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1、血小板抗原抗体检测及临床应用 (血液病科篇),吉林芬瑞生物制品销售有限公司 苏 凯,目 录 / contents,血小板抗原,血小板抗体与疾病,血小板抗体检测的临床意义和临床应用,04,临床治疗方案参考,血小板简介,血小板：D:2-5umV:红细胞*1/5 功能：促进止血和加速凝血 正常范围：100-300109/L,骨髓干细胞,胞质块脱落,来源：,多功能祖细胞,巨核祖细胞,幼巨核细胞,巨核细胞,血小板,血小板形态,静息状态,活化状态,血小板抗原,血小板“非特异性”抗原,血小板“特异性”抗原 HPA抗原,HLA-类抗原ABH抗原,血小板具有HLA-类抗原（HLA-A、HLA-B抗原和少量HLA
2、-C抗原），无HLA-类抗原。故输注血小板要比器官移植所需配型简单。 血小板个体间HLA-类抗原位点数差别不大。 每个血小板上至少有20000个HLA抗原位点。,HLA抗原,部分为血小板的固有蛋白，另一部分从血浆中吸附。 血小板上的ABH抗原个体之间表达不同，约5%的非O型个体为A抗原或B抗原的高表达者。 故血小板输血应同型输注；抗体检测应采用O型血小板，以排除ABO系统抗体的干扰。 GPIb、GPIIb/IIIa、 GPIa/Iia、CD109等也携带少量ABH抗原,ABH抗原,主要存在于血小板膜的GP分子上，也少量存在于血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细胞。 1990年国际输血协会血小板
3、免疫学工作组提出了HPA命名，以发现的时间顺序排列：HPA-1、HPA-2、HPA-3等系统。,HPA抗原,已确定了33个HPA，其中12 个抗原为双等位基因表达（HPA-1,-2,-3,-4，-5和-15）。其中高频率抗原命名a，低频率抗原命名b。其余21个抗原为低频率抗原，尚未发现对偶抗原，命名为bw。单核苷酸多态性（SNP）:33个HPA中均已搞清楚基因背景，其中32个HPA的多态性型是由一个氨基酸置换所致，而这又是由编码血小板膜糖蛋白（GP）基因的一个核苷酸的不同所致。HPA-14bw不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发生在 AAG1929-31。,HPA抗原,HPA抗原,HPA抗原,
4、血小板抗原定型,血清学定型 即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原 缺点：特异性抗体来源困难-人血清中血小板抗体通常为多特异性-单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单抗， 无其它HPA单抗。基因定型 限制性片段长度多态性分析（RFLP） 序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO) 序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP),用途： （1）健康人群HPA基因分型，建立已知HPA基因型的血小板献血员库。 （2）检测受者HPA基因型，以便从血小板献血员库中寻找与其HPA基因型相匹配的血小板供者。 （3）检测患者HPA基因型，辅助临床胎儿/新生儿免疫性血小板减少症、输血后紫癜及血小板输注无
5、效症等疾病的病因诊断。 （4）对特定区域或种族人群HPA基因分型，可为人类遗传学研究提供相关资料和证据。,血小板抗原定型,血小板抗体的产生方式,以上途径产生的血小板同种抗体与血小板上的相应抗原结合，导致血小板被内皮网状系统清除。,移植（骨髓、器官）,输血小板、红细胞（尤其是没有滤白的红细胞）,血小板抗体与部分相关疾病,血小板抗体检测常用方法,方法,指标,血小板抗体检测方法-固相凝集法,血小板抗体筛检，包括HLA抗体、HPA抗体及其它血小板反应性抗体。辅助血小板相关免疫性疾病的诊断。 血小板交叉配型，为患者筛选相容性的血小板或血小板供者，避免血小板输注无效症的发生。 患者自身抗体检测，包括血小板
6、结合抗体和血清中游离抗体。检测血小板结合抗体可将患者血小板平铺在反应孔后，直接加入抗人IgG和指示红细胞进行检测。血清中的游离抗体可通过患者自身血小板和血清反应来检测。,用途：,血小板抗体检测方法-固相凝集法,1.预防血小板输注无效症的发生：通过对患者进行血小板抗体筛查和与血小板供者的交叉配型试验，筛选和患者血小板抗原配合性高的血小板供者，以提高血小板输注有效率，防止血小板输注无效症的发生。 2.自身免疫性疾病的辅助诊断：检测患者血清和血浆中自身血小板抗体的水平和特异性，可辅助诊断自身免疫性疾病如白血病、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合症、血小板减少症、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、特发性血小板减少性
7、紫癜等。,血小板抗体检测的临床意义,3.药物性抗体的检测：某些药物的存在如肝素、奎宁、奎尼丁、环磷酞胺、甲氨蝶呤、阿司匹林、水杨酸钠等，选择性的抑制了骨髓巨核细胞造血功能，使血小板的生成减少，同时应用某种药物后，产生药物相关抗体，药物抗体复合物附着血小板膜上与补体结合，使血小板聚集破坏，一些药物进入人体后也可直接破坏血小板，造成血小板破坏增多，从而引发血小板减少。,血小板抗体检测临床意义,预防血小板输注无效自身免疫性疾病的辅助诊断药物性抗体检测,血小板抗体检测临床应用,预防血小板输注无效,现状,1.很多地区成分血不滤白；,2.血小板盲输现象非常普遍；,血液病患者输血小板时进行配型的重要性！,预
8、防血小板输注无效,困惑,患者抗体阳性，没有配合的血小板怎么办！,预防血小板输注无效,反向推动血站配合临床供应配型相合的血小板,提前告知患者输注风险,针对患者个体状况采取针对性临床干预,血小板输注无效的危害,1）患者发生免疫反应，加重病情。2）患者病情得不到改善，病危甚至死亡。3）浪费财力、物力、宝贵的血小板资源。4）存在医疗纠纷隐患。5）不利于采供血机构和医疗机构业务水平的提高。,预防血小板输注无效,血小板抗体检测的应用：血小板输注无效的预防,血小板抗体检测的应用：血小板输注无效的预防,血小板输血采用随机供者血小板有效率不超过30%；采用交叉配型相容性血小板有效率为92%，而对于重度血小板免疫
9、患者，输注相容性血小板有效率为70%。,血小板交叉配型意义,预防血小板输注无效,对844例贫血、白血病、血小板减少及肿瘤等疾病患者进行血小板抗体检测。其中有效病例766例，其余78例患者病例不祥。检测结果统计如下：,临床数据：,预防血小板输注无效,海南省人民医院,共检测102例患者，阳性18例，平均阳性率17.6%,预防血小板输注无效,9例抗筛阳性患者，8例寻找到了相合的血小板，输注效果良好。,中华临床医师杂志 2012/01,预防血小板输注无效,57例血小板输注无效患者中，血小板抗体阳性患者为21例（37）,采用固相凝集法对有血小板抗体的21例患者进行输注前交叉配型来筛选血小板供者。选择交叉
10、配型阴性或反应最弱的的供者血小板给患者输注。21例患者输注相容性血小板后，所有患者1h CCI7.5109，24h CCI4.5109，有效率为100。,吉林大学第三医院,中国实验诊断学 2013年第1期,预防血小板输注无效,广州血液中心,95例血小板输注患者经固相凝集法检测，血小板抗体 阳性32例，抗体阳性率为33.7%。,将血小板抗体阳性患者随机分成未配型组和配型组，各16例。,广东医学院学报 2012/1,预防血小板输注无效,进行血小板抗体检测，可以辅助诊断血小板免疫性疾病，如ITP。,自身免疫性疾病的辅助诊断,一般认为，ITP的发病机制包括血小板自身抗体导致的血小板破坏和清除。,检测患
11、者血小板自身结合抗体，了解血小板是否在体内致敏，是血小板自身抗体导致ITP发生的直接证据,检测患者血小板自身游离抗体，了解血浆中的自身抗体是否能在体外与患者自身血小板结合，是血小板自身抗体导致ITP发生的间接证据,自身免疫性疾病的辅助诊断,血液病患者血小板抗体检测及其与血小板输注疗效的相关性研究 夏世勤 苏莉 刘秋洪 杨眉 安邦权 王茂玲 于慧芳 1贵州省人民医院输血科 ，2遵义医学院检验系，结论 血小板抗体的产生与血小板输注疗效密切相关，血小板抗体是直接影响血小板输注效果 的重要免疫因素之一 ；血液病患者的病因与血小板抗体的产生有一定相关性 ； 血小板抗体的产生与患者性别无关 ； 血小板输注
12、次数与血小板抗体产生密切相关： 血小板抗体的产生与输注的血小板种类有关，单采组明显低于浓缩组。医学检验 2013年8月第2O卷第22期,流式细胞技术检测血小板相关抗体在ITP诊断中的应用研究 吴国才，王珍(广东医学院附属医院 血液内科 ，广东 湛江 524001) 摘要 ：目的 探讨流式细胞技术检测血小板相关抗体在ITP诊断中的意义 。方法 选择2012年5月至2013年6月在我院血液科住院的3O例ITP患者为观察组,同期本院健康体检正常者3O例为对照组，采用流式细胞技术检测两组对象的外周血血小板相关抗体PAIg(PAIgG 、PAIgM 、PAIgA )水平 。结果FCM检测观察组患者血小板
13、抗体 ，PAIgG阳性率为7O,平均荧光强度为(25.154-2.61)，对照组平均荧光强度为 (5.09士0.54),两组比较有显著性差异(P 0.05)。结论 流式细胞仪检测血小板相关抗体 在ITP诊断中具有重要的临床意义中国实验诊断学 2O14年6月第18卷第 6 期,自身免疫性疾病的辅助诊断,许多药物会导致血小板减少，常见的有肝素、奎宁、奎尼丁等，均会诱导产生药物依赖性血小板抗体，从而产生血小板减少症。药物性抗体产生的机制尚不完全明了。目前认识的产生机制主要有：免疫复合物机制：药物与抗体结合形成免疫复合物，与血 小板上的Fc受体结合，介导血小板的破坏。半抗原机制：药物小分子与血小板膜蛋
14、白结合，形成新的 抗原，刺激免疫系统产生抗体，从而破坏血小板。,药物性抗体检测,血液科患者可能产生药物性抗体的用药： 抗生素类：头孢他啶、头孢曲松、磺胺类、万古霉素 镇痛剂：芬太尼、布洛芬、对乙酰氨基酚 消化系统用药：雷尼替丁、 心血管系统用药：ACEI、阻滞剂 抗肿瘤药：奥沙利铂,2. MF Leach. Detection of drug-dependent platelet antibodies by use of solid-phase red cell adherence assay. British Journal of haematology,1997,97, 755-761.,
15、1. Alan D. Michelson Platelets, Third Edition，Chapter 42,药物性抗体检测,怀疑患者因应用药物而导致血小板减少症时，应准备相应的药物。如果为液体剂型，可以直接使用。如果为固体剂型，需要将其破碎、溶解于蒸馏水中。对于免疫复合物机制，可以将药物直接加入待检标本中；对于半抗原机制，可将其加入0.5%缓冲液中。检测时加入药物的浓度，应参照相应药物的药代动力学数据，选用下列三个浓度：1.略低于谷浓度2.峰浓度3.峰浓度的5-10倍。,药物性抗体检测,对照标本与血小板,无药物性血小板减少症的健康人标本，作为本实验的对照标本。,4-6人份混合，O型血小板
16、。该血小板与待检血小板做配型实验，结果应为阴性。,药物性抗体检测,每一个标本使用三条试剂，一条用于免疫复合物机制，两条用于半抗原机制。,PC,NC,免疫复合物机制,半抗原机制,对 照 标 本,阳 性 对 照,阴 性 对 照,检 测 标 本,药物性抗体检测,操作步骤：免疫复合物机制,1. 将血小板包被在微孔板上，洗板3次 2. 加入两滴低离子强度溶液 3. 加入两滴已加入不同浓度药物的待检标本（同时加入不添加药物的待检标本作为对照） 4. 向阳性对照、阴性对照对照孔中分别加入试剂盒中的阳性 对照、阴性对照 5. 37气育45分钟 6. 洗板5次 7. 立即加入抗人IgG及指示红细胞，混匀 8. 离心，观察结果,药物性抗体检测,操作步骤：半抗原机制,1. 将血小板包被在微孔板上，洗板3次 2. 加入两滴低离子强度溶液 3. 加入三滴已加入不同浓度药物的BSA溶液 4. 37气育30分钟 5. 洗板3次 6. 向相应孔中加入两滴低离子强度溶液，待检标本、对照表本；阳性对照、阴性对照对照孔中分别加入试剂盒中的阳性对照、阴性对照（每种药物浓度均做阳性对照、 阴性对照） 7. 37气育45分钟 8. 洗板5次 9. 立即加入抗人IgG及指示红细胞，混匀 10. 离心，观察结果,
