微核报告模板

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1、微核报告模板微核报告模板篇一：微核预习报告利用花露水对蚕豆(Vicia faba)根尖细胞微核的诱导和观察 （ 焦锦花 1020212128 生物技术 1011 班 ） 组员名单：葛笑、孙晓玮、周晓杰、徐中洋、李亚峰、程石、蒋沈琳、焦锦花 一、实验目的 1、了解微核测试的原理和毒理遗传学在实际生活中的应用范围及意义 2、学习蚕豆根尖的微核测试技术并掌握其操作方法 3、探究花露水对微核的诱导作用 4、进行小组合作，掌握设计实验基本能力 二、实验原理 微核简称 MCN，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核

2、13 以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关。 利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测 花露水包含少量劣质香精和 75%左右的酒精，还有一种叫“伊默宁”的成分， 而花露水芬芳剂成分部分有毒。 本实验即运用蚕豆根尖微核实验检测，研究花露水对蚕豆根尖微核诱导的作用，进而为花露水对人体以及环境的影响提供一

3、定的理论参考。 三、实验材料 蚕豆种子、 花露水 ：用蒸馏水配制成25、50、75梯度的溶液及原液、 卡诺固定液（无水酒精：醋酸=3：1） 、改良石炭酸品红、重铬酸钾溶液 四、实验步骤 1浸种催芽 将实验用蚕豆种子按需要量放入盛有蒸馏水的烧杯中，在 25下浸泡 24 小时。种子吸胀后，放入培养皿中，用棉花保持湿度，在 25温箱中催芽三天。 （具体的按蚕豆发芽情况确定实际天数） 2花露水处理 每一处理选取 3 粒初生根良好、根长较一致的种子。将蚕豆根置于不同浓度（25、50、75溶液及原液）的花露水培养 6 小时，第二组分(来自: 小 龙 文档网:微核报告模板)别用自来水（或蒸馏水）以及重铬酸钾

4、溶液处理作对照。3根尖细胞恢复培养 处理后的根尖用蒸馏水浸洗三次，每次 23 分钟。洗净后置入培养皿，25下恢复培养 24 小时。 4根尖细胞固定 剪取 05lcm 长根尖，蒸馏水清洗后，放人卡诺固定液中固定 8h 5制片（解离、染色、压片） 用蒸馏水浸洗固定好的幼根两至三次，每次 3 分钟，吸去蒸馏水，加入1mol/L 盐酸将幼根浸没，于 60水浴解离 10 分钟，使幼根软化。然后吸去盐酸，用蒸馏水浸没清洗幼根三次，每次 12 分钟。在凹面玻片内滴加改良石炭酸品红染液，染色 10 分钟，制片前取出置载玻片上，截下 12mm 左右长的根尖，滴改良石炭酸品红染液，加上盖玻片，覆一层吸水纸，用解剖

5、针或镊子垂直敲打，然后以拇指垂直紧压盖片（注意勿使盖片搓动） ，使材料分散压平，便于观察。 6.镜检及微核识别标准 常规制片后，将玻片标本放在显微镜的低倍镜下观察，找到分生组织区细胞分散良好、核膨大、分裂相多的部分转到高倍镜下进行观察。 五、微核识别标准 （1）在主核大小的 1/3 以下，并与主核分离的小核。（2）小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。 每一组处理观察 3 个根尖，每个根尖计数 333 个细胞中的微核数并进行记录 ，并且计算出各个组处理的蚕豆根尖微核千分率（MCN ）并与蒸馏水及重铬酸钾对照组相对比。 六、注意事项和存在疑问 1、为什么选用蚕豆根尖

6、作为实验材料？ 2、在蚕豆根尖细胞的微核测试中，为什么要进行恢复培养？ 3、如何减小花露水不必要成分对于微核诱导的影响？4、为什么可以从对蚕豆的微核诱导推断对人的影响？篇二：遗传实验报告微核检测环境中诱变物质的微核检测 摘要：微核是间期细胞的细胞质中一个或多个圆形或杏仁状结构，是染色体发生畸变的另一种表现形式，微核发生率用来反映诱变物质对生物的遗传危害程度。本实验以大蒜根尖作为实验材料，分别以清水和一定梯度的叠氮化钠溶液作为阴性对照和阳性对照，用一定梯度的咖啡溶液和电池浸出液对实验组大蒜根尖进行诱变。最后卡诺固定液进行固定、用改良苯酚品红染色、压片后观察统计各组的微核千分率，从而了解微核检测的

7、方法和意义以及通过检测评价环境中常见物质的诱变情况。 1. 引言 微核是间期细胞的细胞质中一个或多个圆形或杏仁状结构，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。微核是染色体畸变的一种表现方式。许多能引起染色体断裂的理化因素，如辐射、化学诱变剂等，均可作用于分裂细胞而产生微核。目前研究表明，微核发生率同作用因子的剂量呈正相关，微核发生率来反映诱变物质对生物的遗传危害程度。 微核试验是一种建立在细胞水平上分析DNA 损伤的技术。该技术以其经济、简便、快速、敏感、特异、准确等特点，成为检测致突变剂和环境污染物等经典的短期试验方法。目前许多国家和国际组织将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品等

8、毒理性安全性评价的必做试验并用于染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。本试验采用大蒜作为试验材料，具有许多优点： 用鳞茎进行无性增殖，避免了有性生殖过程中的遗传性变异，具有遗传背景稳定的优势； 分布广、材料易得，不受地区和季节的限制； 培养方便，操作简单，蒜瓣去皮后将基部浸入净水中即可萌生新根，无需其他条件，且蒜瓣体积较小，萌生新根的数目较多； 价格低廉，对诱变剂敏感，是一种理想的试验材料。 近年来，由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出，日常生活中人类接触到的有潜在遗传毒性的物质越来越多，其中一个较为突出的就是废旧电池的污染。废旧电池中的化学物质不断渗透在环境中，其

9、污染将持续若干年，直接或间接的影响人们的身体健康，造成很大的危害。 咖啡的主要成分为咖啡因。德国生态学okeo-test的研究人员发现，他们所检测的所有 24 种品牌的研磨咖啡和 7 个品牌的浓咖啡中都含有致癌物质丙烯酰胺。检测结果发现，丙烯酰胺也存在于煮熟的咖啡中。绝大多数研究均表明咖啡与膀胱癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等癌症有一定的关系。 为了研究电池浸出液和电池咖啡是否真正具有诱变致癌作用，本次实验通过用咖啡和电池浸出液进行大蒜诱变培养，在阴性和阳性对照设计下，计算其微核率，通过微核检测技术评价咖啡和电池浸出液的诱变情况。 2. 实验材料与方法 实验材料 材料：大蒜 器材:培养皿、单面刀片

10、、双面刀片、Eppendorf 管、油性记号笔、显微镜、载玻片、盖玻 片、镊子； 试剂：冰醋酸、无水乙醇、1M HCl 溶液、100mmol/L NaN3 溶液、电池内部粉末、雀巢速溶 咖啡粉末，改良苯酚品红。实验方法 取材 选取生长良好、大小相对一致的大蒜，剥成一瓣瓣后置于放清水的培养皿中。于 24 水中浸泡 24-36 h,选择根长整齐一致，不定根长约1cm 左右的大蒜随机分组。 处理各实验组 将实验材料分为六组，放入 8ml 不同成分的培养液中，其中 1 组为阴性对照组，培养液为清水；2、3 组为阳性对照组，培养液分别为 25mmol/L、50mmol/L NaN3 溶液；58 组培养液

11、分别为/ml 浓度的咖啡和 g/ml 浓度的咖啡以及分别添加和的电池内部粉末。将培养皿中置于 20 摄氏度左右室温下培养 24h。 表 1 实验组浓度梯度的设定 也可以设定时间梯度，检测微核的形成情况。实验组如下 (实验组采用的诱变剂是 NaN3，既是实验组，又是阳性对照组) 表 2 实验组时间梯度的设定 固定 卡诺固定液中固定 24 小时，如不立即检测可移至 70%乙醇中 4下保存。 制片 根尖用 1MHCl 处理的 10min,水洗 3 次。 切取近根尖分生区的伸长区组织， 用改良苯酚品红染色 10 min。 压片：加上盖玻片后，用铅笔轻敲使细胞分散，最后垂直压下去。 镜检 每个根尖计数

12、1000 个细胞，统计含微核的细胞数，然后取平均值，即为该处理的微核千分率。 结果 实验结果图 图 1 含微核的细胞（10*40）图 2 含微核的细胞（10*40） 图 3 1 组（10*40）图 4 2 组（10*40） 图 5 3 组（10*40）图 6 4 组（10*40） 图 7 5 组（10*40）图 86 组、7 组（10*40） 实验结果分析与统计 图 1、2 中可以看到含有微核的细胞，这些细胞都有以下特征：（1）在主核大小的 1/3 以下，并与主核分离的小核。 （2）小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。 图 3-8 分别为 1-6 组的其中一个视

13、野结果图。其中，图 3 中为清水组，没有微核的出现，但是由于加入的染液太多，使得背景呈现紫红色。图 47 视野中均有微核的出现：图 4 的视野中的某些细胞由于敲片力度过大导致细胞破裂；图 5 为 50mmol/l 的 NaN3 溶液，可看到溶液中几乎全是微核，说明 NaN3 诱导微核的能力很强。图 5 与图 6进行对照，可看到咖啡的确具有一定的致癌作用，并且浓度越高，致癌作用越强烈。 图 8 为加入电池内部粉末的实验组，从图中可以看出，没有存活细胞，细胞均死亡，只留下细胞壁。说明我们加入的电池粉末浓度太高，已将细胞全部杀死，不能检测微核的千分率。 数据分析如下： 表 3 实验数据分析 根据数据

14、我们发现，咖啡存在一定的致癌率，但致癌作用要弱于 NaN3。随着咖啡浓度的升高，微核率也相应增多。由于实验设计存在一些问题，根尖的数量相对较少，实验组的浓度梯度设计的不够多，所以仅根据本次实验无法得出微核率最大的咖啡浓度，只能进行定性分析。 而电池浸出液对照组，因为我们加入的电池粉末太多，导致电池浸出液浓度太高，极大 地影响了大蒜根尖的生存，导致他们均死亡，无法检测电池粉末对微核的诱变作用。3.讨论 实验分析 微核是由有有丝分裂过程中的染色体断片，或丝分裂后期丧失着丝粒的染色体产生的，这些染色体可以使一条，几条染色体也能形成微核。这些断片或脱离的染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主

15、核，当子细胞进入下一个分裂间期时，它们便浓缩形成主核之外的小核，即形成了微核。 微核的判定标准：凡主核大小的三分之一以下的小核；小核着色不论深浅；小核形态可以是圆形，椭圆形，不规则形；小核可以与主核分离，与主核有丝或蒂相连，与主核相依，但各自轮廓楞楚的都可作为微核计入，但须注意不要将染色中心当作微核计入。 我们找微核时应注意找的根尖区域。由于进行了恢复培养，形成了微核的细胞应处于靠近分生区的伸长区中，压片观察此区域中的细胞呈正方形，或稍偏长方形，若观察到细胞明显拉长，且细胞核呈长条状的细胞，则为伸长区细胞。 对根尖进行压片观察，清水作为阴性对照组，没有观察到微核，可推测无诱变作用或诱变作用很弱

16、；已知 NaN3有很强的诱变作用，所以用 25、50mmol/l 的 NaN3 作为阳性对照组，其中 50mmol/l 的 NaN3 的根尖压片中可观察到大量微核，其数量是所有实验组中最大的，其千分率几乎为 100%。实验组分别用不同浓度的咖啡溶液进行处理，由表中数据可看出，咖啡有诱变作用。且由四组和五组的微核率可以看出，微核发生率同作用因子的剂量呈正相关。这也警示我们日常生活中要少喝咖啡；而电池浸出液浓度太高，已将根尖细胞完全杀死，我们失败的原因是设计实验之前未充分的阅读文献，导致我们的梯度设计的不够合理。这也提醒我们做实验时实验梯度必须谨慎设计，太高会抑制细胞的活动，使细胞分裂活动延缓或终止停止，甚至死亡，以后的实验设计中必须牢记这一点。 从实验数据来看,我们组的微核率普遍偏高,这也反映了我们组没有合理的设计实验梯度,设计的浓度普遍偏高,没有差异,这也为我们提醒了日后独立设计实验时,必须充分阅读资料,制定合理的梯度. 从图中可看出，此次实验压片效果不是很好，