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1、第二次实验课,内 容,1.细菌培养法（录象） 2.基础培养基制备（讲解示教） 3. 细菌接种法（一份/组）讲解 4.人体、物品中细菌检查（一份/组）讲解 5.飞沫、空气中细菌检查（一份/桌）讲解 6.观察细菌代谢产物（讲解） 7. 第一次实验报告评讲,基础培养基的制备,去筋膜黄牛肉绞碎500g加入1000ml蒸馏水,直接煮沸2小时,脱脂纱布过滤，按比例加入1蛋白胨、0.5% NaCl，0.1%K2HPO4加热溶解补足水至1000ml,4浸泡过夜煮沸半小时,人体、物品中细菌检查,材料：普通平板 （1份/组）,盖上，标记 , 置 37，18-24h后观察。,飞沫、空气中细菌检查,材料：血平板 （1
2、份/组）,距口1520cm 用力咳嗽三次,置空气中 （避日光照射） 30分钟,飞 沫,空 气,盖上，标记 , 置 37，18-24h后观察。,结果观察血平板,表皮葡萄球菌在血琼脂平板培养基上形成不溶血的菌落。,甲型溶血性链球菌形成的溶血现象也称为甲型溶血现象或草绿色溶血现象，属于不完全溶血。,金黄色葡萄球菌形成的溶血现象也称为乙型溶血现象，属于完全溶血。,细菌培养接种法平板划线法,菌种：混合菌液 材料：普通平板 用具：接种环 方法：分区划线,1区,2区,3区,4区,原始区域,细菌培养接种法-斜面接种、液体接种、半固体,菌种：大肠杆菌或葡萄球菌斜面 材料：斜面、液体、半固体培养基 用具：接种环、
3、接种针,结果观察普通平板,普通琼脂平板培养基上，大肠埃希菌形成菌苔和菌落生长现象。 注意：大小、颜色、透明度、凸起度、表面干燥或湿润、光滑或粗糙、边缘是否整齐及血平板上的溶血情况。,结果观察液体培养基,结果观察斜面培养基,琼脂斜面培养基上大肠埃希菌形成的菌苔生长现象,菌苔（mossy） 指细菌生长繁殖后，在培养基 表面形成的一层培养物,结果观察半固体培养基,1、 扩散生长：具有动力的细菌,可见培养物扩散和培养基变混浊。 即有鞭毛的细菌：由穿刺线向外扩散生长（羽毛状或云雾状）2、原位生长：没有动力的细菌，可见培养物没有扩散，培养基仍然澄清。 即无鞭毛的细菌： 沿穿刺线生长,2 1,1 2,细菌代
4、谢产物观察,细菌的酶不一样，对营养物质的分解能力不一样， 产生的代谢产物也不一样。常见： 糖发酵试验 吲哚（indol）试验 甲基红（methyl red）实验 VP（Voges-Proskauer）试验 枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验 尿素酶试验 硫化氢试验,糖发酵试验,不同细菌分解糖类的能力和代谢产物不同。,甲基红（methyl red）实验,M - 甲基红（methyl red）实验 葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 甲基红 - 葡萄糖丙酮酸 甲基红 +,吲哚（indol）试验,I-吲哚（indol）试验色氨酸吲哚玫瑰吲哚对二甲基氨基苯甲醛,枸橼酸盐利用试验,C -枸
5、橼酸盐利用（citrate utilization）试验,利用枸橼酸盐生长 +不能利用 -,硫化氢试验,硫化氢试验（醋酸铅培养基）某些细菌分解含硫氨基酸，生成H2S，H2S遇铁盐（如硫化亚铁、醋酸铅等），则形成黑褐色硫化铁（铅）沉淀物，而呈黑色为（）。,尿素酶试验,产生氨使培养基变碱， 指示剂显红色，为阳性。 如：变形杆菌为阳性。,IMViC试验 I - 吲哚（indol）试验 M - 甲基红（methyl red）试验 V - VP（Voges-Proskauer）试验 C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验,IMViC试验,I M Vi C试验大肠埃希菌 + + - - 产气杆菌 - - + +,IMViC试验： 是吲哚、甲基红、V-P以及枸橼酸盐利用试验四者的合称。常用于肠道杆菌的鉴定。,实验小结,1、三类培养基 液体培养基用于增菌；均匀混浊、沉淀、表面生长半固体培养基观察动力；保存菌种（6个 月）；穿刺线，扩散生长固体培养基分离纯化；保存菌种（1个月）菌落、菌苔2、IMViC试验,第三次实验课内容,1、热力对细菌和芽胞的杀菌作用 2、紫外线的杀菌作用 3、常用化学消毒剂的杀菌作用和抗生素敏感试验 4、耐药性变异； 5、细菌的鞭毛变异； 6、高压灭菌器的使用； 7、细菌的鉴定程序； 8、全自动微生物分析仪的基本原理及简单操作步骤,
