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1、单元3食用菌制种技术,教学重点：制种条件、培养基类型及配方，菌种类型、接种、培养、保藏等。 教学目标：掌握食用菌一级种、二级种和三级种制种技术。,第一节 菌种概述 第二节 菌种生产设备 第三节 菌种培养基 第四节 接种 第五节 菌种培养与质量鉴定 第六节 菌种保藏与复壮,一、菌种概念 二、菌种类型 三、菌种生产程序,一、菌种概念,（一）级别不同的菌种,1.一级种（母种）,概况,2.二级种（原种）,3.三级种（栽培种）,不可再扩,生产总过程,（二）状态不同的菌种,三、菌种生产程序,一、制培养基设备 二、灭菌设备 三、接种设备 四、培养设备 五、保藏设备 六、菌种厂布局,一、制培养基设备 （一）原
2、料处理设备,切片粉碎两用机,拌料机,装袋机,（二）培养基分装设备,装瓶机,挖瓶机,菌种袋,颈圈,菌种瓶,二、灭菌设备,常压,三、接种设备 （一）接种环境,观察窗,紫外灯,操作孔,接种箱,2.接种室,返回本节,使一定工作区达到相对无菌、无尘状态的电器,3.超净工作台,要求:前端为导热性好的金属材料,4.接种工具,固 体 菌 种 接 种 枪,液体菌种接种枪,四、菌种培养设备,1.培养箱 培养少量菌种的恒温电器（2040）,2.培养室 培养大量菌种的恒温房,五、菌种保藏设备 保藏母种：冰箱（4）左右,六、菌种厂的布局 根据菌种生产流程合理设置,一、概述 （一）概念及要求 （二）培养基的类型 二、各级
3、菌种的培养基 （一）母种培养基 （二)原种、栽培种培养基 三、培养基的灭菌,一、培养基的概述（一）概念及要求,（二）培养基的类型,粉状,条状,斜面培养基,平板培养基,二、各级菌种的培养基 （一）母种培养基,2.通用配方,1.制作流程：配方 称量 煮汁 加琼脂 混合 定容调PH(或自然）,煮沸20min，纱布过滤,制马铃 薯滤液,滤液中加入琼脂、融化,融化琼脂,葡萄糖,勿污管口，控制装量,分装、塞免塞,滤液沸时加入、溶解，补足水,准备工作,（1）称量和配制,2.配制过程,称量、材料预处理马铃薯去皮、挖掉芽眼后称量200g，切成1cm见方的小块。琼脂剪碎后用水浸泡。,熬煮 将切好的马铃薯块加适量水
4、后放入电饭锅中，煮至酥而不烂。,过滤用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅。,熬琼脂在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为止。,加葡糖糖、定容 琼脂完全溶化，加葡糖糖，定容至1000ml。,（2）营养液分装分装分装装置：注射器分装、漏斗分装分装标准:分装量为试管长度的1/41/5。（注意事项：培养基不能沾污试管口。）,塞棉塞棉塞松紧适度，1/3在管外，2/3在管内。 扎捆7-10支试管捆在一起，棉塞上包好防水纸，直立放入高压灭菌锅中。,（3）灭菌处理在121下维持30min。,(4) 摆斜面斜面长是试管总长的3/4.,（二）原种、栽培种培养基,制作流程配方 称量 混匀 加水 调水 分装瓶（袋）
5、打孔 封口 灭菌 冷却。,2.常见原种配方,（l）木屑配方 阔叶树硬杂木屑73，细米糠（或麦放）25，蔗糖1，石膏粉1，PH值自然；（2）玉米芯配方 粉碎玉米芯78，细米糠（或麦茨）20，蔗糖1，石膏粉l，PH值自然；（3）谷粒配方 玉米、高梁或谷子9798，石膏粉23，,谷粒培养基制作 1.按配方称量各营养物质配方：优质新鲜小麦65%，木屑15%，棉籽壳15%，麸皮5%，石膏1%，过磷酸钙0.5%，糖0.5%，尿素0.5% 2.谷粒浸泡吸水冬季浸泡24-48小时，夏季加1%石灰（以防变酸）浸泡24小时，隔夜换水。 3.煮沸、沥干捞出泡好后，漂洗干净（去杂），煮至饱胀无白心，切忌煮开花，沥干水
6、分后捞出。 4. 拌料用煮小麦水拌木屑、棉籽壳、麸皮，最后再一起与麦粒拌匀。,配方（%）,3.制作过程,(1)称量和配制,分装,原种培养基装大口瓶 （装料量应为1/3或1/2） 栽培种培养基装菌种袋 （装料量应为2/3）,外紧内松，上紧下松,(2)装瓶（装袋）、封口,栽培种的装袋,擦净并封瓶口封口采用规格为13cm13cm0.004cm 高压聚丙稀袋，二层，里层在中央剪一3cm宽菱形口。,（3）装锅灭菌高压灭菌于126左右维持2小时；常 压灭菌于100维持10-12小时，夏季时间 可酌情延长。,（4）出锅 、冷却冷却至30以下待接种。,母基灭菌与摆斜面,（二）原种、栽培种培养基的灭菌,一、无菌
7、操作 二、母种的接种 (一）分离法 1.组织分离 2.孢子分离 （二）转管法 三、原种、栽培种的接种,必备,1.组织分离,（一）分离法,步骤,步骤,2.孢子分离(有性繁殖）,单孢分离 的菌落,多孢分离,2.采收孢子,钩悬法,25、24h现孢子粉 取出分离材料,孢子印法,接种孢子,用接种环 蘸孢子液或孢子粉 涂布于平板上,（二）转管法,转管,三、原种、栽培种的接种,接栽 培种,用接种匙（镊、铲）取枣大原种 放于袋的两端或瓶中料面上,栽培种接种,第五节 菌种培养与质量鉴定,一、菌种培养 （一）培养条件 （二）技术环节 二、菌种质量鉴定 （一）母种质量鉴定 （二）原种和栽培种质量鉴定,一、菌种培养,
8、（二）技术环节,母种培养,二、菌种质量的鉴定,（一）母种质量的鉴定,、,好母种,2.鉴定,耐干湿性试验,耐高温性试验,出菇试验,（二）原种、栽培种质量的鉴定,产生原基,黄水,污染,第六节 菌种保藏与复壮,一、菌种保藏 （一）保藏目的及原理 （二）常用保藏法 （三）保藏注意 二、菌种复壮 (一）菌种的衰退 （二）复壮方法 （三）防衰措施,一、菌种保藏,（一）保藏目的及原理,目的,（二）常用保藏法,以母种形式保藏,1.斜面低温法 斜面菌种置46冰箱中（36个月）,2.矿油保藏法,无菌检验 ？,3.自然基质保藏法,二、菌种的复壮,（一）菌种的衰退,（二）复壮法,1.繁殖交替法,2. 经常改变培养条件
9、 3.转管时只取尖端菌丝,再 见,本章主要内容,1.菌种类型（母种、原种、栽培种的作用） 2.高压锅、接种箱、接种室的构造及使用 3.培养基（PDA、颗粒培养基的配制方法） 4.接种（无菌操作、各级菌种的接种法） 5.菌种保藏（目的与原理、3种方法） 6.菌种复壮（简易复壮法、防衰措施）,1.设计菌种厂的依据是什么？ 2. 怎样防止菌种的衰退？ 3.怎样判断菌种的衰退？ 4.自然基质保藏法是怎样进行的？有何优缺点？,1.黄毅.食用菌栽培. 北京：高等教育出社，1998 2.中国食用菌菌种网 http:/,作业题,1.栽培时为何不用母种作菌种？ 2.母种扩成原种的目的是什么？ 3.怎样使用接种箱？ 4.菌种的基本要求是什么？,思考、讨论题,课外学习资源,本章参考资料,1.中国食用菌杂志. 云南：中国食用菌编辑部 2004.16， 2005.16 2.杨新美.食用菌栽培学.第6章.北京：中国农业出版社，1996 3.张金霞.食用菌生产技术.第48章.北京：中国标准出版社，1999 4.黄毅.食用菌栽培.第二版.上册.第4章.北京：高等教育出版社，1998 5.张松.食用菌学.第6章.广州：华南理工大学出版社，2000 6.中国食用菌菌种网 http:/ 7.中国食用菌信息网 http:/
