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1、印一第三章凝胶分离技术。潘胶是一种高分子聚合物,不溶于水,但遇水溶胀,形成三维空间结构。用濡胶又称分子筛,对生物大分子物质具有筛分作“濡胶分离即是利用凝胶分子筛的筛分作用对物质进行分离的操作。够一一一一“优点:1l、濮胶为不带电荷的惰性物质,不与溶质分子发生任何作用,此分离条件温和,产物收率高,2、应用范目从几百刹数百万分子量的物质;重现性好;目广,所分离物质分子量覆盖面大,可分离3设备简单,操作方便,周期短,可反复使用。濡胶分离已成为一种通用的分离方法,在生物大分子物质(虾白质、酶、核酸、激素、多精等)的制备与生产技术中被广泛应用。印一第一节凝胶分离原理“一、凝胶分离原理当被分离物质的分子大
2、小不同时,能够进入到凝胶内部的能力也不同。凝胶中的孔隙大小与分子大小有相仿的数量级。当混合物通过凝胶时,比孔除小的分子可以自由进公懦腕内部,一比孔隔大的分子就不能进入,因此在移动速度方面就出现差异,从而使不同相对分子质量的各组分得到分离。Separationoftreeproteinsdifferinginsizebygel-fltrationchromatogra-Phys分离原理可用下式表示:Va=Vo+kVi式中:Va:保留体积(洗脱体积)Vo:柱床内存在于凝胶外面的水相体积一一外水体积Vi:源胺颗粒内部所吾的水相体积一一内水体积k:分配系数印一被分离物质分子很大,被完全排阻于凝胶颗粒之
3、外:k=0,VR=Vo;被分离物质分子很小,能完全自由进入凝胶颗粒内部:k=l,Va=Vo+Vi:。中等大小的分于,只能达到部分濮脑颗粒内部:0k1,V一V一V+Vi。够一一sVo、Vi的测定GDVo的测定被凝的洗GNVi测出黄色选用分子量约200万的蓝色葡聚糖-2000(或一种不胶滞留的有颜色的大分子物质,便于观察),测定它命曲线,洪脱峰峰顶洗出的体积就是该标的Vo值。的测定选用一种分子量小于凝胶工作范围下限的化合物,其洗脱体积,减去Vo就是该柱的Vi。常用铬酸钾()或有UV吸收的物质如N-乙酰酪氨酸乙酯来测定。“分配系数k的计算:k=CVVo5/Vi“分子量与洗脱体积的关系:lgMr=-KVa+Vo(成立?)Mr很大时,达到上限?Mr很小时,达到下限?图3-105证踏伟的分子基的系
