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1、法 医 物 证 学赖江华 博士Tel. 82655474-803 E-mail: ,前 言随着我国法制的日臻健全和科学技术的不断发展，整个社会法律体系对于证据的要求越来越严格。自DNA检验技术应用于法医物证工作以来，使法医物证检验工作由排除水平达到了认定的水平，为防止冤假错案提供了技术基础。,法医物证学,法医物证学是以法医物证为研究对象，以提供科学证据为目的，研究应用生命科学技术解决案件中与人体有关的生物检材鉴定的一门学科。法医血清学、法医血型血清学、法医血液遗传学、法医遗传学、法医生物学,一、物证的概念及特点,概念：凡对案件的真实情况有证明作用的物品， 统称为物证。 特点： 以物质特征证明案
2、件事实 对案件事实的证明具有间接性 不易受人们主观因素影响,物品物证 痕迹物证 文书物证 音像物证 化学物证 生物物证,二、物证的分类,三、法医物证的概念、特点及意义 （一）概念：与人体有关的生物物证,通常 称为法医物证。包括：,人体组织器官（毛发、骨骼、牙齿、组织块等） 体液（血液） 分泌液（唾液、精液、阴道分泌液、乳汁） 排泄物（尿液、粪便、羊水等）,（二）法医物证的特点,法医物证的稳定性受环境条件的影响 法医物证属于科学证据,（三）、法医物证的意义,法医物证是侦破刑事案件的向导 法医物证是查明案件事实的依据 法医物证是审查其他证据的手段,四、法医物证学的任务、理论与方法,（一）基本任务个
3、体识别亲权鉴定,（二）基本理论 1、个人识别：通过对物证检材 的遗传标记检测，依据个体特征来判断前后两次或多次出现的物证检材是否同一个体。 2、亲子鉴定：分析个体的遗传标记，根据遗传学原理、遗传规律和统计学原理判定被控父母与子女血缘关系。,（三）基本技术 1、化学：如物证检验预确证试验等； 2、物理：如紫外线、激光等； 3、形态学：肉眼、显微镜、电镜； 4、免疫学：种属、吸收、解离、淋巴毒等； 5、生物化学：电泳检测酶型、血清型等； 6、分子生物学：DNA检测分析 7、计算机：数据库等。,五、法医物证鉴定鉴定人物证检材的发现、提取、包装、保存及检验检验报告和鉴定书,Sources of Bio
4、logical Evidence生物证据,Blood血 Semen精液 Saliva唾液 Urine尿液 Hair毛发 Teeth牙 Bone骨 Tissue组织,Genomic DNA Polymorphism,MtDNA polymorphism,Single Nucleotide Polymorphism (SNP)1/300-400pbs 种族与个人差异,核基因组线粒体基因组多态性研究与开发 彻底改变了对几乎所有生命过程的认识生命科学和生物医学引入了暂新的方向分子遗传学、比较基因组学、高通量生物化学、生物信息学和计算生物学的交织进展前所未有在分子水平上分析和理解健康疾病,一. 核酸的分
5、布、分类与组成,核酸分子结构与功能一. 核酸的分布、分类与组成核酸的分布：细胞核、细胞质核酸的分类：DNA、RNA核酸的组成：核苷酸=核苷+ 磷酸,l,二.DNA多态性序列多态性 长度多态性：RFLP、VNTR、STR单核苷酸多态性：SNP,三.DNA多态性的分析与检测RFLP:Restriction Fragment Length PolymorphismPCR:Polymerase Chain ReactionAmp-FLP:Amplification FLPSTR:Short Tandem RepeatsSEQUENCING,四.DNA分析的检材收取,五.DNA分析的质量控制,DNA 分
6、布与结构,Organization of mtDNA,腺嘌呤(A)嘌呤碱基 鸟嘌呤(G)胞嘧啶(C) 嘧啶核苷 胸腺嘧啶(T)-D核糖戊糖 核苷酸 -C-2脱氧核糖磷酸,核苷酸的组成,二.DNA多态性概述,DNA是组成染色体的化学物质，它控制着遗传特征（例如：眼,头发和皮肤的颜色） 2. DNA对每个人来说都是不同的，但是同卵双胞胎除外。3. DNA存在于所有有核细胞内（白血球细胞，软组织细胞，骨质细胞，发根细胞及精子）。4. 一个个体的DNA/染色体一半来自父亲，一半来自母亲。5. DNA是由两条链状分子组成。,二.DNA多态性概述,DNA链是由四种碱基组成，并且以碱基配对规则A连接T，C连
7、接G。7. 四种碱基及其在DNA分子中的排列顺序方式构成了遗传密码。8. 一个个体的DNA保持终生不变。9. 在一个DNA链上的某个特殊区域内，每个人都有一独特的碱基序列或遗传密码。10. 正是这个唯一的遗传密码使科学家能鉴别出一个体而排除其他无关个体。,DNA in the Cell 有核细胞,三.DNA多态性的分析与检测,聚合酶链式反应（PCR）,l 概念：以靶DNA为模板，在一对人工合成的寡核苷酸引物介导下，通过DNA聚合酶 酶促反应，快速体外扩增特异DNA序列。,基本原理：引 物碱基互补结合模板DNA侧翼 高温变性低温退火靶DNA百万倍扩增 中温延升,三.DNA多态性的分析与检测,聚合
8、酶链式反应（PCR）,技术特点：灵敏度高 特异性强种属特异性好适于降解DNA检材扩增产物分析方法多样化,三.DNA多态性的分析与检测,聚合酶链式反应（PCR）,酶联荧光RFLP技术标准,DNA扩增片段长度分型技术标准,三.DNA多态性的分析与检测,短串联重复序列（STR）,概述： 短串联重复序列（short tandem repeat, STR）是广泛存在于人类染色体DNA中的一类多态性遗传标记系统，因其存在范围广（平均16kb中即有一个STR基因座），核心序列小（2-7bp）且扩增产物长度均小于500bp，特别适合法医学的微量和降解检材。,人类基因组中广泛存在，数目众多，是个体识别的丰富资源
9、。 STR产物片段长度小，约100-500bp，对DNA的需要量少，灵敏度高，更适用于降解检材的检验。 与等位基因分型标准参照物（Ladder）比对进行，分析结果数字化，有利于结果的保存以及实验室间数据的交换，更符合DNA检验工作标准化、建立DNA数据库的需要。 STR基因座扩增片段相近，扩增条件类似，能够进行多个位点的复合扩增，一次检验能获得较多的多态性信息，更加满足法医物证检验的要求。,三.DNA多态性的分析与检测,短串联重复序列（STR）,特点：,13 CODIS Core STR Loci with Chromosomal Positions,CSF1PO,D5S818,D21S11,
10、TH01,TPOX,D13S317,D7S820,D16S539,D18S51,D8S1179,D3S1358,FGA,VWA,AMEL,AMEL,三.DNA多态性的分析与检测,方法1：PAG + Silver Stain,短串联重复序列（STR）,3、PCR-SSP分型原理与方法,序列特异性引物PCR（PCR-Sequence-Specific Primer,PCR-SSP）根据等位基因的序列，设计具有序列特异性的引物，对样本进行多态性分型。由于该方法是以引物决定分型特异性，因此根据引物设计可进行“低分辨率”和“高分辨率”的扩增，将两者分步进行，以提高分型的效率。,4、PCR-SSCP分型原
11、理与方法,单链DNA在中性条件下，由于碱基配对等分子内的相互作用，呈复杂的折叠构型，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，其迁移率除与长度有关外，主要取决于构型。由于HLA-DNA片段在扩增后产物的碱基序列不同，变性为单链后，其单链DNA构型不同，用中性聚丙烯酰胺凝胶电泳可将其分离，则呈现单链的构象多态性（Single Strand Confirmation Polymorphism, SSCP）。,DNA序列测定 原理及方法,经典的测序是对基因组DNA测序，目前是在PCR做组特异性扩增的基础上进行PCR产物测序。利用循环双脱氧末端终止法原理，用荧光标记和自动测序仪测定HLA基因的全部核苷酸序列，通过相应软件
12、分析确定型别。,DNA测序原理,测序胶图,TAGCGCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTCCCGGCCGCCATGGCGGCCGCGGGAATTCGATTCGATCAACCTCACCACCTCTTGCTCAGCCTATATACCGCCATCTTCAGCAAACCCTGATGAAGGCTACAAAGTAAGCGCAAGTACCCACGTAAAGACGTTAGGTCAAGGTGTAGCCCATGAGGTGGCAAGAAATGGGCTACATTTTCTACCCCAGAAAACTACGATAGCCCTTATGAAACTTAAGGGTCGAAGGTGGATTTAGCAG
13、TAAACTGAGAGTAGAG,测序峰图及序列数据,DNA芯片技术 原理及方法,DNA芯片是把荧光标记的各位点的寡核苷酸探针，用自动化微量点样装置将其以较高密度互不干扰的印点于经特殊处理的玻片、尼龙膜或硝酸纤维素膜上，并使其与支持物牢固结合，然后与HLA特异性PCR扩增产物进行杂交。杂交信号通过激光共聚焦扫描仪检测和计算机数据处理后，即可确定其基因型。,基因芯片的探针,Tagged RNA fragments flushed over array,基因芯片的杂交实验,http:/www.indstate.edu/thcme/mwking/molecular-medicine.html,Fro
14、m Indiana State University School of Medicine,Restriction Fragment Length Polymorphisms,Probe,DNA Chip,血痕检验 （Bloodstains Test）,血痕检验的目的：1是否血痕2是人血还是动物血3血痕的个人识别4与案情有关的其他问题,血痕检验的程序：1肉眼检验2预试验3确正试验,4种属鉴定5遗传标记测定6其他检验,亲权鉴定,发展史概念种类理论依据基本原理鉴定程序鉴定方法概率计算案例分析注意事项,古代：滴骨认亲、滴血认亲现代：第一阶段（50年代以前）第二阶段（5080年代）第三阶段（80年代今）,亲权鉴定发展史,利用医学、遗传学、生物学、数学等学科的理论与技术判断父母与子女是否亲生关系。,亲权鉴定概念,民事： 刑事： 行政： 涉外：,亲权鉴定种类,遗传特征：单纯、复杂 妊娠期限：28015天 性交及生育能力,亲权鉴定理论依据,根据母子对判断生父基因被控父亲有无该基因无 有排除 不排除 概率计算,亲权鉴定基本原理,委托 授理 登记 样本收集 制订实验方案 实验结果记录与分析 制做鉴定书 鉴定书签发,亲权鉴定鉴定程序,所使用的基因座定义和具有的特征已有文献报道； 种属特异性，灵敏性，稳定性研究已实施；,亲权鉴定对鉴定方法的要求：,亲权鉴定案例分析,亲权鉴定案例分析,
