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1、基因工程概念基因工程是指按照人们的意愿,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,贿予生物以新的速传特性,从而创造出更彼合人们需要的新的生物类型希生物产品、由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫做DNA重始技术定向改造生物啦!基因工程相关要点1、基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术2、基本工具:“分子手术刀“限制性核酸内切酶“分子缝合针“DNA连接酶基因进入受体绍胆吊戟体;运载伟0基本操作步骤、目的基因的获取2基因表达载体的构建(核心)3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定基因工程的别名|圭固拷蒙苏本或DNA量组芸本操作环境生牢体外操作对象基回操
2、作水干|DNA介二水平基本过程|剪切一拼接一导入一表达实质基回重组新生物类型、生物产品重难点剖析:壁因工程的“专用工具“1.限制性核酸内切酶“黏性未端一llEcoRI3来源:主要从原核缝腰j作用:一种限制性内切酶只能识别双链DNA分子的桦种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开(切割DNA分士)作用结果:形成平未端(SmaI及黏性未端(EcoRI)2.DNA连接酶一一“分子缝合针“0、种类:E.coliDNA连接酶(黏性未端)T4DNA连接酶黏性未端和平未端DNA连接酶可把平未端或黏性末端之间的缝隙“缝合“起来,即相当于把梯子两边的扶手的断口连接起来,这样一
3、个重组DNA分子就形成了。3.分子运载车一一运载体(1)作用:将目的基因送入受体细胞(2)具备的条件:a.能自我复制.b.具有一个或多个酶切位点。cC.有标记基因.口对受体组胞元孛.(3)种类:质粒、噬萧体、动植物病毒质粕一一细菌拟核DNA之外结构简单、能自主复制的很小的环状DNA分子。小结主要存在于原核生物中01切开DNA分孔的磷酸二酸镳基本操作步骤(一)目的基因的提取目的基因:主要是指_编码蛋白质的结构基囤获取方法:1、_从基因文库中获取目的基因2、人工合成法:化学方法合成DNA片段(反转录法、直接合成法)3、PCR反应扩增DNA原理:DNA复制过程:加热DNA解链“冷却引物结合到互补DNA链互补链合成条价,耐高洞DNA联仕酶基因文库的构建:提取树种生物的全部DNA|树种生物的mRhA逆转紫用适当的限制酶切一定大小的NA片段将DNA片段卜载体连接导入受体菌中储存导入又体菌中储存(二)基因表达载体构建1、基因表达载体由_启动子、目的基氏终止子、标记基冈四部分组成。2、启动子作用:RNA聚合酶识别和结合的位点,肢动转录的“开关“。3、标记基困的作用格白动鉴别受体细胞中是否含有g,目的基因,从普通细胞灿中筛选出含目的基因的受-1本乡田月包图1-10表达戡体榛式畜
