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1、临床微生物质量控制,湖南省肿瘤医院检验科,内 容,二、临床微生物的质量控制,三、标本采集、运送和显微镜检,四、细菌鉴定的基本步骤,五、细菌药物敏感试验,六、实验室质量保证和报告规范化,七、工作中常见的问题和解决方法,八、目标,一、临床微生物实验室的重要性,一、临床微生物实验室的重要性,微生物实验室在临床中的地位： 及时、准确地作出病原学诊断和抗菌素敏感试验，为临床制订抗感染治疗方案提供依据 监测和分析细菌耐药性的变迁和某些重点的耐药细菌 提供目标用药依据或纠正经验用药的依据 参与医院感控监测并定期发布医院细菌耐药率和耐药趋势,一、临床微生物实验室的重要性,人类面临着微生物的挑战，要打赢这场战争
2、不仅需要有经验的医生，还需要一支优秀的临床微生物检验队伍。 与过去的10年或20年相比，临床微生物实验室的规模和发展速度已经发生了巨大的变化。目前，我们离CLSI(临床实验室标准化研究所)标准化文件要求还相差很远，我们应进行规范操作，才可能应对微生物向人类的挑战，才能适应临床的需要。 临床微生物检验，在感染性疾病及相关病患的诊断治疗预防及研究工作中起着越来越重要的作用，为了保障检验结果的准确性和可靠性，日常工作中要注意开展质量控制。,为了保证检验结果准确无误，应对室间质评和室内质控实行全面质量管理。,临床微生物检验,是对人体的各种物质进行微生物学检验，整个检验过程包括病人样品的采集、运送、处理
3、，样品中致病微生物的分离、培养、鉴定，药物敏感试验，出具检验报告。,其质量控制环节多、涉及的知识面广、复杂性高、需要超强的责任心。,二、临床微生物的质量控制,临床微生物检验质量控制的有关概念,为了保证质量控制，首先应了解以下有关概念： 细菌检验的质量：结果真实显示标本中存在的病原菌及其生化特征和抗药性 细菌检验的质量控制：制定细菌检验的质量水平，并采取监测手段，这一过程称为细菌检验的质量控制。 质量保证：为达到应有的质量水平而采取的措施。 质量评价：用一个客观的公认的标准来评定一个实验室或实验室中某项试验是否达到标准的过程。,二、临床微生物的质量控制,室间质量控制：是各地实验室之间进行质量控制
4、的一种方式，也是上一级实验室对各实验室进行质量管理的手段。参加由省临床检验中心或卫生部临床检验中心组织的室间质控，会遇见一些平时罕见或未见过的菌株，通过质控检验对它们的生长条件、菌落形态、染色、镜下形态等有了较深的感性认识。日后工作中倘若再遇见这些菌将不再会漏检。,二、临床微生物的质量控制,室内质量控制：做好室内质控直接关系到日常检验工作的质量。室内质控主要包括几个方面：实验室前的质量控制、标本接种前的质量控制、培养基的质量控制、试剂质量控制、常用仪器的质量控制、药敏实验的质量控制、及发报告前的质量控制。,二、临床微生物的质量控制,临床微生物实验室质量管理目标 临床微生物实验室室是为临床诊断与
5、治疗提供有否感染病原菌以及药物敏感实验依据的检查科室之一。 临床微生物实验室室的工作是面向全院临床医生与患者。其工作目的是一切为了患者，服务于患者；一切为了临床，服务于临床；急其所急，想其所想，检验报告及时、准确。 根据循证医学的观点，不断进行实验方法学的研究与改进，临床价值探讨，经济学评估，优选出最直接、最有效、最准确、最经济的实验或实验组合，用于临床。,二、临床微生物的质量控制,不断加强实验室与临床的信息交流与学术探讨，直接参与临床诊断治疗，促进检验医学的发展。 本室所进行的试验方法、量值可溯源，不准确度限制在国内有关部分标准。力争达到国家规定的质量控制标准. 仪器设备完好率85%。 参加
6、国际、国内室间质评，其总成绩“优秀”应为90，“良好”小于10。 对患者热情，服务周到，使全科平均满意率为95以上。 检查差错发生率应小于0.4。,二、临床微生物的质量控制,临床微生物实验室的基本装备,光学显微镜,孵育箱、烛缸、高压锅,生物安全柜或安全罩,试剂、染液、质控菌株、培养基,冰箱、酒精灯、接种环、尺、温度计等,二、临床微生物的质量控制,临床微生物室的制度 生物安全防护制度 三级报告制度：涂片；初步药敏和确切涂片；正式鉴定和药敏 传染病原报告制度 菌毒株保存制度 废弃物处理制度 质量控制制度,二、临床微生物的质量控制,室间质评,是在建立实施室内质控体系的基础上，我们收到质控物后认真检查
7、核对，如有破损、缺失、标本编号错误等要及时向科室反映，以便及时与部临检或省临检中心联系，及时补寄。,由卫生部临床检验中心或省临床检验中心组织，如实地反映实验室的真实工作状况和水平，是临床实验室全面质量管理重要组成部分，也是实验室认可的重要依据。,二、临床微生物的质量控制,需仔细阅读室间质评的通知和要求，由室负责人将质评样本保存在28冰箱，妥善保管好报表和项目编码。,室间质评样本的检测操作程序 1. 测试环境、仪器、试剂的要求 室温：2025 湿度：95典型菌株，并经多次传代，特征衡定的菌株,质控菌株,参考菌株,临床分离菌,二、临床微生物的质量控制,质控必备菌株细菌名称 菌号 用途金黄色葡萄球菌
8、 ATCC 25923 纸片扩散质控金黄色葡萄球菌 ATCC 29213 MIC测定质控大肠杆菌 ATCC 25922 纸片和MIC绿脓假单胞菌 ATCC 27853 纸片和MIC粪肠球菌 ATCC 29212 胸腺嘧啶含量测定淋病奈瑟菌 ATCC 49226 淋球菌药敏流感嗜血杆菌 ATCC 49247 嗜血杆菌药敏肺炎克雷伯菌 ATCC 700603 ESBL阳性菌,二、临床微生物的质量控制,低温速冻 苛养细菌,冷冻干燥 长期保留菌株,参考菌株保存方法,高层琼脂 非苛养菌,二、临床微生物的质量控制,琼脂斜面 现用菌株,常规试验的质量控制-天天做 触酶试验：3H2O2每三天更换一次 血浆凝固
9、酶试验：人血浆或商品乳胶试剂 氧化酶试验：1盐酸四甲基对苯胺水溶液浸泡厚滤纸，室温吹干压成小纸片，置含干燥剂容器20保存，或买商品制剂 内酰胺酶：头孢硝噻吩(Nitrocefin)为底物，适于测试嗜血杆菌、淋球菌、卡他莫拉菌、肠球菌 革兰染色：革兰阳性菌染成红色；革兰阴性菌染成紫色；另涂片厚度、染色和脱色时间、染料沉渣等也影响染色质量,二、临床微生物的质量控制,培养基的质量控制 一般性状：外观：透明、清亮、无混浊、无沉淀，颜色符合要求，表面湿润但无水汽、平整、光洁无凹坑和气泡。整块平板厚薄均匀。厚度：一般厚度在3mm，但MH平板厚度4mm。斜面的长度试管长度的2/3。pH是细菌生长的重要条件之
10、一，合格培养基的pH应在规定值上下0.2的范围内。 无菌试验：新制备或新买的培养基在使用前要随机抽取一定数量的样品作无菌试验。 购买的培养基要有质量保证如合格证明等文件；若无质量保证需检测相应的性能。,三、标本采集、运输和显微镜检,培养基的质量控制 细菌生长试验：所有的培养基在使用前还必须做细菌生长试验以测定培养基性能是否符合要求。标准菌株分2种：一种是已知的可在某种培养基上生长并产生典型生物学性状的，对培养基中的某种物质产生阳性反应的菌株；另一种是用已知的不能在某种培养基上生长或对培养基中的某种物质产生阴性生化反应的菌株。如血琼脂平板：乙型溶血性链球菌生长， 溶血；甲型链球菌，a溶血；巧克力
11、琼脂平板：流感嗜血杆菌生长良好；中国蓝琼脂平板和SS琼脂平板：革兰阴性菌生长，革兰阳性菌不生长。,二、临床微生物的质量控制,试剂质控临床微生物实验室常用的试剂包括染色液、诊断血清以及各种生化反应试剂等。 染色液及染色方法质量控制：购买的或配置的染色液，每次需做好相关的记录，如操作者和开瓶日期等；还要进行染色步骤质控，如革兰染色在一张玻片上同时涂有金葡菌和大肠杆菌，以保证染色性判断准确无误。 常用生化试剂的质控：随着细菌鉴定仪和快速微量生化鉴定板条的普及，临床微生物检验常用的生化试剂种类日趋减少，应注意在用试剂在贮存时的避光、冷藏等要求，保证试剂的稳定性。不要使用过期的试剂。 诊断血清的质控：诊
12、断血清是一种重要的细菌鉴定试剂，应从有资质的生产单位购买。验收时必须看清生产批号、血清效价、透明度与色泽。试验中应注意无菌操作，避免细菌污染。要经常检查贮存在4冰箱中的各种血清，若发现混浊，出现絮状，应停止使用。为保证血清凝集反应结果准确，应每3个月对血清进行一次质控。不要使用过期的血清。,二、临床微生物的质量控制,纸片药敏试验的室内质控 基础质控：连续做30天，如失控超过3次还需继续，如失控低于3次可改为每周1次 纠控：每周质控中发生失控应纠控，方法：连续5天，每天1次，每次重复5个纸片，如找到明确失控原因，可立即改为每周1次，否者继续 4冰箱保存一周的用量 药物敏感试验是临床微生物检验的重要步骤之一，其结果正确与否涉及治疗效果的好坏。,二、临床微生物的质量控制,仪器的质量控制 按仪器说明规定用标准菌株定期对不同批号的试剂进行质控 国产试剂应采用自动或半自动标准化的系统，如ATB、VITEK 等进行标定 包括对冰箱、二氧化碳孵箱、普通孵箱、水浴箱等基本设备的每日温度、气体浓度的监控记录；显微镜、细菌鉴定仪等仪器的使用、保养、维修记录。以保障实验室各种设备、仪器的正常运转。,二、临床微生物的质量控制,1,2,分析前： 标本采集、运送,分析中： 细菌鉴定和药敏试验,
