版面(210mm285mm)，图版尺寸为17cm22cm。 3、分辨率：用于出版的图片其分辨率必须达到每英寸300个像素或更高。 4、图片的选择：对于显微图像，应选择代表性强、特征明显，图像清晰的图片；一般同品种编辑到同一图版中。在图版布置上，主要特征应放在图版的上方与中间位置，次要特征则放在偏图版下方的位置。,
