微生物质量控制课件

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1、临床微生物检验 质量控制,质量控制（Quality control）临床微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系,目 的,保证微生物检验整个过程（标本采集送检、直接涂片、培养、鉴定、药敏试验及血清学试验等）的准确性、可靠性、安全性，避免因操作变化导致检验结果错误，造成误诊，为临床提供准确及时的检验报告,内 容,室内质量控制实验室内部 质量保证的核心和基础 室间质量控制外部组织或机构 质量评价,室内质量控制,一.对微生物检验人员的要求 二.操作手册 三.仪器设备的功能监测 四.培养基、药敏纸片的质量控制 五.试剂、染色液及抗血清的质控 六.临床标本检验过程的质量控

2、制 七.标准菌株的来源和保存,一、对微生物检验人员的要求,1.工作人员应具备相关教育背景，熟悉微生物学实验室操作规程、消毒灭菌及生物安全知识。人员数量应满足所提供的服务的要求。2. 工作人员应定期接受培训以及胜任该岗位的考核，没有通过岗位考核人员应再培训和再考核，并记录。,一、对微生物检验人员的要求,微生物学的专业水平 个人的技能、经验、责任心,定期参加培训,实验室进修学术交流,专业期刊,一、对微生物检验人员的要求,实验室人员能力比对（涂片） ：实验室内：方法见 “细菌形态学技术PPT”实验室间：,室内质量控制,一.对细菌检验人员的要求 二.操作手册 三.仪器设备的功能监测 四.培养基、药敏纸

3、片的质量控制 五.试剂、染色液及抗血清的质控 六.临床标本检验过程的质量控制 七.标准菌株的来源和保存,二、操作手册,各级人员的职责和权限 实验室安全措施 标本采集和处理指南 微生物检验项目 培养基和试剂的配制方法 室内和室间质量控制 参考数据,二、操作手册,参考书： 全国临床检验操作规程 诊断细菌学 实用临床微生物诊断学 实用临床微生物学检验与图谱 临床微生物学和微生物学检验 Manual of Clinical Microbiology,室内质量控制,一.对细菌检验人员的要求 二.操作手册 三.仪器设备的功能监测 四.培养基、药敏纸片的质量控制 五.试剂、染色液及抗血清的质控 六.临床标本

4、检验过程的质量控制 七.标准菌株的来源和保存,三、仪器设备的功能监测,微生物室常用仪器设备：培养箱、冰箱、生物安全柜、比浊仪（管）、加样枪、天平、温度计、血培养仪、全自动鉴定药敏分析仪、结核培养仪、水浴箱、超净工作台、高压灭菌器等,三、仪器设备的功能监测,表1 仪器设备的质量控制标准,三、仪器设备的功能监测,培养箱、冰箱、水浴箱：每日上班、下班两次温度及CO2浓度观测，并绘制曲线 高压灭菌器：定期监测生物指示剂：嗜热脂肪芽孢杆菌（每月一次）化学指示剂：3M指示带（每次） 比浊仪每次使用前以标准比浊管进行校准（在有效期内使用） 生物安全柜：定期更换滤网，紫外线每3月检查1次，每年由厂家检测一次，

5、并出具报告 超净工作台：定期做无菌试验,三、仪器设备的功能监测,血（结核）培养仪 ：定期进行校准培养瓶在有效期内使用每年对培养仪进行评价 微生物鉴定药敏仪（ATB板条）每批号/每月用标准菌株进行质控及时更新软件定期进行评价及比对,三、仪器设备的功能监测,定期维护和校准、记录 加样器 温度计 培养箱 自动高压灭菌器 生物安全柜 天平 水浴箱,年检（强检）、验证,室内质量控制,一.对细菌检验人员的要求 二.操作手册 三.仪器设备的功能监测 四.培养基、药敏纸片的质量控制 五.试剂、染色液及抗血清的质控 六.临床标本检验过程的质量控制 七.标准菌株的来源和保存,四、培养基、药敏纸片的质量控制,(1)

6、配制记录： 培养基的制作过程必须统一 无论是培养基或添加剂的剂量、pH值、高温灭菌的时间或温度，都需遵照规定 培养基名称、本批配制量、配方、配制日期和配制人员姓名都必须详细记录,四、培养基、药敏纸片的质量控制,(2)培养基外观的检查： 新配或新购入的培养基必须先以肉眼检查其颜色与透明度，培养基应澄清，无浑浊，厚薄均匀 培养基的色泽不正常应测其pH值，不得超过所预期值的0.2 平板培养基最易脱水，应放在严密的有盖容器内或塑料袋内。这样培养基可保存两周左右，试管内培养基可保存1-2个月,四、培养基、药敏纸片的质量控制,(3)无菌试验：每批配好的培养基须进行无菌试验 随机选取3%-5%的量，如果配制

7、大量的培养基，则任意选取10个平板或管装培养基，35温度下隔夜培养，证明无菌生长为合格,四、培养基、药敏纸片的质量控制,(4)培养基的有效性试验：每一批新制或新购的培养基，使用前均须取已知性质的标准菌株试验是否能支持、区分或选择某类细菌的生长 培养基的试验结果需要加以记录，项目包括试验日期、试验结果以及实验者的签名等。且此记录本需便于检验室人员的查看，以便能随时解决任何发生的问题,四、培养基、药敏纸片的质量控制,表2 常用培养基的质量控制,四、培养基、药敏纸片的质量控制,(5)培养基的量： 平板培养基的厚度一般为3mm (90mm平皿+15-20ml培养基） 药敏试验用为4mm(90mm平皿+

8、25ml培养基） 斜面不超过试管的2/3,四、培养基、药敏纸片的质量控制,(6)培养基的有效期：培养基有效期的长短应参考诊断细菌学书籍 若购买现用的培养基，均应注意有效期的标示。,四、培养基、药敏纸片的质量控制,药敏纸片的保存及使用：药敏纸片应低温保存，20保存不超过1年，日常可取出1周用量存放于4冰箱。药敏纸片应避免受潮，盛纸片的容器自冰箱或冰冻箱取出后，必须置室温12h后再打开取出纸片使用，以避免冷凝水浸湿纸片。含药纸片与平板边缘至少相距15mm，纸片与纸片间中心点至少相距24mm。含药纸片贴在琼脂上不得再移动，否则会因部分药液渗入琼脂而影响试验结果。,四、培养基、药敏纸片的质量控制,药敏

9、纸片质控方法与规定 ：新启用批号纸片连续30天使用标准菌株进行药敏试验。每种药物的30个数据中,允许3个数据超出规定范围.满足上述要求可将质控频率改为每周一次。每周质控时,如果有一个数据超标,连续做五天质控，并查找原因.五日数据在控表明找到原因.找不到原因时,应恢复每日质控.在恢复每周质控之前,应再有30日连续质控数据.常见失控原因：测量错误、污染、纸片/菌株/温度错误、接种量错误或菌悬液混合不佳、随机错误等。,室内质量控制,一.对细菌检验人员的要求 二.操作手册 三.仪器设备的功能监测 四.培养基、药敏纸片的质量控制 五.试剂、染色液及抗血清的质控 六.临床标本检验过程的质量控制 七.标准菌

10、株的来源和保存,五、试剂、染色液及抗血清的质控,染色液的质量控制自制染色液要将整个配制过程的操作步骤形成记录并保存。配好的染液应贴上有染色液名称、配制日期、配制人的标签。商品染液应具备相应的品牌、试剂名称、批号、存放条件、有效日期。选用适当的标准菌株作阳性及阴性对照，来鉴定染色液的性能,革兰染色用ATCC 25923金黄色葡萄球菌和ATCC 25922大肠埃希菌制备浓菌悬液，经高压灭菌后冰箱保存，作为革兰染色的质量控制，每日/每批进行质控并与标本同步进行。抗酸染液用ATCC 14468 耻垢分枝杆菌灭活后进行质控，质控频率为每日/每批一次。墨汁荚膜染色用ATCC 700603肺炎克雷伯菌进行质

11、控，质控频率为每次/每批一次。,五、试剂、染色液及抗血清的质控,五、试剂、染色液及抗血清的质控,试剂的质量控制各类试剂，在配制或购入后均应进行“有效”试验，用已知阳性及阴性菌株进行试验。试剂须作适当的储存对较稳定的试剂如靛基质试剂应在配制时及每周予以检测核对，凡不稳定的试剂每天使用时均应检测，合格后才能使用,五、试剂、染色液及抗血清的质控,表3 常用试剂的阳性、阴性对照菌株,五、试剂、染色液及抗血清的质控,诊断血清的质量控制购入的沙门菌属、志贺菌属、致病性大肠杆菌的诊断血清必须立即记录其购入日期、观察其透明度、色彩有无变化和是否有沉淀物，然后置4冰箱保存使用前应注意检查诊断血清的批号、有效期，

12、如发现浑浊或有絮状沉淀物时，很可能系污染所致，不能再继续使用,五、试剂、染色液及抗血清的质控,诊断血清的质量控制不得将诊断血清置室温保存,各种诊断血清均应置冰箱中4保存。每月/每批用标准菌株进行一次测定，观察其效价及特异性。,室内质量控制,一.对细菌检验人员的要求 二.操作手册 三.仪器设备的功能监测 四.培养基、药敏纸片的质量控制 五.试剂、染色液及抗血清的质控 六.临床标本检验过程的质量控制 七.标准菌株的来源和保存,六.临床标本检验过程的质量控制,分析前 申请样本采集、运输及存储分析中 涂片染色标本接种分离培养鉴定、药敏分析后 报告审核发布,六.临床标本检验过程的质量控制,六、临床标本检

13、验过程的质量控制,分析前1.临床医生开具合理的检验项目2.标本采集（向临床提供标本采集说明、时间、部位、方式）、运送（无菌操作、无菌器皿、及时送检、储存方法）3.标本的合理保存4.送检标本的登记：三查、三对5.不合格标本登记：电告不合格原因，登记病人信息并注明退回理由 （常见不合格原因）6.不可拒收的标本血、胸腹水、脑脊液等，如果培养或检测，要对结果进行说明。,分析中： 1.直接诊断:直接涂片（非常必要和重要） 2.分离培养：使用多种适合于可疑病原菌生长 的培养基和培养条件 3.标本筛选：与临床的联系 4.鉴定：按鉴定程序执行，正确引导下一步鉴定做好趋向性试验 5.药敏试验：菌落纯度（纯度实验

14、）、菌悬液浓 度、无菌操作等。 6.危急值结果及时通知临床,六、临床标本检验过程的质量控制,分析后： 1.结果复核（专家系统） 2.特别结果提示（ESBL；MRS等） 3.报告单审核 4.临床联系 5.危急值及时通知临床 6.传染病报告 7.知识的及时更新,六、临床标本检验过程的质量控制,室内质量控制,一.对细菌检验人员的要求 二.操作手册 三.仪器设备的功能监测 四.培养基、药敏纸片的质量控制 五.试剂、染色液及抗血清的质控 六.临床标本检验过程的质量控制 七.标准菌株的来源和保存,七、标准菌株的来源和保存,标准菌株要求必须是形态、染色反应、生理生化及血清学特性典型而稳定的菌株实验结果重复性

15、好，极少发生变异国际社会认可来源于专门机构,七、标准菌株的来源和保存,标准菌株来源美国典型菌种保藏中心 ATCC 英国国家典型菌种保藏中心 NCTC中国生物制品检定所菌种保藏中心 各级临床检验中心等,七、标准菌株的来源和保存,1.对每批购买的标准菌株要做好登记，包括菌种的 菌名、编号、购买时间、保存地点、记录人等2.每次使用标准品都应作好使用记录，包括标准品的名称、编号、使用时间等。3.购买的标准品初次使用时，应大量增殖，然后分装 在含10-15%甘油的胰蛋白胨肉汤中，-20以下保存。4.应避免反复传代，新的标准菌株复苏最多不得超过三次，如超过三次将不再视为标准菌株使用。5.标准菌株保存管一经

16、溶化使用后，不得再次冻存。,七、标准菌株的来源和保存,菌株的保存方法1.冷冻干燥法：最理想的保存方法，存活率高、变异率低，保存时间长，可达数年至数十年（不产孢子的丝状真菌不适用）手续繁琐，需专门的冷冻干燥设备菌种保存中心均采用此法,七、标准菌株的来源和保存,菌株的保存方法 2.冰冻保存法：将细菌混悬于脱纤维羊血或脱脂牛奶中（5%），置液氮或-80冰箱。一定要灭菌，各种菌都可以保存（包括苛养菌）。食用奶粉含有防腐剂，要用做培养基的专用奶粉。 6-12月传代一次,七、标准菌株的来源和保存,菌株的保存方法 3.培养基保存法：最简易方便的方法，适用于大多数实验室普通琼脂斜面保存法：适于一般细菌的保存，置4冰箱可保存1个月。（疱肉培养基可用于保存厌氧菌）血琼脂斜面保存法：适于链球菌，半月转种一次。脑膜炎奈瑟氏菌应用巧克力斜面，若加液体石蜡，可延长保存期。半固体穿刺法：穿刺培养基并加液体石蜡，置4冰箱可保存3-6个月，适用于肠杆菌科细菌,七、标准菌株的来源和保存,