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1、仪器分析概述 它涉及到化学、 的 数学、 由丽电 和计算机技术意众元学笠，马经不是传统意义下的分析化学了和各各从入六必尖从村员壬公肯全从这党大罗纺划做训妆容光学分析法电化学分析法色湛分析法其它分析技术质谱、电泳、流动注射等)联用技术第四部分 紫外-可见分光光度法和分子荧光法1. 紫外-可见分光光度法的特点。2. 光的吸收定律及其实用范围。3. 掌握紫外-可见分光光度法的分析方法。4. 显色反应及其条件的选择。5. 紫外-可见分光光度法仪器测量的误差及测量条件的选择。6. 紫外-可见分光光度法的应用。 一. 紫外-可见吸光光度法概论紫外-可见吸光光度法的特点具有较高的灵敏度 (10-3-10-6
2、 mol/L);准确度较好 相对误差5%;操作简便快速、选择性好、仪器简单;四应用广泛。二. 物质对光的选择性吸收可见-紫外分光光度法的光谱波长范围(200 760 nm).可见-紫外分光光度法的选择性是基于被测物对光的选择性吸收。在可见光区看到的颜色是被吸收光的互补色，见补表1。在分光光度法中，确定被测物对光的最大吸收波长是通过测定光吸收曲线。见补图1.补表1 物质颜色透过光) 与吸收光颜色的互补关系 Je | 黄妇| 黄 | 认 | 和红|各| 生 | 蔓 | 全|吸收光 本 和 有| 本 | 茶 | 绿蛤 | 益绿 纪波长 400-450 | 450-480 | 450-3490 | 4
3、20-: 650-760nm | | Jimaz补图1 紫外-可见光吸收曲线 ynm三. 物质对光吸收的本质分子能级的三种形式: 价电子在分子轨道高速运动的能级、原子振动能级和分子绕其重心的转动能级。紫外-可见光谱主要是分子的价电子能级光谱。价电子能级间能级差: 1-20 eV, 相应波长落在柴外和可见光区;振动能级间能级差: 0.05-1eV, 相应波长落在红外光区;转动能级问 能级差: -0.0001-0.05 eV; 相应波长落在远红外及微波区。紫外-可见吸收光谱定性和定量依据定性依据 不同物质分子中价电子从基态跃迁到激发态时所需能量各不相同，故最大吸收波长人不同; 此外，分子结构不同，
4、其可见-紫外光谱形状不同，根据这两点一rr 大mL 2了Lnm1.6 灶1.2 |这 108 |上|04 11100 人 让120 200 800AnaxA)着图z 不同物质(,B;C)和不同良度(123,4) 的同一先质(B)的贤收光溢(痕度: 12池和)定量依据 同一物质的含量(或浓度)不同，其最大吸收峰强度不同，由此可以定量。见动画1四.光的吸收定律: 朗伯-比耳(Larmbert-Beer)定律人 波格 (Bouger ) 发现物质对光的吸收与吸光质的厚度有关， 见图3。1760年，Lambeet提出 光咒收程度 与泻液但度 变%顺正比(见动画2) ，即吸光度 7六= 871852年，
5、Beer提出了光级收程， 亲生村全 向粒的数目(浓度 ) 成正比 (见动画3) ，肯 7=二了一大2两个定律合并起来叫Lambert-Beer定律: 4- 宇 upc称为吸光系数，其单位是cmlg1L，浓度c单位为g/工，液层厚度单位为cm。图3 ”光通过有吸光物质的示意图Lambert-Beer定律数学 人二 ez 了 = Kpc式中Ko叫摩尔吸光系数，单位是cmlmoLLL，2单位是cm ， c单位是mol/工。1与 的关系是 K=MMa ，M为物质的摩尔质量。Lambert-Beer定律不仅适用于溶液，而且也适用于均匀的气态和固态吸光物质，是所有吸光光度法定量分析的依乓激光度与这光度的关系: F=五.偏离比耳定律的原因Beer定律的偏离 被测物质浓度与吸光度不成线性关系叫Beer定律的偏离。如图4所示。偏离比耳定律的原因很多，但常见的原因是如下四种:二,4=-lg7了 站
