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1、药物的鉴别试验,Identification test of drug,第二章,药物的鉴别试验药物的杂质检查药物定量分析与分析方法验证,药品检验工作的基本规律,Basic regularity of drug inspection,一、药物鉴别的目的和特点 1鉴别目的 药物鉴别依据药物的化学结构和理化性质进行某些化学反应，测定某些理化常数或光谱特征，来判断药物及其制剂的真伪。只有在药物鉴别无误的情况下，药物被证实是真的，才有必要接着进行杂质检查、有效化学成份含量测定。在药物分析中药物鉴别属首项工作，为确保临床用药的安全与有效提供科学依据。,第一节 常用鉴别方法,（1）药物鉴别是根据药物的分子结
2、构、理化性质，采用生物学、化学或物理化学方法来判断药物的真伪。 药典所收载的药物项下的鉴别试验方法，仅适用于贮藏在有标签容器中的药物，用以证实是否为其所标示的药物，它与分析化学中的定性鉴别有所区别。,2特 点,（2）药物鉴别不只由一项试验就能完成，而是采用一组试验项目（2个或2个以上）全面评价一个药物，力求使结论正确无误。,（3）药物鉴别通常选用综合分析试验法，用化学鉴别法、仪器分析法、生物检定法等不同方法鉴别同一种供试品，综合做出判断。一般每种药品选用24种方法进行鉴别试验，相互取长补短。,药物鉴别采用的方法应是专属性强，重现性好，灵敏度高，并且简单可行、快速。常用的方法有化学法、紫外吸收光
3、谱法、薄层色谱法、红外吸收光谱法等多种方法，下面主要介绍几种常用的鉴别方法。,二、常用鉴别方法,鉴 别 方 法,化学鉴别法,光谱鉴别法,生物学法,HPLC、GC鉴别法,薄层色谱鉴别法,纸色谱鉴别法,呈色反应鉴别法,紫外光谱鉴别法,红外光谱鉴别法,沉淀生成反应鉴别法,色谱鉴别法,气体生成反应鉴别法,测定生成物的熔点,荧光反应鉴别法,1、特点：化学鉴别法操作简便、快速、实验成本低，是药物鉴别时最常用的方法。 2、鉴别依据：根据药物与化学试剂在一定条件下发生离子反应或官能团反应产生不同颜色，生成不同沉淀，放出不同气体，呈现不同荧光，从而做出定性分析结论。,（一）化学鉴别法,（1）干法 干法系指将供试
4、品加适当试剂在规定的温度条件下（一般是高温）进行试验，观测此时所发生的特异现象。常用的方法有焰色试验和加热分解试验。,3、类型：根据试验条件的不同化学鉴别法可分为干法和湿法两种类型。,焰色试验：利用某些元素所具有的特异焰色，可鉴别它们为哪一类盐类药物。方法为：取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，使火焰显出特殊的颜色。例如：钠为鲜黄色，钾为紫色。在临床使用的青霉素类及头孢菌素类药物大多为其钠盐或钾盐，鉴别时利用钠、钾盐的焰色反应。,加热分解：在适当的温度条件下，加热使供试品分解，生成有特殊气味的气体。例如：舒林酸的加热分解（取本品约15mg,置试管中,小火加热数分钟），产生刺激性
5、的二氧化硫气体,并能使湿润的碘-淀粉试纸蓝色消褪。,（2）湿法湿法系指将供试品和试剂在适当的溶剂中，于一定条件下进行反应，发生易于观测的化学变化，如颜色、沉淀、气体、荧光等。,呈色反应鉴别法：系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。常用的反应类型有： 三氯化铁呈色反应 酚羟基或水解后产生酚羟； 异羟肟酸铁反应 多为芳酸及其酯类、酰胺类； 茚三酮呈色反应 氨基酸及氨基糖苷类； 重氮-偶合显色反应 芳伯氨基或能产生芳伯氨基； 氧化还原显色反应及其他颜色反应。,沉淀生成反应鉴别法 常用的反应有： 与重金属离子的沉淀反应在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成
6、不同形式的沉淀； 与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐； 其他沉淀反应。,荧光反应鉴别法：常用的荧光发射形式有药物本身可在可见光下发射荧光；药物溶液加硫酸使呈酸性后，可见光下发射荧光；药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其他反应后，发射荧光。,气体生成反应鉴别法大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气；化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体（硫喷妥）；含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生乙酸
7、乙酯的香味。,1紫外-可见分光光度法 紫外-可见分光光度法（UV-Vis）是药典中常用的一种药品鉴别方法，鉴别时一般采用对比法，即按规定的方法配制供试品溶液与对照品溶液，通过对比吸收光谱的特征数据、吸收度或吸收系数、吸收光谱的一致性等进行鉴别。,（二）仪器鉴别法,（1）测定最大吸收波长及不同波长的吸收度比值。 例如：丙酸倍氯米松，取本品精密称定，加乙醇溶解并定量稀释成浓度为20g/ml的溶液，依法测定，在239nm处有最大吸收，吸收度为0.570.60；在239nm与263nm波长处的吸收度比值应为2.252.45。,紫外-可见分光光度法应用时，主要有以下几种方式：,（2）测定吸收系数。药品在
8、一定波长下的吸收系数，可用于药品的鉴别。例如：甲砜霉素，取本品精密称定，加水溶解并定量稀释成浓度为200g/ml的溶液，依法测定，在266nm和276nm处有最大吸收，吸收系数分别为2528和21.523.5；取上述供试品溶液1ml，加水稀释成20ml后，在224nm处有最大吸收，吸收系数为370400。,（3）对比吸收度或吸收系数的比值。取不同吸收峰或吸收谷处的吸收度的比值作为鉴别的依据。由于溶液浓度和吸收池厚度均相同，因此用此法可消除浓度和厚度的影响。例如:维生素B12的鉴别，中国药典（2010年版）规定361nm处的吸收度与278nm处的吸收度比值应为1.701.88，361nm处的吸收
9、度与550nm处的吸收度比值应为3.153.45。,（4）对比吸收光谱的一致性。用上述几种方法鉴别时，无法发现吸收曲线其他部分的差异。必要时可将浓度相同的试样与标准品在同一条件下分别扫描其吸收光谱，对比其一致性；也可利用文献中的标准图谱对照。,图4-1 连翘甙的紫外吸收图谱,特点：红外吸收光谱法（IR）是一种专属性很强、应用广泛（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。作用：主要用于组成单一、结构明确的原料药鉴别，特别是结构复杂、用化学方法不易鉴别的药物。,2红外吸收光谱法,鉴别方法：采用标准图谱对比法，即在药典规定的条件下测定供试品的图谱，然后与药品红外光谱集对照。对照时一般先看最强峰的吸收位置、
10、形状、数目等是否一致，然后再检查中等强度缝和弱吸收峰是否对应，如果供试品的红外光吸收图谱与对照品的图谱完全一致，一般可认为是同一种化合物。,为了确保鉴别结果准确无误，药典一般不单独用本法进行鉴别，常与其他理化方法联合进行鉴别。如：中国药典（2010年版）二部苯酚鉴别项下规定：取本品0.1g，加水10ml溶解后，照下述方法试验。,（1）取溶液5ml，加三氯化铁试液1滴，即显蓝紫色。 （2）取溶液5ml，加溴试液，即生成瞬即溶解的白色沉淀，但溴试液过量时，即生成持久的沉淀。 （3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集240图）一致。,图4-2 苯酚的红外光吸收谱图,薄层色谱法（TLC）是将细
11、粉状的吸附剂或载体涂布于一块具有光洁表面的玻璃板、塑料片或铝基片上，形成以均匀薄层（厚度0.251mm）,待点样、展开后，各组分在薄层上得到彼此分离的方法，也是目前药典中收载最多的药品鉴别方法之一。,3薄层色谱法,鉴别原理：同一种药物在同样条件下的薄层色谱行为是相同的,依此可以鉴别药物及其制剂的真伪。 鉴别时将供试品和对照品按中国药典规定，用同种溶剂配成同样浓度的溶液，在同一薄层板上点样、展开、显色，供试品所显主斑点的颜色、位置应与对照品的主斑点相同。,高效液相色谱法（HPLC）是近年来药物分析领域中应用最广泛的分离分析技术，广泛用于药品的含量测定和真伪鉴别。,4高效液相色谱法,高效液相色谱法
12、系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法，用其进行药品鉴别时，一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行试验，根据供试品和对照品色谱主峰保留时间（tR）的一致性进行判断。（图4-3、图4-4）。,图4-3 绿原酸标准品色谱图,图4-4 样品色谱图,性状项和物理常数确认,鉴别项下规定的试验,原料药鉴别,制剂鉴别,鉴别试验的项目 Test items,性 状 （Description）,定义：反映药物特有的物理性质，如外观、溶解度和物理常数等。,外 观,溶解度,物理常数,外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。如二巯基丁二钠的描述为“本品为白色
13、至微黄色的粉末；有类似蒜的特臭”。 溶解度：一定程度上反映了药品的纯度。药品在不同溶剂中的溶解性能用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述。 物理常数：反映其纯杂程度。药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。,性 状 （Description）,熔 点,性 状-,固体熔化成液体的温度,熔融同时分解的温度,自初熔至全熔的一段温度,物理常数,比旋度：在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度。用 表示。 吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物
14、质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。中国药典收载是 。这两种物理常数可用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。,性 状-,物理常数,在一定波长下，溶液浓度为1%（W/V），厚度为1cm时的吸收度,依 据：依据某一类药物的化学结构或理化性质特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。 中国药典附录收载一般鉴别试验：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐无机酸盐,General identification test,一般鉴别试验,依 据：根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别药物的真伪。 如四氮唑法: C17位上有-醇酮基的药物,如皮质激素分析。,Specific identification test,专属鉴别试验,比较： 一般鉴别试验 - 以某些类别药物的共同化学结 构为依据，根据其相同的理化性质进行药物真伪的 鉴别，以区别不同类别的药物。 专属鉴别试验 - 在一般鉴别试验的基础上，利 用各种药物的化学结构差异来鉴别药物，以区别同 类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体。,
